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Q: 怎样对合成DNA制品进行定量? A: DNA的量与260 nm处的吸光度值（OD值）成正比，因此使用紫外分光光度计定量是最科学的。1个OD值的合成DNA的重量约为33 mg。 Q: 怎样理解测定的OD值? A: 进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。当测定200 ml溶液中的OD值为1.5时，溶液整体的OD量应该为多少？此时的OD值 = 1.5 OD/ml &ti ...

DNA分子的体外连接就是在一定条件下， 由DNA连接酶催化两个双链DNA片段组邻的５’端磷酸与３’端羟基之间形成磷酸酸脂键的生物化学过程， DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的。 带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中，但是在连接反应时，外源DNA和质粒都可能发生环化，也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接 ...

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根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。 10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。 肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B ...

一、目的与原理 当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。 二、材料和方法 1． 材料：大肠杆菌 2． 仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3． 试剂 LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴 TFB ...

【基本原 ...

一、实验目的 学习和掌握DNA的微量提取法。 二、实验原理 小麦黄化苗经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如SDS），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用SDS法，其主要作用是破膜。SDS属阴离子去污剂，要溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。SDS在溶液中带负电荷，能与带正电荷的蛋白质侧链结合成复合物，当加入钾盐时，能与SDS－蛋白质生 ...

・CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2 溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 ...

实验步骤： 1、将适合菌株（如XL1-Blue DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37℃下过夜培养 。 2、高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）。准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备重悬浮细胞用 。 3、转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中 。 4、37℃下剧烈振荡培养2-6小时。 5、定时监 ...

差减杂交法是目前广泛应用于差异性基因分离和鉴定的方法之一。简单地讲，差减杂交法是基于不同样品间特定核酸序列 ( 基因组 DNA 或 mRNA) 在数量 ( 等位基因数目或拷贝数或表达量 ) 上的差异，通过分子间的同源性杂交将存在数量差异性的序列分离出来。从研究对象和使用的基本材料来看，大致可以分为两类，即基因组差减杂交法和 mRNA 或 cDNA 差减杂交法。 1 ．原理 就是将不同来源的基因组D ...

原理： 此技术建立于PCR基础之上，使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物，对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此须对每一随机引物单独进行PCR。 单一引物与反向重复序列结合。 使重复序列之间的区域得以扩增。 引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异，经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶 ...

试验原理： 煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度， DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切，应选用该酶 ...

1.PCR技术 PolymeraseChainReaction聚合酶链反应 它是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四种dNTP的情况下，通过高温变性（90℃－95℃，1－2min）低温退火（25℃－37℃，1－2min）中温延伸（60℃－75℃，90sec-5min）这样反复循环的过程中，在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。 1）、PCR反应 ...

1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels) 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH 1.5 M NaCl) for 20' (small) to 30' (large). 3. Neutralization: Wash in ...

Steve Hahn ...

1. Grind 20-50 frozen flies with a mortar and pestle in N2(l) and suspend in 2 ml Lysis Buffer. 2.Add Proteinase K to 100 mg/ml; incubate 1-2h @ 37℃ with occassional swirling. 3. Phenol extract GENTL ...

Protocol written by James Hermaundefined Methylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of ...

Materials: phenol:chloroform (1:1) chloroform 1.Add an equal volume of buffer-saturated phenol:chloroform (1:1) to the DNA solution. 2.Mix well. Most DNA solutions can be vortexed for 10 sec except f ...

CpG islands can be variable in length. Anyone know by what percentage range they can typically vary? I can't find much of any herlp on Google. Cheers Chris -Chris Harris- ---------------------------- ...

-Elaine Pinheiro and Aurora Burds Connor MIT Jan2006 This protocol works very well with Hybond-XL membrane from GE Healthcare (formerly Amersham). 1) Digest your genomic DNA using about 10 μg per r ...