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Steven Finkbeiner Departments of Neurology and Physiology UCSF Protocol note: hood scgedule for day of transfection: - 6h gap - CELLS: Polylysine coat plates. add 5ml polylysine per 100mm plat ...

Principle: Lymphocytes are transformed to establish cell lines. Mononuclear cells (lymphocytes) from anticoagulated venous blood are isolated by layering onto histopaque. During centrifugation eryth ...

Chen-Ming Fan LabCarnegie Institute of Washington Prepare cell lysate as you would for Luciferase assay. Take 50uL of lysate and dilute with 100uL of 1X Reporter Lysis buffer (brown bottle at room ...

Seed cells at appropriate density (5x104/well for 3T3 MPAC BHK; 5x105/well for aTC1.6 bTC3) one to two days before transfection. Combine total DNA at 1ug /well with 600ul/well serum-free medium in an ...

Transfect 5 ug of the desired plasmid to the desired adherent cell line. Transfect in parallel GFP and carrier DNA (total of 5 ug). 48hrs after transfection check for transfection efficiency. Takin ...

一、基本概念 (一)基因导入(或基因转导) 将外源性基因(或基因组DNA)采用分子生物学技术人工地导入细胞，观察它在细胞中的表达，研究其生物学特性和功能，这种把基因导入细胞中的技术称为基因转导(gent transfer)或称基因转移，也简称为导入。是研究基因表达、结构和功能的重要研究手段。 (二)基因转导的种类： 目前基因转导技术很多，可根 ...

PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量。模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要。模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败。而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等)。除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高模板核酸的产量。 传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS ...

Nature of the Insert The cloning of PCR-amplified fragments into a linear vector is typically a rapid and efficient process. However not all PCR fragments will clone with the same efficiency into the ...

A commonly used PCR buffer includes only KCl Tris and MgCl2 (for examplePerkin Elmer Cetus);a somewhat more complex buffer was previously proposed for multiplex reactions of the DMD gene exons (Chambe ...

Materials: sterile water 10X amplification buffer with 15mM MgCl2 10 mM dNTP 50 μM oligonucleotide primer 1 50 μM oligonucleotide primer 2 5 unit/μl Taq Polymerase template DNA (1 μg genom ...

Polymerase Chain Reaction 1) Add the following to a microfuge tube: 10 ul reaction buffer 1 ul 15 uM forward primer 1 ul 15 uM reverse primer 1 ul template DNA 5 ul 2 mM dNTP 8 ul 25 mM MgCl2 or MgSO4 ...

抗原修复主要用于福尔马林或多聚甲醛固定的石蜡包埋组织切片。 1、抗原热修复 （1）高压热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01 M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗 ...

免疫细胞化学技术在继续改进和完善中，新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外，80年代，新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章叙述，本节仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法（Hapten –Coupled techniques）】 近年来，为提高敏 ...

如何获取与组织细胞功能相关的各种定量测量信息是免疫组织（细胞）化学的一大难题。制作免疫组织（细胞）化学标本环节较多，只要有一个环节失误就会影响实验结果，除了需要精制的药品外，还需要熟练的技术。那么，做成理想的标本后，如何进行观察才能获得尽量多的的各种定量信息，而且使这些信息能较客观的反映出来，这就是本文的写作目的。 一、定量分析的重要性 目前有许多研究免疫组织（细胞）化学的文章，是做定性和定位研 ...

一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究 ...

一、氨基酸分析方法分类 氨基酸分析按其分离和检测方法的不同可分为三大类型。第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）。第三类是阴离子交换分离直接安培法检测 ...

Introduction Quality is important in all aspects of tissue culture since the quality of materials used i.e. media and other reagents) will affect the quality of the cultures and products derived from ...

农业方面 培育农作物优良品种 在培育农作物优良品种中，需要考虑产量高，对土壤、水分、气候等适应性强，同时也要着重考虑提高种子中蛋白质氨基酸的含量。实验证明，赖氨酸和色氨酸与动物的生长发育有很大关系，动物缺少色氨酸及赖氨酸，体重将逐渐下降，增加色氨酸后就可以维持其体重，若再增加赖氨酸则体重增加，生长发育正常。因此在遗传育种研究中，如何进一步提高谷类作物的蛋白质含量及改善其氨基酸组成是很重要的科研课 ...

显微镜是生物实验室最为常用的仪器之一，配备量比较大，一般是2到4人一台，条件好的学校是每人一台。因此正确选购显微镜很重要，不但能满足需要，还能避免浪费经费。 1 、一般结构 显微镜是耐用品，一般可用数年，甚至10多年，高质量的零部件和严密的装配是使用寿命的保证。因此，应选择具有稳固结实镜架的显微镜，材料最好是合金的，以减少变形。塑料制的显微镜不适合学校使用。除此之外，还应切记，镜头应是光学玻璃的， ...

1. Dilute 2 ml of 4000 U/ml Collagenase D as follows: 1 ml into 9 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=400U/ml) and 1 ml into 39 ml HBSS/Ca2+/Mg2+ (=100U/ml). Put on ice. 2. Place 5 ml of the 100U/ml solution in a 10 ...