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Recommended Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn &n ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。 常见的 ...

家兔的繁殖力较强，一只母兔一年可以繁殖数十只仔兔，一只公兔通过配种生产的后代更多。要保持和提高兔群的品质，关键是种兔的选择和正确的配种。 （一）选种 选种的一般原则是：公兔的雄性要强，如在配种时能紧抱母兔，甚至嘶咬母兔背部的皮毛；母兔的母性要好，如产仔前能衔草做窝，产仔后能定时给仔兔喂奶。无论公母兔一律要求体质健壮，发育正常，行动活泼，繁殖力、抗病力和遗传力都强的个体，才能留作种用。 （二）配种 ...

进入冬季，天气逐渐变得寒冷，对家兔的繁殖很不利，但只要管理得当，家兔的受胎产仔率、仔兔成活率都还会很高。搞好冬繁家兔，须注意以下几点： 防寒保暖 室内养兔应把兔舍的后窗和风洞加以严封堵塞，兔舍的门窗在夜间或风雪天气要关闭，防止贼风或暴雪的侵袭，同时还应注意通风换气，舍温尽量保持在10℃以上，并保持相对稳定，为保持舍内干燥，地面可撒些石灰、煤渣等吸湿物质；室外养兔，兔门也应挂好草帘，防止寒风或暴雪的 ...

细胞培养用的筛网的相关知识，单位的含义及其与相关单位的换算。

试验目的：血清分型 标本：出血热恢复期病人血清 材料： 1. 毒株：汉滩病毒标准株 76－118，汉城病毒标准株 Seoul。 2. 标准血清:兔抗汉滩病毒、汉城病毒血清。 3. 空斑减少中和试验常用试剂。 步骤： 1. 将待检血清用牛血清Hanks 氏液稀释成1：10，56℃灭活30分钟， 2. 进一步2倍稀释血清成1：20、1：40、1：80……，对照血清1：10稀释。 3. ...

1952年，Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，从而使病毒蚀斑技术 (Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。 (一) 原理　病毒感染细胞后，由于固体介质的限制，释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期，便形成一个局限性病变细胞区，此即病毒蚀斑。从理论上讲，一个蚀斑是由最初感染细胞的一个病毒颗粒形成的，因而该项技术常用于病毒颗粒 ...

血清中和实验既可用已知抗鸡新城疫病毒的血清来鉴定可疑病毒，又可用已知的新城疫病毒来测定鸡血清中是否含有特异性抗体，以确定鸡群是否感染过新城疫。中和实验可以在鸡胚或细胞培养以及易感鸡中进行。方法是，在鸡新城疫免疫血清(或待检血清)中，加入一定量的待检病毒(或已知病毒)，两者混合均匀后，接种10～11日龄的SPF鸡胚，或鸡胚成纤维细胞，或有易感性的鸡，并设立不加血清的病毒对照。结果注射血清和病毒混合材 ...

1．原理 用神经氨酸酶和羧肽酶B处理EDTA抗凝血浆，神经氨酸酶的作用主要是去涎，羧肽酶B能切除以分子。、p链C端的碱性氨基酸，去除以副带，将经过两酶处理后的EIJE4抗凝血浆进行高压电泳，然后与抗C4血清作用形成沉淀带，将其漂洗后用考马斯亮蓝染色，参照第六届国际补体定型会议C4定型标准或C4标准血清，判断以的同种异型。 2．所需试剂 (1)羧肽酶B(carboxypept ...

1．原理与方法基本上和C4高压电泳及免疫固定技术一致，样本不需经神经氨酸酶和羧肽酶B处理，电泳时直接加10uL EDTA抗凝血浆。凝胶板规格为125mmX260mmX3mm，电泳时电压控制在85mA，时间3～4h或血红蛋白迁移至离加样孔5．5em处时，停止电泳。用1：4或1：2稀释的抗Df血清(AtlanticAntibodiesTATB，USA或上海长征医院产品)进行免疫固定。依照Mauff提出 ...

一、筛选之前确定G418浓度： 1、由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2、G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码3′磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素和 ...

随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)等等已成 为基因分析的 ...

平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR 产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5—10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接 ...

Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的. (一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75～80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸，70℃延伸率 ...

生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有105个不同的基因，而主 基因在某个特定的细胞中，只有占15％的一小部分表达。而且在不同的细胞中，选择性表达的基础也是不同的。正是这些基因的选择不同决定了整个生命的过程：如细胞的生长分化，激素和细胞困子对细胞的作用、细胞周期的调控以及衰老、死亡等。和细胞的正常生理一样，一些病理的反应如肿瘤等也是由基因表达的改变引起 ...

PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力。近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途。 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领 ...

凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片段的回收，质粒与外源性DNA的快速连 接等. (一)凝胶浓度 凝胶浓度 ...

Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的。yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长。该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的。 (一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa。其比活性为200000单位/mg。75～80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸，70℃延伸率大 ...

PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高 模板核酸的产量. 传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细 ...

一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由1undefined-4降到1undefined-3，从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0kb片段时，效率比Klenta ...