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细胞培养注意事项

1.实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一 ...

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SNP的检测知识

人类基因组中存在着广泛的多态性,最简单的多态形式是发生在基因组中的单个核苷酸的替代,即单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms SNPs)。SNP通常是一种二等位基因的(biallelic),即二态的遗传变异,SNP的数量大、分布广,在组成人类基因组的30亿个碱基中,平均每1000个就有一个SNP。SNP作为第三代遗传标记,在复杂疾病的基因定位、关联分析、个体 ...

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杂交瘤细胞复苏失败原因

最近,我把杂交瘤细胞复苏了,可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。1,我的细胞是在-76保存,放了半年,2,-76的冰箱温度有波动,经常打开门,3,细胞复苏后大量死亡,但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞,4,细胞不贴壁,第二天就就死了,5,复苏的过程正常,37度速解冻。 请高手帮忙分析一下,或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。 丁香园网友haha63认为:没按规定保存在液氮所致!细胞切 ...

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家兔在不同季节的饲养管理

家兔的生长发育与外界环境条件紧密相连。不同的环境条件对家兔的影响是不同的,而我国的自然条件,不论在气温、雨量、湿度还是饲料的品种、数量、品质都有着显著的地区性和季节性的特点。因此,四季养兔就应根据家兔的习性,生理特点和季节地区特点,酌情采取科学的饲养方法,才能确保家兔健康,促进养兔业的发展。 春季的饲养管理 我国南方春季多阴雨,湿度大,适于细菌繁殖,对养兔是最不利的季节,兔病多,死亡率在全年为最高 ...

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冬季家兔饲养技术

冬季气温低、光照不足,青饲料匮乏,给家兔饲养带来不便。为此必须做好以防寒保暖为中心的饲养管理工作,其要点如下: (一)检修笼舍,防寒保暖 通常兔舍建筑应座北向南,入冬对养兔舍选行一次普遍检查,窗装玻璃或钉薄膜,门挂草(棉)帘,发现破绽,及时补修,防止冷风侵袭兔体。家兔最适宜的生长温度为10℃~25℃,据实验报道,在10℃舍温下,如有风速3m/秒的冷风吹过,其温度很快会下降至0℃。故冬季应控制室内气 ...

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常见PCR检验筛检艾滋病毒问答集

一、请问PCR的检验一定准确吗? PCR检测艾滋病毒是利用截取病毒的ㄧ段RNA基因后,利用这段RNA进行复制(32次循环),得到大量相同的片段后进行检测。这个方法的最大好处是可以早期侦测是否感染,敏感性及特异性都非常的高。虽然这和每一个实验室的操作技术有关,但由于本所是采用全套全自动核酸萃取仪,及全自动核酸放大仪,也就是能将人为操作误差降到最低,是很准确的方法。 二、请问PCR的空窗期为多久?如果 ...

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免疫复合物的几种测定方法

聚乙二醇沉淀法测定免疫复合物 简要原理   聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的线性分子结构的多糖,为乙二醇的聚合物,有较强的脱水作用。其沉淀循环免疫复合物(circulating immune complex,CIC)的原理不太清楚,可能与CIC的分子量增大和构型的改变有关。利用3~4%的PEG可以选择性的将大分子CIC沉淀下来,将此沉淀定量溶解,用分光光度计 ...

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家兔

(Rabbitoryctolagus cuniculus)属脊索动物门,脊椎动物亚门,哺乳纲,兔形目,兔科动物,穴兔属。 一、生物学特性 (一)一般特性 昼伏夜动,喜欢独居齿尖喜、磨牙有啃土扒土习惯。听觉、视觉灵敏胆小易惊。白天多处于假眠和休息状态。喜安静、清洁、干燥、凉爽的环境。耐寒不耐热,耐干不耐湿,有良好的卫生习惯。有夜间直接从肛门吃粪的食粪癖。草食性动物,喜食青粗饲料。 (二)解剖学特性 ...

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差异显示技术(DD-PCR)及其应用

高等植物在其生命活动过程中,由于基因的选择性表达,决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中,都有不同的基因起作用。因此,研究基因的选择性表达,掌握其对植物生命活动的调控,克隆新基因,是分子生物学的重要课题。 1992年,Liang和Pardee[1]首次提出差异显示技术(DD-PCR),并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度 ...

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标准的PCR实验室简介

1.主体结构 主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。 2.标准的三区分隔和气压调节 将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩 ...

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比较详细的PCR

1.PCR反应的最适条件 1.1 TaqDNA聚合酶 在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在370C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行,故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶,使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在370C,引物与DNA模板 ...

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幼兔和青年兔的饲养

幼兔 从断奶到90日龄的兔叫幼兔。 在家兔一生中,幼兔阶段最难养。因为幼兔抵抗力差,容易得病,死亡率高,饲养管理要特别小心。 在喂食上要作到少吃多餐,定时定量,饲料要少而精细。夏季要多喂些青嫩野草,按月龄大小,每天每只喂量250~500克。精料以麸皮、玉米面和各种豆饼类为主,每天每只喂量5~10克。 在管理上,要按体型大小分群饲养。每天应运动2~3小时。 青年兔 3~6月龄的兔叫青年兔。 这时家兔 ...

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免疫复合物的检测

免疫复合物在体内存在有两种方式,一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC), 一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。 在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。 一、循环免疫复合物的检测 根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性,已经设计出很多检测CIC的方法(表24-4), 本章只述及常 ...

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家兔饲养方式

笼养 笼养是指室内用兔笼养兔。兔笼的种类很多,有单层活动式兔笼、双联单层式兔笼、单间重叠式兔笼和双联重叠式兔笼等类型。前两种只能饲养少量家兔,后两种则能满足数量较多的饲养活动。 用兔笼养兔,管理方便,照顾周到,兔体也容易保持清洁,但家兔长期囚居笼中,无法活动,势必阻碍生长发育。应该经常将家兔放出笼外运动。 圈舍养 圈舍养是指在室外建造兔舍、并在兔舍四周筑围墙设运动场、使家兔自由出入于兔舍和运动场的 ...

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细胞系或细胞株的建立

一、概念 1、细胞系(Cell Line):原代培养舞经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)所组成。 2、细胞株(Cell Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell st ...

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Troubleshooting for PCR and multiplex PCR

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. ...

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肿瘤细胞培养

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

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聚乙二醇(PEG)沉淀实验检测CIC

聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的直链大分子多糖,可非特异性地引起蛋白质沉淀。沉淀具有可逆性,被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响。不同浓度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白质,在pH值、离子浓度等条件固定时,蛋白质分子量越大,用以沉淀的PEG浓度越小。由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性,所以在IC测定中主要采用PEG6000。 PEG使IC沉淀的机理可能 ...

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繁殖母兔饲养管理技术要点

空怀期 母兔给子兔断奶后到再配种,这段时期称为休情期,也叫空怀期。 在此期间饲养管理的主要任务就是使母兔恢复体力,补偿哺乳期间养分的大量消耗,为接受新的配种繁殖做好充分的准备。但此期一定要注意不能把母兔养得过肥,一旦卵巢沉积脂肪,就必将阻碍卵细胞的发育而影响母兔正常的繁殖机能,造成不孕。反之,若母兔过瘦,也会影响控制卵细胞生长的脑垂体的正常分泌机能,从而导致母兔不孕。由此可见,控制空怀母兔体况是很 ...

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细胞传代培养

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞:贴壁细胞株 2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清) 3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、 ...

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