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实验中的一些好习惯加入试剂之前把它混匀一下以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用 ...

Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center DallasExcerpted From Molecular Cloning: A Labor ...

发布时间04年07月13日 11时13分 　 　　张 蓓 沈立松上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心 多聚集链反应（polymerase chain reactionPCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技 ...

实验步骤： 1、EB病毒液的制备 复苏B95.8细胞株，使用培养基为10% FCS RPMI-1640 逐步添加培养基至细胞长至对数生长期 细胞计数，调节细胞数量为1×10^6个/ml 在CO2培养箱中继续续培养10天，中间不换液 至第10天收集培养上清，1800rpm，4℃离心15分钟 0.22μm滤器过滤，1ml/支分装，冻存于液氮备用 2、病人外周血液的采集、分离 使用枸橼 ...

器材与试剂： 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤： 一、水的制备 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水 二、PBS的制备与消毒（也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制） 1.溶解定容：将药品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4•H2O 1.5 ...

一、目的 MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。 二、适用范围 适用于疾控中心所有技术人员 。 三、程序 （一）生物安全要求 实验室生物安全级别：BSL-1 所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。 （二）材料 1. 生长成片的MDCK细胞 2. 无菌的T25细胞培养瓶 3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰 ...

贴壁法原代培养 1.1　细胞培养 1.1.1　培养液配制　DMEM（美国Gibco公司），Hepes（15mmol/L），青霉素（100u/ml），链霉素 （100mg/ml），优质胎牛血清（原代培养浓度20%，传代培养浓度10%，美国Hyclone）。 1.1.2　培养器皿　25cm2塑料培养瓶（Costar），培养面积25cm2；直径3.5cm培养皿。 1.1.3　大鼠血管平滑肌细胞培养　动物 ...

单核细胞的分离 基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。 试剂与器材 ·外周血单个核细胞（参见实验1） ·PBS1×和PBS10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA ·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭 ...

最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？ 你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！ 如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收 ...

称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）19.07g（注意不能烘干），置于1000ml溶量瓶中，溶于无二氧化碳的水中，加甲醇227ml甲醇，用无二氧化碳的水稀释至刻度，即得（pH值可用硼酸或氢氧化钠进行调整）。存放时，应防止空气中的二氧化碳进入。 补充：一般18％指得是100ml的溶液中含有18g的甲醇。我们在实验中凡是遇到百分比的浓度时都是这样处理的。 具体计算如下：甲醇密度：0.7 ...

临床微生物学检验(sop)

项目 正常值 红细胞数（×1012/L） 8 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成 ...

一、常规指标 体重：近交系成年小鼠24～35g；昆明成年小鼠35～55g 寿命：2～3年 妊娠期：19～21天 性周期：4～5天 心率：600（328～780）次／分 呼吸量：0.09～0.23ml／次 饮水要求量：4～7ml／只／天 排尿量：1～3ml／天 体成熟：60～90天 哺乳期：18～23天 体温：37.5～38.8℃ 呼吸数：163（84～230）次／分 饲料要求量：3～7g／只／天 ...

小鼠 成熟体重 公：（g） ...

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型 （1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现假 ...

自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要设计一条探针，因此探 ...

实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1．内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异因此无法直接从终点产 ...

一、开机程序 1、检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。　　2、打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。　　3、将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡 ...

培养基历史 体外培养（ in vitro culture ）包括：组织培养（ tissue culture ）、细胞培养（ cell culture ）、器官培养（ organ culture ）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百 ...