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Hi everyone i'm looking for a good southern blot protocol with all the secrets of this technique. I never did it but I know is not too difficult. I'd like a protocol that show me the "way to do& ...

Higuys : I have a problem about mutagenesis. I want to mutate 2 base pairs in plasmidand use stratagenne mutagenesis protocol.Design 2 oligos as primers.After I run PCR I only see one band less than ...

This is a four day procedure so it's best to start on Monday or Tuesday. CASE SELECTION: H&E stained thin sections are first reviewed by a pathologist and areas of interest are outlined. Tissue bl ...

Inoculate 1 ml of L-broth or other rich media with cells of the strain from which genomic DNA is to be isolated. Grow this culture at 37℃ overnight on a roller. Transfer this overnight culture to a 1. ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) Restriction enzyme digestions are performed by incubating double-stran ...

1.Take the 384 well viper plate from the thermocycler. Remove the Silicone Sealing Mat (Axygen Scientific: AM-384-PCR-RD) and place face down on a paper towel and pat to absorb any liquid that may be ...

GEL PURIFICATION OF OLIGONUCLEOTIDES (Adapted from the method of Mark Fortini) 1. Quantitate crude oligo solution via UV spectrophotometry. Assume 1.0 A260 unit is equal to 33μl/ml. Dry down 100&mu ...

随机扩增多态DNA (Random Amplified Polymorphic DNA ，简称RAPD)是J.Williams和J.Welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种随机引物扩增，寻找多态DNA 片段的遗传标记技术，它是建立在PCR技术基础上，以随机的寡聚脱氧核苷酸作为PCR反应引物，对基因DNA 进行扩增而显示DNA 图谱和对物种进行亲缘关系、系统发育分子水平的鉴别，以及分子生物学 ...

分子诊断技术在检验医学的基础和临床研究中显示出强大的优势，例如，在乙型肝炎的诊断和治疗中，应用DNA定量技术为乙型肝炎的治疗和预后监测提供了重要依据，但近近不无症状乙型肝炎表面抗原携带者及乙型肝炎表面抗阴性者的人群中检出了前C终止密码子变异（G1896A）。研究表明，突变将导致乙型肝炎病毒继续复制，因此这一信息对于临床诊疗十分重要。又如庆大霉素等氨基糖苷类抗生素的毒副作用之一是诱发耳聋，且已证明线 ...

定位克隆（positoinal cloning），又称图位克隆（map-based clonig），1986年首先由剑桥大学的Alan Coulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因，并单明 ...

报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。 作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在， ...

常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 转化，是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域 ...

实验目的 要获得表达的基因AKP，必须构建重组子。 我们通过以下的方法构建重组DNA，转入受体菌，就可以表达出目的基因。 之所以重组子要进入细胞，是因为大肠杆菌中有修饰的机制，可以在转入表达载体时不被降解，高效表达。 实验原理及过程 ...

DNA微阵列技术（m ...

Chapter 4 replication DNA replication DNA damage and repair Reverse transcription RNA replication DNA复制的基本特点 半保留复制(self-conservative replication) 复制子(replicon) 半保留复制 1958年Meselson 和Stahl首次用实验证实了DNA的半保 ...

一、目的: 了解质粒抽提常用的方法和原理；掌握试剂盒制备质粒DNA 的法。 二、原理： （一）质粒DNA 制备三个步骤： 1、细菌培养与质粒扩增 2、菌体收集和溶菌 3、质粒DNA分离 （二）方法介绍： 1、碱变性抽提法（SDS法）:主要是利用染色体DNA和质粒DNA碱性环境中变性和复性的差异来分离出质粒DNA。染色体DNA 分子量比较大，在碱性环境中（高pH）变性，双链解拆开，抽提时由于机械剪切 ...

一、个体识别 个体识别以同一认定理论为指导原则。通过对物证检材 的遗传标记作出科学鉴定，依据个体特征来判断前后两次或多次出现的物证检材是否同属一个个体的认识过程。第一次出现的往往是与案件事实有联系，并且是在案发现场留下该个体的生物检材，如血痕、精斑等。是未知个体，是要查找的对象，称“被寻找个体”。 个体第二次出现一般是侦查或调查活动的结果，第二次出现的个体一般是已知身份的 ...

采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓 ...

一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。另一类是生物介导的转化方法，主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。 二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的Ti质粒与 ...

摘要：通过PCR，从E.coli K12 Y1090株系中扩增获得glgC基因，插入pUC19的PstI和SacI 位点之间，得到重组质粒pAGP。对所克隆的glgC基因进行全序列测定，结果表明，与已发表的序列相比，有7个核苷酸发生了改变，核苷酸顺序的同源性为99.4 %; 推导的氨基酸序列的同源性为99.2 % 其中，第296位由赖氨酸变为谷氨酸。通过寡核苷酸介导的定点诱变，将第1007位核苷酸 ...