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Preparation of cell lysates from E.coli by enzymatic lysis Materials Chemicals lysosyme Lysis buffer 50 mM Tris-HCl pH 7.5 50-200 mM NaCundefined 5% glycerol (v/v) 1 mM DTT 1 mM PMSF~undefinedThe NaCl concentration ...

1.Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS.Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pellet ...

一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而这些加工原核细胞则无能为力。需要表达具有生物学功能的膜蛋白或分泌性蛋白，例如位于细胞膜表面的受体或细胞外的激素 ...

以已知抗体(抗HBs)包被载体，然后将含有抗原的待检标本加入，共同孵育后，抗原结合于包被抗体上，再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs)，酶标抗体连接到抗原上，最后加入底物溶液，根据颜色反应来判定抗原含量。 一、材料 HBsAg试剂盒，本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 ...

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽滤除菌。 2、L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 1 ...

一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。 二、试剂准备 1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29. ...

YEAST TWO-HYBRID SCREEN WITH LIBRARY AND BAIT (The following protocol is for use with the LIBRARY transformation only) Day 1: Grow an overnight culture of a single colony of yeast transformed with bai ...

可溶性白细胞介素2受体SIL-2R存在于人的血清、尿液及脑脊液中，其浓度的高低与许多疾病的发生、发展、治疗效果及预后有密切联系，如成人T淋巴细胞白血病(ATL)艾滋病、B细胞慢淋、毛细胞白血病，以及肾移植后发生急性排斥反应时或异基因骨髓移植发生移植物抗宿主时，患者血清中SIL-2R水平明显升高。SIL-2R的检测多采用酶联免疫吸附技术，其中夹心法ELISA是一种较简单的检测方法，国外已广泛应用于临 ...

Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8.此外，近年来的研究表明，IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml，操作简单，重复性良好， ...

重组人α2a/α2b干扰素(rHuIFN-α2a、rHuIFN-α2b)生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控，通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定，且检测周期较长。我们用自制的2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b的单克隆抗体(McA ...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的 ...

IASYS-binding cuvette and getting KD Immobilization of ligands on cuvette surfaces and measure the interactions of ligand which is immobilized on the cuvette and the ligate which is added to the immob ...

【摘要】：影响ELISA中非特异性显色的原因很多，如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物，操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析，以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。 【关键词】ELISA非特异性显色 酶联免疫吸附试验（ELISA）自1971年自问世以来，以其敏感性 ...

竞争抑制ELISA方法的建立 1 抗体的酶标记及质量鉴定 本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上，标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化，洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS，流速为15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度计测A280吸光度值，以洗脱体积为横坐标，吸光值为纵坐标做图，收集第一峰即为酶标抗体峰。 标记完后用紫外分光光度计在分别在2 ...

朱阳泉徐长根戴瑞娣 胡乔 作者单位：212001 江苏省镇江市中心血站 作者简介：朱阳泉(1967-)，男，江苏镇江人，主管技师，本科， 主要从事输血传播疾病和血型研究。电话：0511-5021106，E-mail：yangquanzhu@yahoo.com。 【摘要】 目的探讨3种常见的影响全自动酶免分析系统检测结果的因素，提高EI ISA法检测结果的准确性。方法(1)随机选择对照组和实验组各4 ...

张化涛，段延安。 (1．胜利石油管理局临盘医院，山东德州251507；2．胜利石油管理局卫生处，山东东营257003) 影响；检测；酶联免疫 R446B1671-5098(2006)20-3708-01 酶联免疫(EIJISA)是目前检验科常用的免疫学检测方法之一，其操作简单，无须特殊设备，使其在各级医院都有应用。 但是，如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假 ...

临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下。 一、临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪 ...

两对半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。 而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此，都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平的关系，因而也不符合等比原则 ...

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法 1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂 ...