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标准的PCR实验室简介

1.主体结构 主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。 2.标准的三区分隔和气压调节 将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩 ...

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比较详细的PCR

1.PCR反应的最适条件 1.1 TaqDNA聚合酶 在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在370C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行,故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶,使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在370C,引物与DNA模板 ...

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幼兔和青年兔的饲养

幼兔 从断奶到90日龄的兔叫幼兔。 在家兔一生中,幼兔阶段最难养。因为幼兔抵抗力差,容易得病,死亡率高,饲养管理要特别小心。 在喂食上要作到少吃多餐,定时定量,饲料要少而精细。夏季要多喂些青嫩野草,按月龄大小,每天每只喂量250~500克。精料以麸皮、玉米面和各种豆饼类为主,每天每只喂量5~10克。 在管理上,要按体型大小分群饲养。每天应运动2~3小时。 青年兔 3~6月龄的兔叫青年兔。 这时家兔 ...

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免疫复合物的检测

免疫复合物在体内存在有两种方式,一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC), 一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。 在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。 一、循环免疫复合物的检测 根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性,已经设计出很多检测CIC的方法(表24-4), 本章只述及常 ...

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家兔饲养方式

笼养 笼养是指室内用兔笼养兔。兔笼的种类很多,有单层活动式兔笼、双联单层式兔笼、单间重叠式兔笼和双联重叠式兔笼等类型。前两种只能饲养少量家兔,后两种则能满足数量较多的饲养活动。 用兔笼养兔,管理方便,照顾周到,兔体也容易保持清洁,但家兔长期囚居笼中,无法活动,势必阻碍生长发育。应该经常将家兔放出笼外运动。 圈舍养 圈舍养是指在室外建造兔舍、并在兔舍四周筑围墙设运动场、使家兔自由出入于兔舍和运动场的 ...

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细胞系或细胞株的建立

一、概念 1、细胞系(Cell Line):原代培养舞经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)所组成。 2、细胞株(Cell Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell st ...

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Troubleshooting for PCR and multiplex PCR

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. ...

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肿瘤细胞培养

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

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聚乙二醇(PEG)沉淀实验检测CIC

聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的直链大分子多糖,可非特异性地引起蛋白质沉淀。沉淀具有可逆性,被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响。不同浓度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白质,在pH值、离子浓度等条件固定时,蛋白质分子量越大,用以沉淀的PEG浓度越小。由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性,所以在IC测定中主要采用PEG6000。 PEG使IC沉淀的机理可能 ...

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繁殖母兔饲养管理技术要点

空怀期 母兔给子兔断奶后到再配种,这段时期称为休情期,也叫空怀期。 在此期间饲养管理的主要任务就是使母兔恢复体力,补偿哺乳期间养分的大量消耗,为接受新的配种繁殖做好充分的准备。但此期一定要注意不能把母兔养得过肥,一旦卵巢沉积脂肪,就必将阻碍卵细胞的发育而影响母兔正常的繁殖机能,造成不孕。反之,若母兔过瘦,也会影响控制卵细胞生长的脑垂体的正常分泌机能,从而导致母兔不孕。由此可见,控制空怀母兔体况是很 ...

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细胞传代培养

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞:贴壁细胞株 2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清) 3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、 ...

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家兔养殖六技巧

一、防治仔兔黄尿病 在母兔临产前3天,对其注射大黄藤素针剂1支(含量20毫克),一次性臀部注射;也可在母兔产仔前3天对母兔皮下注射庆大霉素,每次1支(8万单位),每天2次,连续注射3天。 二、防止母兔吃仔兔 在母兔怀孕后,适当增加饲料中的矿物质含量;分娩后给足饮水;选择安静的分娩环境,并保持产仔箱卫生;在母兔产仔前喂给25克肥猪肉,如母兔不吃肥肉,可改喂鲜猪肝。这样,母兔就不会再吃仔兔了。 三、促 ...

