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        ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题

        互联网

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        两对半使用ELISA方法,其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测,而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。

        而竞争抑制法的原理:酶标抗体与样本抗体在同样的体系中,与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲,应该先将样本与酶标抗体先行混匀,然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此,都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合,与后加入者并不是公平的关系,因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长,且温度高的情况下,对结果有很大的影响。

        第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将阴性标本94份并用生理盐水进行1:30稀释,在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体,然后检测结果如下:

        放置时间(min)
        阴性标本数
        临界值-标本A450nm值
        假阳性率(%)
        <0.3
        0.3~0.7
        >0.7
        0
        75
        10
        3
        6
        0
        2
        68
        13
        7
        6
        7.4
        5
        65
        15
        8
        6
        10.6
        10
        56
        16
        12
        10
        20.2
        20
        38
        18
        17
        21
        39.3
        30
        21
        12
        18
        43
        57.4


        从上表可以看出,如果同时加入标本与酶标抗体,没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体,由于标本比酶标抗体先结合了两分钟,因此出现了 。

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