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TGEK Base 50 mM Tris 10% vol Glycerol 1 mM EDTA 100 mM KCl (add for std lysis buffer): PMSF Benzamidine Leupeptin Aprotinin 0.5% NP40 (add for solubilization buffer) 1% NP40 0.1% Triton X100 0.1% SDS ...

Fix gel in 50% methanol for greater than 1 hour. rinse gel in dH2O 3 times 5 minutes each place back in 50% methanol for 1 hour. Stain gel in 100 mls of stain solution for 30 minutes Rinse gel in dH2 ...

Column Buffers: CREB Steven FinkbeinerDepartments of Neurology and PhysiologyUCSF http://gweb1.ucsf.edu/labs/finkbeiner/Protocol/protocol_list/CREB_column_purification.shtml Bases Buffer is Buffer C ...

This method of sample preparation produces a uniformlayer of very small crystals on the mass spectrometer's sample stage that are mechanically well adhered to the substrate.It is a variant of the drie ...

The discovery of this method allowed the application of laser desorption to proteins .Drying a droplet of a protein/matrix solution remains the favorite method of most MALDI practitioners.The recipe f ...

蛋白质一级结构（primary structure) 是指多肽链的氨基酸残基的排列顺序，也是蛋白质最基本的结构。它是由基因上遗传密码的排列顺序所决定的，各种氨基酸按遗传密码的顺序通过肽键连接起来。 每一种蛋白质分子都有自己特有的氨基酸的组成和排列顺序即一级结构，由这种氨基酸排列顺序决定它的特定的空间结构，也就是蛋白质的一级结构决定了蛋白质的二级三级等高级结构，这就是荣获诺贝尔奖的著名的Anfins ...

Inoculate 2ml of 5ml o/n culture of either p3133 (empty vector pET11a)or p3134 (dnEBNA-1/Soft)in E.coli BL21 LysS per 0.5L LB+ ampicillin (grow two 0.5L cultures of each) Incubate ~2hrs 37℃250rpm unti ...

蛋白质组学 肽类在线 蛋白质组学 ...

To be done the day before: 1.Put meat grinder and accessories in the cold room. 2.Put 6 one-liter centrifuge bottles in the cold room. 3.Put 14 to 16 500 ml Beckman polycarb centrifuge bottles with li ...

CATHY'S NO BOIL YEAST EXTRACTS 1.Cells to mid log/ need ~ 5OD.Spin down and wash w/ 1ml H2O 2.Transfer to 1.5ml round bottom screw cap tube 3.add 200μl SDS sample buffer+ (5% BME50mM NaF1mM PMSF)-a ...

1.Introduction and Background There is a great need for general methods to characterize the proteins that contemporary biology makes available.The list of such proteins needing further characterizatio ...

葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍；最适反应温度提高10～12℃；酶比活相同。据分析，Pro替代Gly138后，可能由于引入了一个吡咯环，该侧链刚好能够填充于G ...

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点： 易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学 ...

近年来Qiagen公司无论在分子诊断方面，还是核酸、蛋白纯化方面都有出色的表现。在分子诊断这一块，根据Kalorama Information网站自2003年的统计，它作为分子诊断公司世界排名第九。在今年5月31号，它收购了artus公司，这是一家针对病原体、基因型和药物基因组学测试提供基于聚合酶连锁反应 (PCR)分子诊断公认的领导厂商，估计它作为分子诊断学公司的排名还将继续攀升。在核酸、蛋白纯 ...

甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕赤酵母表达的经典试剂盒过 ...

为探究生物进程的分子机制，需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用。研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下： 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作 ...

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或 者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常 ...

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成，基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互作密不可分，例如：DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用。能够发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步。 ...

（一）双缩脲测定法 1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4 .5H2O） 1.50g 酒石酸钾钠 5.00g H2O 500.0ml 10%氢氧化钠（不含硫酸钠）300ml H2 ...

HPLC 篇 1 ． HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足：解决办法为增加样品量 样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器 检测器衰减太多：调整衰减即可。 检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数 检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。 检测池中有气泡：解决办法为排气。 记录仪测压范围不当：调整电 ...