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DNA Isolation by a Cleared Lysate Method Followed by Double Acetate Precipitation Version 3b - updated September 26 1999 The Most Recent Roe Lab Implementation (by Feng Chen Hau-Qin Pan and Fu Ying) A ...

Gene cloning or recombinant DNA technology is the joining of two or more segments of DNA to generate a single DNA molecule capable of autonomous replication within a given host (1). Ligase enzym ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples. Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation. Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM ...

Recovering DNA from agarose gels Paul N. Hengen Ph.D. (July 14 1999) Introduction Methods and reagents is a unique monthly column that highlights current discussions in the newsgroup bionet.molbio.met ...

1) Use Pharmacia #27-4564-01. With clean flamed scissors and forceps weigh 0.25 g/50 ml conical and add 50 ml/conical of 0.02 M Tris pH 7.6. Allow to dissolve over several days at 4℃. 2) Vortex. Draw ...

H. Simmler and H. Singpiel Acconovis GmbH Lindenhofstr. 42-44 68163 Mannheim Germany eMail: simmler@acconovis.com R. M¨anner Universit¨at Mannheim B6 23-29 68131 Mannheim Germany maenner@ti.un ...

作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意——两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点连在一起，必须先切一个再切另一个，否则就切不动——因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个 ...

一、实验目的 ： 1、 掌握质粒DNA 分离，纯化的原理 2、 学习煮沸法快速提取质粒DNA 的方法 3、 学习DNA的限制性酶切的基本技术 4 、 学习利用琼脂糖电泳测定DNA片段的长度 二、实验原理 在基因工程中，DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的DNA 序列，在一定的条件下切断双链DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓 ...

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1，根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2，尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3，保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓 ...

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段 ...

MassPREP自动酶切仪操作步骤 一 开机前检查： 1 检查仪器台面（DECK）上所有的实验材料（Labware）。 2 检查SystemWater 水桶的水位。 3 检查恒温循环水浴（Chiller）水箱的水位，并定期更换或填充Chiller 中的循环水。 4 倒掉废液桶中的废液。 二 开机步骤： 打开Chiller、Heater、仪器及计算机电源，进入WinPREP程序 ： 1 仪器初 ...

辐射性杂交(radiation hybrid RH) 制图技术是1975 年由Goss 和Harris 创立的一种体细胞杂交技术，适用于构建人类基因组长范围内的高分辨率连续物理图谱。成熟的辐射性杂交制图技术是由Cox VR 等人于1990 年建立的。 1 ．原理 利用高剂量的X 射线将候选染色体打断成若干片段，含有这种片段的细胞可与仓鼠细胞形成杂交克隆。在这种杂交中，人类染色体片段被插入到仓鼠染 ...

一、目的与原理 转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。 二、材料和方法 1.材料：大肠杆菌 2.仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3.试剂 LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TF ...

一、目的： 了解分离提取DNA的一般原理，掌握从动物肝脏中提取DNA的方法。 二、原理： 在浓氯化钠（1—2mol·L-1）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠（0.14mol·L-1 ）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提 ...

一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质 ...

原理： 转化(Transformation )：将外源DNA 分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株，不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-M-)，可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法，如电击或CaCl2 、RbCl/KCl等化学试剂的处理后细胞膜的通透性增高，成为感受态细胞(Compenent cells)， ...

影响因素 1.肿瘤标志物具有特异性和非特异性的双重特点。 2.各种肿瘤特性的不同，如肿瘤的分期、大小、定位、组织来源及转移趋向等的不同。 3.各种抗体的不同，如多克隆抗体、单克隆抗体、抗体决定簇和抗体亲和性等的不同。 4.各种检测系统的不同，如检测原理、标记物、实验条件、检测技术、检测仪器和检测敏感度等的不同。 5.检验人员的专业水平和技术经验、以及实验室条件和实验的可靠性等的差异。 ...

一、 目的 熟练掌握抽提细菌DNA的一般方法 二、原理 要进行重组DNA 实验，就离不开外源基因的纯化，而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备，所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要，抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种，这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提；另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备。 基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子 ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类 可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类 ①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印 ...

载体及目的DNA 片断经酶切后，如果无多余的片断（如载体单切）可以直接酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收直接连接用。但多数还有多余片断（如载体双酶切后有插入片断但要回收空载体，多个目的DNA片断选择其一克隆），必须电泳分离后回收目的片断。回收的方法既有传统的方法，这些方法基于降低凝胶的熔点以释放DNA，然后通过酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收，也有公司生产的商品化的试剂盒可用，这些试剂盒多采用凝胶裂解液（如含有 ...