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基本原理：在一定时间内连续给动物注射D-半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖还原酶催化下，还原为半乳糖醇，这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响正常渗透压，导致细胞肿胀，功能障碍、代谢紊乱，破坏并消耗机体抗氧化防御系统，使自由基积聚。同时在半乳糖还原成半乳糖醇的过程中又产生（O2-），这样使细胞膜脂质受损，过氧化脂质、脂褐质等增高，出现衰老。操作步骤：取健康雌性小鼠，普通饲料常规喂 ...

模型建立方法： 1 选取成年雄性新西兰大白兔2－2.5公斤 2 麻醉 戊巴比妥钠(30mg/kg) 从兔耳缘静脉注入实行全身麻醉，麻醉充分后固定在兔架上 3 进行局部备皮，采用脱毛剂（实验室自配） 4 消毒 铺巾 5 沿眶下15mm鼻背正中旁6mm矢状切开皮肤逐层切开分离至上颌骨直径4mm电钻在上颌骨上钻一小孔用无菌棉签取窦内分泌物作培养手术显微镜下找到窦口后用甲基丙烯酸树脂堵塞之并逐层缝合至皮肤 ...

大部分文献报导差速时间是2小时，但我个人做实验是遇到的情况说明2小时有些长了，已经有心肌细胞贴壁，而且把上层悬液吸出后转移，不知道为什么不好帖壁，成活率较低。我用的是0.125%胰酶分次消化。请各位有经验的战友讨论。 我觉得影响心肌细胞贴壁的因素可以总结为如下几点： 1、所用老鼠的品系以及年龄：SD大鼠和Wister大鼠还是有很大差别的，包括小鼠在内也是，大部分用SD大鼠差速贴壁时间为2小时，个 ...

1．原理 补体能使抗体致敏的羊红细胞发生溶血反应，根据溶血程度可测定补体总活性。以溶血百分率作纵坐标，相应的血清量为横坐标绘图，可知在50％溶血附近补体的量与溶血程度呈直线关系。因此以50％溶血作为终点较以100％溶血作为终点更为敏感。故称为50％溶血试验，即CH50(50％complementhemolysis)。 2．主要试剂 &n ...

1、原理 兔红细胞不经致敏可激活人补体旁路途径，导致兔红细胞溶解。在反应系统中加入乙二醇双氨基四乙酸（ethyleneglycol-bis-aminotetracetate，EGTA）可和血浆Ca2+螯合，EGTA与Mg2+结合能力很弱，故经典途径被封闭。根据兔红细胞的溶血程度，可测定补体旁路途径的总补体活性。 2、所需主要试剂 （1）兔红细胞（rabbitredbloodcell，RRBC）悬液 ...

免疫复合物（immunecomplex，IC）或抗原抗体复合物是抗原与其对应抗体相结合的产物。在正常情况下，机体内的游离抗原与相应抗体结合形成IC，可被机体的防御系统清除，作为清除异物抗原的一种方式，对机体有利。但在某些情况下，体内形成的IC不能被及时清除，则可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞等参与下，引起一系列连锁反应而导致组织损伤，出现临床症状，称为免疫复合物病（immunoc ...

电泳是通过电场作用将C4迁移率不同的同种异型分离开，然后依照分型标准定型。在某些情况下，C4A某种同种异型与C4B某种同种异型迁移率相同不易区分开，此时可用溶血覆盖技术加以区别。 1、原理 用肼处理豚鼠血清，可灭活其补体成分C4，使之成为帜缺乏的血清。将C4缺乏的豚鼠血清与致敏的SRBC混合，因缺乏C4，补体的攻膜效应不能发挥，将混合物与一定浓度琼脂糖混合倾注在电泳完毕的凝胶板上，凝胶板上C4区带 ...

养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本，参考文献改天附上（可能养这个的战友大多看过了），说 1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！（6W-8W，以 ...

补体遗传多态性的检测大多分二步进行，第一步是用琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦电泳将EDTA抗凝血浆通过凝胶电泳，根据分子量的大小、所带电荷的多少及等电点（pI）将血浆蛋白分开。第二步是免疫固定或溶血鉴定，琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦后，在凝胶板上铺上抗补体某一成分的抗血清，使其与凝胶板上的抗原结合，形成分子量较大的免疫复合物沉淀嵌在凝胶孔中，不易漂洗掉，故称免疫固定。将免疫固定后的凝胶板 ...

概述 化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光，这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或X光片，甚至视觉检测器都可以。 化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢？化学发光有如下两个内在的优势： 1．绝大多 ...