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红豆杉的组织培养

红豆杉属于裸子植物,主要分布于我国的云南、四川、西藏和东北,是一类具有重要开发价值的树木,它产生的紫杉醇通过临床实验被认为是最有希望的抗癌药物。自然状态下,紫杉醇的含量极低,仅占树皮干重的十万分之一,靠自然资源解决这一问题十分困难。同时由于自然状态下红豆杉生长速度很慢,过量的人工采伐,使野生资源受到了极大的破坏,在一些产地已面临灭顶之灾,保护其野生资源和扩大药源已成为当前急需解决的矛盾。用播种育苗 ...

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细胞受体结合免疫测定CIC法

细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术,这类方法有灵敏度较高,特异性较强等优点,但需进行活细胞培养或细胞分离,影响因素多,重复性较差,目前仅适用于实验研究。此类技术有多种方法。 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤患者分离建株的B淋巴细胞系。可在体外连续传代培养,细胞表面没有膜免疫球蛋白,Pc受体的亲和力很低,但有C3、C3b和C3d受体 ...

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家兔繁殖

配种 繁殖家兔可从以下两种配种方法中选用一种。 (1)正常交配 正常交配是利用母兔的发情周期,使公、母兔自然交配繁殖。发情周期是指母兔性成熟后,出现发情,然后消失,经过一定时期又发情的周期性变化过程。母兔发情周期为8~15天,其中发情持续时间为3~4天。发情主要表现为:外阴唇红肿、湿润,举止不安,食欲减退,有的还衔草拔毛作窝。当外阴唇红肿稍紫时,正是发情旺期,容易交配,是配种最好时机。这时将母兔放 ...

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兰花的组织培养

法国人莫瑞尔(G.M. Morel)首先将组织培养的技术应用在兰花上,采取茎顶组织进行培养,经由类原球体而获得植株。 利用组织培养进行芽体增殖是另一个获取种苗的方法,例如,蝴蝶兰便利用花梗芽进行繁殖,这种方法的缺点是繁殖的效率较差,而且成本较高。由于芽体是经由多细胞发育而成,并不适合做为基因转殖的材料。以单细胞做为基因转殖的起始点是最好的方式,而且可以避免得到嵌镶体。不过,目前以细胞来复制兰花还 ...

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细胞原代培养

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃) 材料:胎鼠或新生鼠 试剂:1640培养基(含20 ...

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非洲菊组织培养快繁技术

非洲菊为多年生草本植物,传统的繁殖方法为播种或分株繁殖。但非洲菊种子寿命短、发芽率低,而且播种繁殖变异率很高,难以得到性状一致的种苗,因而不能用于规模生产;而分株繁殖则存在繁殖慢,易退化和传播病害,也不适于现代的大规模生产,因而目前国外一般都采用组织培养的方法来生产种苗。非洲菊的组培研究在国内已有报道,但均局限于对个别或少数品种的不同外殖体、不定芽诱导率及生长方面的研究,即局限于实验室阶段的研究。 ...

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影响家兔繁殖力的主要因素

环境因素 一切作用于家兔机体的外界因素,统称为环境因素,如温度、湿度、气流、太阳辐射、噪声、有害气体。致病微生物等。环境温度对家兔的繁殖性能有较为明显的影响。超过30℃,即引起家兔食欲下降、性欲减低。如果持续高温,可使公兔睾丸产生精子减少,甚至不产生精子。高温可影响公兔性欲,高温过后能很快恢复,但精液品质的恢复则需要两个月左右的时间。因为精子的产生到精子的成熟排出需要一个半月时间。这就是家兔特别是 ...

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马铃薯的组织培养

1、繁殖瓶苗 将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段,接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素MS固体或液体(可用纸桥)培养基的组培瓶中,置培养室内培养。培养条件为:光照1000-3000lx光周期13-16h/d培养温度(25±2)℃,空气相对湿度50%-60%,自然通风。叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。记录苗芽发生时间,生长状况,污染率。再按照上述方法重复进行扩繁 ...

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