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一、目的 MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。 二、适用范围 适用于疾控中心所有技术人员 。 三、程序 （一）生物安全要求 实验室生物安全级别：BSL-1 所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。 （二）材料 1. 生长成片的MDCK细胞 2. 无菌的T25细胞培养瓶 3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰 ...

贴壁法原代培养 1.1　细胞培养 1.1.1　培养液配制　DMEM（美国Gibco公司），Hepes（15mmol/L），青霉素（100u/ml），链霉素 （100mg/ml），优质胎牛血清（原代培养浓度20%，传代培养浓度10%，美国Hyclone）。 1.1.2　培养器皿　25cm2塑料培养瓶（Costar），培养面积25cm2；直径3.5cm培养皿。 1.1.3　大鼠血管平滑肌细胞培养　动物 ...

单核细胞的分离 基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。 试剂与器材 ·外周血单个核细胞（参见实验1） ·PBS1×和PBS10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA ·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭 ...

最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？ 你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！ 如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收 ...

称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）19.07g（注意不能烘干），置于1000ml溶量瓶中，溶于无二氧化碳的水中，加甲醇227ml甲醇，用无二氧化碳的水稀释至刻度，即得（pH值可用硼酸或氢氧化钠进行调整）。存放时，应防止空气中的二氧化碳进入。 补充：一般18％指得是100ml的溶液中含有18g的甲醇。我们在实验中凡是遇到百分比的浓度时都是这样处理的。 具体计算如下：甲醇密度：0.7 ...

临床微生物学检验(sop)

项目 正常值 红细胞数（×1012/L） 8 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成 ...

一、常规指标 体重：近交系成年小鼠24～35g；昆明成年小鼠35～55g 寿命：2～3年 妊娠期：19～21天 性周期：4～5天 心率：600（328～780）次／分 呼吸量：0.09～0.23ml／次 饮水要求量：4～7ml／只／天 排尿量：1～3ml／天 体成熟：60～90天 哺乳期：18～23天 体温：37.5～38.8℃ 呼吸数：163（84～230）次／分 饲料要求量：3～7g／只／天 ...

小鼠 成熟体重 公：（g） ...

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型 （1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现假 ...

自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要设计一条探针，因此探 ...

实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1．内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异因此无法直接从终点产 ...

一、开机程序 1、检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。　　2、打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。　　3、将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡 ...

培养基历史 体外培养（ in vitro culture ）包括：组织培养（ tissue culture ）、细胞培养（ cell culture ）、器官培养（ organ culture ）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百 ...

In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions” the paper describe ...

RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly used techniques for ...

进实验室这么长时间了，每一天都好像过得很艰难，每一项实验的完成都很辛苦，其中的每一个细节都不能大意，不然做得一切都要前功尽弃。 实验室里没有人做细胞爬片，我连见都没见过，老板的实验却要求这个东西，只能自己摸索。查资料 搜信息，自己实践，终于做出了可以用来后期实验的细胞爬片。 总结经验如下： 首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜， ...

流式细胞仪应用 点击下面链接下载 ...

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验 ...