1.细胞欺负生手，也就是消化、吹打操作还有有一定影响的。 2.细胞生长不好与培养基直接相关，培养基中影响最为严重的就是牛血清。 3.支原体污染也是重要原因。但是正如上面朋友讲的，支原体在普通光学显微镜下是读不到的。我曾经检测过支原体污染，用的是牛心浸出液，即：将牛心去结缔组织，剁碎，浸煮，过滤，然后加琼脂成半固体。将细胞培养液做穿刺接种，有支原体者，围绕穿刺管道，会长出云雾状菌落。 4.细菌污染： ...

C3d的定量检测采用ELISA双抗体夹心法，其原理为抗C3d血清能与C3、C3b、C3bi发生交叉反应，根据C3SP与C3在不同浓度PEG中溶解度的不同，用11%PEG溶解待测样本中C3d，然后加至包被抗C3d反应板中，再依次加入HRP标记的抗C3d抗体和底物OPD/H202，用4mol/L H2S04终止反应，于492nm读取吸光度，C3d含量与其吸光度呈正相关。 1、10mmol/LEDTA抗 ...

人血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。 本贴主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞（Neutrophil），淋巴细胞（Lymphocyte），单核细胞（Monocyte）的分离。其它骨髓，脾淋巴细胞等分离可参，不同种属间请注意分离液的选择。

C3是补体二条激活途径的关键分子，C3活化后裂解为C3a、C3b两个片段，C3a很快被血清羧肽酶N裂解为C3adesarg，C3b被H、I因子灭活为C3bi，经蛋白酶水解为C3c、C3d、C3dg等，检测这些裂解产物即可反映C3的活化程度。 C3a的定量检测采用竞争性抑制放射免疫法。其原理为用“I标记C3（I-C3）”与待测样本、兔抗人C3a多克隆抗体一起孵育，待测样本中的 ...

1、原理 血样本中C3与抗C3血清在液相中反应，比例合适时形成可溶性免疫复合物。聚乙二醇（PEG6 000）可沉淀其免疫复合物，使溶液的透光率（T）下降。免疫复合物的量与C3和抗C3量呈函数关系，当固定抗C3浓度时，免疫复合物的形成量主要取决于样本中C3的含量，并与其呈正相关。故通过检测溶液吸光度值即可判定样本中C3含量。 2、主要试剂 （1）抗C3血清 有试剂出售，一般按说明书的效价使用，也可预 ...

根据世界卫生组织（WHO）和国际免疫学会报告，30多种补体成分中通常只需检测C3、C4、Clq、B因子和C1酯酶抑制物等5种成分。 测定方法大致可分为免疫溶血法和免疫化学法。免疫溶血法主要根据抗原与其特异性抗体（IgM、IgC型）结合可激活补体经典途径，导致细胞溶解。抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗体，即溶血素。二者在反应体系中称为指示系统。 使用的补体有两种，一种是化学试剂灭活某一补体 ...

急性实验性高血压模型常选用狗、猫、大白鼠、家兔和猴。复制的方法很多，如直接刺激中枢神经系统，通过神经反射、外源性儿茶酚胺类或其它体液加压物质注射等。这类模型造成的高血压时间短，不适于长时间的研究。应复制慢性实验性高血压模型。除遗传性高血压动物模型较能模拟人类高血压病的自然过程外，其它各类慢性实验性高血压动物模型（如神经原型、肾型、内分泌型和饮食型等），大多要经过一定的手术、药物或其他附加因素处理， ...

1、目的 建立一个WXG-4圆盘旋光仪的使用、维护保养与清洁标准操作程序，使操作过程标准化。 2、职责 质量部QC负责本文件的起草，质量部及QC检验人员负责本标准的实施。 3、范围 本标准适用于WXG-4圆盘旋光仪的使用、维护和保养与清洁。 4、使用方法 4.1 准备工作 4.1.1 先把预测溶液配好，并加以稳定和沉淀； 4.1.2 把预测溶液盛入试管待测。但应注意试管两端螺旋不能旋得太紧（一般以 ...

The polymerase chain reaction PCR using a heat-stable polymerase and suitable primers to direct the amplification of the desired region of DNA. is a rapid inexpensive and simple way ofcopying specific ...

一、样品处理 DNA是染色体的主要组成部分，是PCR的扩增模板。要进行PCR，研究DNA结构与功能或者用于诊断目的，首先必须从生物体内提取DNA。DNA往往以核蛋白形式存在，其分子量大（人的染色体DNA平均大小为3.0×109bp），提取DNA应尽量保持DNA完整性和纯度，即在提取中尽量避免机械张力引起的DNA分子降解，又要注意杂质及蛋白的去除，防止胞内酶解DNA。因此，提取DNA的基 ...