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        补体C4溶血覆盖技术

        互联网

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        电泳是通过电场作用将C4迁移率不同的同种异型分离开,然后依照分型标准定型。在某些情况下,C4A某种同种异型与C4B某种同种异型迁移率相同不易区分开,此时可用溶血覆盖技术加以区别。

        1、原理 用肼处理豚鼠血清,可灭活其补体成分C4,使之成为帜缺乏的血清。将C4缺乏的豚鼠血清与致敏的SRBC混合,因缺乏C4,补体的攻膜效应不能发挥,将混合物与一定浓度琼脂糖混合倾注在电泳完毕的凝胶板上,凝胶板上C4区带使混合物中的C4成分得以补偿,溶血反应发生,凝胶板上C4条带区可出现透明溶血带。C4B的溶血活性较C4A高,先发生溶血反应,因此可用此法将不易区别的C4A与C4B区分开来。

        2、主要试剂 R4豚鼠血清的制备:取正常豚鼠血清lmL加0.16mol/L的水合肼0.1mL,37℃2h。

        3、操作步骤

        (1)取SRBC5mL用生理盐水洗3次,用GVB2+配成10%的浓度;

        (2)取5mLl0%SRBC加50gL0.2mol/LEDTA和5mL 6U的溶血素混合,37℃30min。注意应经常摇匀,使抗原与抗体分子充分接触,然后用生理盐水洗2次,GVB2+洗1次;

        (3)根据凝胶板的大小做一个有机玻璃框,厚度为lmm,压在电泳完毕的凝胶板上;

        (4)用GVB2+配制1%的琼脂糖,隔水煮沸,待其完全透明后放50℃恒温水浴中冷却至50℃时加入1.5mLEA与1.5mLR4豚鼠血清,充分混合,倾注在凝胶板上;

        (5)37℃孵育约10rain,直至观察到C4B溶血带出现且清晰为止。用1%戊二醛固定,PBS漂洗,干燥保存。

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