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DNA的酶切反应心得

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个 50μl的反应体系中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短反应时间;如果减少酶的用量,对许多酶来说,相应延长反应时间(不超过16小时)也可完全反应。二、 选 ...

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SNP位点的选择

1,如果是检测基因的所有以知的SNP,那么你首先要去了解并查询到这些SNP位点吧,SNP位点可以通过查询dbSNP数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/)和TSC(The SNP Consortium)数据库(http://snp.cshl.org/),可以获知基因及上下游邻近序列的SNP位点。 2,至于挑选的原则,可以介绍一下Hap Map的正规化标准: SNP ...

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SNP位点的命名

关于snp位点的命名其实并不统一,大家在文献中一般用的都是习惯或者说惯用名称。具体表现在以下几种形式: 一、突变信息之间加上位置信息: 主要有三种方式:比如说突变信息之间加上cDNA的位置,如C188T;突变信息之间加上DNA的位置,如A2546G;突变氨基酸信息之间加上氨基酸位置,如Glu145Lys. 二、按发现顺序或频率顺序拟定的惯用名称 也有几种形式,如CYP2Dundefined10CYP2Cundefined3等 ...

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基因芯片与SNP分析

基因芯片技术作为一种新兴的生物技术,近年来得到迅速发展,其应用具有巨大的潜力。单核苷酸多态性(SNP)作为新的遗传标记对基因定位及相关疾病研究的意义亦非常重大。本文主要介绍了DNA 芯片技术的原理和分类、单核苷酸多态性检测方法及DNA 芯片技术在单核苷酸多态性检测方面的应用。 生物芯片技术是90 年代初发展起来的,集分子生物学、微电子技术、高分子化学合成技术和计算机科学等于一身的一门新型技术。目 ...

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SNP产生功能的机制

SNP产生功能的机制目前罕有这方面的综述,但是做SNP的功能性研究的文献和方法层出不穷,NAT GENITIC 上几乎每期都有相关方法学的报道。但是对于具体产生机制我提一下本人的看法,希望大家补充。 1.对大多数SNP而言,都由于位于一些非编码区域而不产生明显的功能性影响,此时做SNP功能意义不大。 2.启动子SNP研究是做的人最多的,相关实验技术都比较成熟,其产生功能的机制主要是影响TF与启动子 ...

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FCS Express中文使用手册V3.0

FCS Express V3是一在 Windows 98/NT/ME/2000/XP 环境下运作的流式数据分析软件,由加拿大商De Novo Software 公司行销全球,David Novo 及其团队所研发设计。FCS Express V3适用于分析本公司所有流式细胞仪产出的数据档案,含 FACScan、FACSort、FACSCalibur、FACSCanto、FACSArray、FACSA ...

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细胞凋亡的形态学观察

细胞凋亡(apoptosis)的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋亡的认识正不断得到深化,检测凋亡细胞的方法也逐渐增多,但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。 一、光学显微镜观察 凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染,形成致密质块,有时可碎裂。在HE染色的组织切片中细胞体积缩小,胞质致密、嗜酸性染色增强,并可形成凋亡小体。在组织中凋亡细胞常以分 ...

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细胞凋亡检测技术与方法

细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death),是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程。它是一个主动的,高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间,但由于它在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键角色,对个体的正常发育及细胞凋亡紊乱在病理学研究中的重要作用,引起了人 ...

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LI-6200光合系统简明操作程序

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『科普』叶的光合作用的简易实验

叶的光合作用的简易实验,此实验材料容易准备,操作简单,效果明显,是帮助学生认识光合作用的有效手段。

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一步一步学流式(图)

第一篇:流式细胞术的历史 概要说来,流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术,以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。 1934年,Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置计测的设想,在此之前,人们还习惯于测量静止的细胞,因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成 ...

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提高光合作用效率的措施

简介了提高光合作用效率的一项措施

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几种检测凋亡的方法

一、形态学观察方法 (一)HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。 (二)丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 (三)台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色 ...

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流式、WB、RT-PCR等实验所需细胞数问题

1、流式所需细胞数http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=8952457&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#8952457 (【求助】做流式的细胞用25ml的培养瓶培养,细胞数够嘛?)http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5824985_1.html ( ...

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RNA电泳

RNA Gel (Crawford Lab) Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones) great tips on RNA gel electrophoresis. Northern Gel and Transfer (gopher://iubio.bio.indiana.edu) Using glyoxala ...

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差异显示法分离水稻抗稻瘟病相关基因

采用OG05 差异显示技术,分析水稻稻瘟病抗源材料“ 地谷”叶片受稻瘟病菌侵染前后的基因的表达差异,获得87个差异片段。对这87个差异片段进行了回收、重扩增与克隆,并对其中的81个片段进行了杂交鉴定。斑点杂交结果证实其中6个片段受稻瘟病菌诱导表达。进一步克隆测序并进行数据库比对分析表明其中一个与水稻4号染色体中一推测的苹果酸合成酶高度同源,一个与水稻11号染色体上的RPR1 ...

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电泳技术

电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。F=QE质点的前移同 ...

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mRNA differential display(图)

All living organisms have thousands to tens of thousands of unique genes encoded in their genome of which only a small fraction perhaps 15% are expressed in any individual cell. Therefore it is the te ...

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荧光辅助糖电泳的优化

荧光辅助糖电泳的优化.pdf ...

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流式细胞术测效靶细胞杀伤实验

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确,这也是偶参照老外的方法吧。 1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。 2、拿出后,1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色,PBS洗三次 ...

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