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PCR (Polymerase chain reaction) 是用一对寡聚DNA作为引物，通过加温变性－退火－DNA合成这一周期的多次循环，使目的DNA片段得到扩增。由于这种扩增产物是以指数形式积累的，经25－30个循环后，扩增倍数可达106。Dr. Karry Mullis 1985年发明，获1993年度诺贝尔化学奖； （二）基本要素 1、Taq DNA聚合酶： 水生栖热菌(thermus a ...

细胞培养需要注意无菌操作、实验用品等及细胞培养的简单步骤。

一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。 何谓PCR 简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试 ...

脂肪源干细胞的培养的准备和步骤。

1、导论 多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction PCR）是美国Perkin-Elmer/Cetus公司人类遗传研究室Mullis K. B.等人于1985年发明的一种快速体外DNA片段扩增技术，是八十年代分子生物学资源领域的一项革命性突破，被誉为分子生物学资源发展史上的又一里程碑。该技术一问世，就在分子生物学、医学、生物工程、法医学、考古学等领域得到快速而广泛的应用， ...

1、问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因： 1）RNA被降解 建议解决方法： 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA； 在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA； 如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8mM ...

Recommended Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn Target DNA: 1 ng - 1 ug ...

Cloning PCR Products T-A Cloning Strategy: Taq and other polymerases seem to have a terminal transferase activity which results in the non-templated addition of a single nucleotide to the 3'-ends of P ...

Labelling PCR Products with Digoxigenin PCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating the reagent to 10-35% final effective dTTP concen ...

1．主要试剂 (1)羊抗人C4抗血清：按说明书所示单扩效价扩大2—4倍稀释，或分别用含不同浓度抗体的琼脂糖凝胶浇板，选择峰高、清晰度适当的抗体浓度为最适工作浓度。 (2)羊抗人B因子抗血清：按说明书所示单扩效价扩大3—5倍稀释，也可按选择C4抗血清稀释浓度的方法确定最适工作浓度。 (3)电泳缓冲液：称取10．30g巴比妥钠，1．83g巴比妥，溶于1 000mL蒸馏水中。此液 ...

根据世界卫生组织(WHO)和国际免疫学会报告，30多种补体成分中通常只需检测C3、C4、Clq、B因子和C1酯酶抑制物等5种成分。 测定方法大致可分为免疫溶血法和免疫化学法。免疫溶血法主要根据抗原与其特异性抗体(1gM、IgC型)结合可激活补体经典途径，导致细胞溶解。抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗体，即溶血素。二者在反应体系中称为指示系统。 使用的补体有两种，一 ...

循环免疫复合物(CIC)的检测方法大致可分为两类，即抗原特异性方法和抗原非特异性方法。前者通过区别游离的抗原和与抗体结合的抗原，选择性测定含有某种特定抗原的IC。在已知由某种抗原引起的免疫病理反应的疾病中，可应用此类方法。 抗原非特异方法，则不考虑形成IC抗原的性质，根据免疫球蛋白分子在结合抗原以后发生的物理学和生物学特性的改变进行检测。由于体内形成的CIC可能涉及多种抗原—抗体系统。 ...

免疫复合物（IC）是抗原和相应抗体结合形成的复合物。正常情况下，体内产生的IC对人体是有益的，如病原体与相应的抗体结合形成的IC更易被单核细胞吞噬并清除。但如果IC因某些原因在体内不能被迅速清除，则会在局部沉积，激活补体，并在血小板、中性粒细胞参与下，引起一系列连锁反应。最后导致组织损伤，出现临床症状，称为免疫复合物病（ICD）。肝脏是产生单核－巨噬细胞的重要器官，绝大部分的IC形成后，均在肝内被 ...

抗原和相应抗体结合形成的物质称为免疫复合物，免疫复合物和补体、其他免疫活性物质结合，沉积在血管壁，可导致组织损伤及血管炎，引起一系列的疾病，如红斑狼疮，由于免疫复合物能在循环血液中检测到，故称之为循环免疫复合物。 循环免疫复合物的测定虽无特异性诊断意义，但对病情的活动性判断和指导治疗有一定价值，测定循环免疫复合物的方法很多，这里仅介绍临床常用的两种。 1、聚乙二醇法：循环免疫复合物与聚乙二醇作 ...

From: Molecular Biology: Current Innovations and Future Trends. Eds. A.M. Griffin and H.G.Griffin. ISBN 1-898486-01-8 1995 Horizon Scientific Press PO Box 1 Wymondham Norfolk U.K. In vitro site-dire ...

出生至断奶这一阶段的兔称仔兔。提高仔兔成活率，是提高养兔经济效益的重要一环。根据多年实践经验，要养好仔兔有以下几个方面： （1）饲养好带仔母兔，保持旺盛奶水，是养好仔兔的关键，俗话说：“养 好仔兔要有奶”。首先，分娩结束后，马上下班用人工拔光母兔腹部毛，使其奶头全部暴露出来，促使乳腺 通畅，分泌乳汁。根据理力争母兔体质，年龄，季节，泌乳等情况的好坏，调剂好只数，一般带仔4～ ...

The following colony PCR protocol has been designed to be performed in individual reaction tubes. We usually test three colonies from each transformation along with a wild-type control. A series of fi ...

一、睡眠期仔兔的饲养管理 （一）饲养方面 从仔兔出生到12日龄左右为睡眠期。睡眠期的仔兔，生长发育很快，初生体重仅50～60克，1周龄体重可增加1倍左右，10日龄体重可达初生重的3倍以上。因此，仔兔出生后应尽量让其吃上奶、吃足奶。特别是母兔产后1～2天内分泌的初乳，营养丰富而又具轻泻作用，有利于促进仔兔生长，排尽胎粪，养殖户应设法使仔兔尽早吃上。 （二）管理方面 睡眠期仔兔的管理要非常细致。实践表 ...

第二章 细胞生物学实验技术 METHODS AND TECHNIQUES 第一节显微技术 第一节显微技术 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。 电子显微镜：以电子束为光源。 一、光学显微镜 （一）普通光学显微镜 1、构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 2、原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。 3、分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。 R=0.61λ/N．A． ...

仔兔的死亡率较高，引起死亡的主要原因是饲养管理不当。因此，加强仔兔的科学饲养管理，对提高养兔经济效益十分重要。具体有五点关键措施。 1、早喂初乳，定时喂奶，喂足奶 仔兔出生后6～10小时内一定要吃到初乳，遇到不愿喂奶的母兔，应人工强制喂奶。做法是：将母兔固定在产箱或专门的哺乳箱内，由饲养员一手抓住母兔颈部，另一手抚摸母兔背部，使其保持安静，并将仔兔放到母兔乳头旁，让仔兔吸吮母兔乳头。连续几次后，母 ...