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一、原理 1、E .coli 表达系统 E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。 2、外源基因的诱导表达 提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-& ...

通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化目的蛋白时提供方便。 以pET-32a(+)为例，介绍将目的基 ...

•减少样品的复杂程度，同时富集低丰度蛋白 •使用低费用格式的mini-gel，获得高分辨率的结果 •快速而简单的无油2-D电泳 •质谱兼容染色，检测微克到纳克级水平蛋白 使用ZOOM® Benchtop Proteomics™ System能够进行简单而容易的蛋白 分离，能够以有效的mini-gel格式，进行第一和第二向凝胶电泳。这个系 ...

These protocols should yield enough cytosol and organelles for 1-200 MT/Organelle motility assays. Solutions and Reagents • Freshly removed or flash frozen rat liver • PBS •Homogeniz ...

Yeast Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Hahn Lab July 2003 Chromatin IP Method Day 1 1.Start 5 ml o/n cultures of strains to be tested Day 2 1.Inoculate 50 ml of the desired media with a volume of ...

蛋白 酶 已知对应的抑制剂 蛋白 酶 已知对应的抑制剂 ...

Purification of Gcn4 James FishburnHahn Lab March 2006 Gcn4 constructs are cloned into the pET21(a)vector and have a 6-His tag expressed at the N-terminus Gcn4 is expressed and purified from BL21(DE3) ...

1)Run protein gel. Set up blot: 2)Prepare two tupperware containersone with dH2O and one with 1/2X Transfer Buffer (TB). 3)Remove one glass plate from the gel by twisting a spacer between the plates.T ...

Order 6 six week old Balb/C mice and let the ARC know they are coming.Have your antigen ready for when they arrive.Once they get there earmark the mice and perform a pre-bleed on them to be used as an ...

GST fusion protein purification GST融合蛋白纯化 John MundyInstitute of Molecular BiologyCopenhagenDenmark http://www.arabidopsis.org/info/Protocols_Mundy2.jsp#gst 1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into pr ...

This protocol is based on Shevchenko AWilm MVorm O& Mann M.Mass spectrometric sequencing of proteins from silver-stained polyacrylamide gels.Anal Chem 199668:850-8.I have used it with success on b ...

Cleavage Sites Table for Fusion Proteins： PROTEASE COMPANY Protease Capture Thrombin Leu-Val-Pro-Arg�Gly-Ser ...

原理 GST 纯化系统是利用GST （glutathione-S-transferase ）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷） 2g IPTG 溶解入10ml 水，过滤除菌，分装，-20℃保存。u Lysis bu ...

Affinity Column Preparation 亲和层析柱制备 Peter Novick LabDepartment of Cell Biology Yale University School of Medicine http://info.med.yale.edu/cellbio/Novick/Second/Protocols/Affinity.pdf 1.Prepare 1 ml ...

Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique.Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appear ...

1、仪器方面的最新进展 自动化程度进一步提高，特别是EPC（电子程序压力流量控制系统）技术已作为基本配置在许多厂家的气相色谱仪上安装（如HP6890，Shimadzu GC-17A GC-2010，Varian 3800，PE Auto XL，CE Mega 8000等），从而为色谱条件的再现、优化和自动化提供了更可靠更完善的支持。 _与应用结合更紧密的专用色谱仪，如天然气分析仪等。 _色谱 ...

人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA经电泳分离后预转于尼龙膜上 .预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程 .可检测范围：0.5-10kb .可重复使用 .提供ExpressHybTM快速杂交液样品 .可靠的优良品质 从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN™膜更是在国际著名的学术期刊上有将近3000篇文献引用。 严谨的制作 ...

一、基因表达调控是生命的必需 基因表达 (gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。rRNA 或 tRNA 的基因经转录和转录后加工产生成熟的 rRNA 或 tRNA也是 rRNA 或 tRNA 的基因表达，因为 rRNA 或 tRNA 就具有在蛋白质翻译方面的功能。 基因组 ( ...

某些基因不断地进行转录和翻译，产生出各种蛋白质，通常称之为基因表达。每个细胞都有一套完整的基因调控系统，使各种蛋白质只有在需要时才被合成，这样就能使生物适应多变的环境，防止生命活动中的浪费现象和有害后果的发生，保持体内代谢过程的正常状态。但是，原核细胞和真核细胞的基因调控有着明显的区别。 原核细胞表达的基因调控，比真核细胞要相对简单，这里以大肠杆菌乳糖操纵子为例来说明。大肠杆菌能以乳糖为唯一碳源生 ...

本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比 ...