Acid Washing Beads Peter Novick Lab Department of Cell Biology Yale University School of Medicine http://info.med.yale.edu/cellbio/Novick/Second/Protocols/AcidBeads.pdf Materials: 1) 0.5 mm glass bead ...
The Preuss LabThe Division of Biological SciencesThe University of Chicago. http://preuss.bsd.uchicago.edu/protocols/enzyme.html ...
Preparation of electroporation cells 1. Prepare an overnight of NM522 in minimal medium. 2. Inoculate 1L LB with 10ml (1/100th vol) of the overnight and grow to A600 = 0.5- 1.0. 3. Pellet cells 5krpm ...
Growth and storage of Agrobacterium tumefaciens Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3 ...
重组DNA技术是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一。即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。 重组DNA技术（Recombinant DNA Technique）是人类根据需要选择目的基因（DNA片段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的。 这一技术的发展和应用，关键在于限制酶的发现和应用。 一、限制酶 限制性内 ...
(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) Typically 2.5 - 3 volumes of an ethanol/acetate solution is added to t ...
DNA是通过异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin，Dig）配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物结合，接着在5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐（X-磷酸盐）和硝基四氮唑蓝（NBT）存在下，由酶催化反应，在杂交部位形成蓝紫色带或颗粒 ...
实验原理: Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物（如硝酸纤维素膜、尼龙膜）上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将单链核酸转印到硝酸纤维膜上，烘干、固定。 试剂和器材 一、试剂 变性液：1.5mol/L NaCl ...
碱法提取的质粒DNA即使用RNA酶处理，仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA制品时，则需进行进一步纯化。一般常用Sepharose 2B或Sepharose 4B进行纯化，该方法具有快速，条件温和，重复性好，载体物质可以再利用等优点，因而已广泛用于质粒DNA纯化。 1、将Sepharose 2B经含0.1% SDS的TE（pH8.0）平衡后上柱。 2、将至多1ml的DNA溶液铺 ...
1、将已经电泳确定的可回收的酶切产物在合适浓度的回收用琼脂糖凝胶进行电泳。最好换用新的电泳缓冲液10 × TAE（10 ×Tris-乙酸）。 2、当溴酚蓝迁移至足够距离时（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。 注意： ①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。 ②小心不要将回收胶切裂，同 ...
TaKaRa的内切酶和NEB的内切酶哪个更好一些？ 参考见解： TaKaRa的内切酶、NEB的内切酶两个公司的酶的品质都非常好。NEB公司的酶的活性很高，切出两条小带可能是因为出现星活性，可以试试把酶量减半。NEB的酶很多都是克隆的，所以纯度比较高。 应用磁性微球提取人全血基因组DNA，将提取出的DNA直接用于限制性酶切反应，应用Taq1酶，但发现酶切后产生的是smier片断，即切碎的状态。不知 ...
一、概述 ...
【基本原理】 此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。 使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。 【器材】 1．离心机 2. Spin Column 3. Collection Tu ...
在已知基因部分核苷酸序列或全部核苷酸序列的情况下，基因的制备方法主要可分为两大类：一类是基因化学合成法，一类是基因生物制备法。一般又可将基因生物制备法分为文库法、cDNA 文库法和PCR法等。 1 化学合成法。 就化学本质而言，基因是一段具有特定生物功能的核苷酸序列。如果知道了基因的分子结构，就可以进行基因的化学合成。有关DNA 的化学合成方法主要有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、亚磷酸酰胺 ...
7.1. ...
1) 取10μl待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL，1.0%凝胶) 2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号， 拍照记录电泳结果(拍照时， 凝胶旁放一尺子)。 3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一) A. 将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。 B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。 C. ...
临床医生了解基因诊断质控指标的含义，对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。 1．灵敏度 简单地说，灵敏度就是检测的最小值。一般来说，我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地，病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒颗粒或其他任何一个病原体；免疫学检测时，能测出一个抗原或抗体分子，等等，但这些通常都很难做到。然而基因检测则能达到这个理想境界，但在临床实践中，我 ...
This kit contains materials for six groups to perform Southern transfer and hybridization analysis using the included lambda DNA samples and biotinylated probe. The intellectual objective of the exper ...
1.Excise DNA section from gel into eppendorf tube. 2.Add 2-3 volumes of NaI (NaI for geneclean - dissolve 89.9 g NaI in 100ml dH2O store in light proof bottle) solution to gel fragment (best to be on ...
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