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Comments: pSV281 RPA70AB Constructed by L.Mizoue; May '02.This plasmid encodes RPA 70 subunit residues 181-422 as a fusion protein with an NT 6His tag.The tag can be cleaved off with TEV protease (rec ...

J.MoviusKCoachmanand S.Hahn (Hahn Lab) last modified 10/9/00 Induction of BRF in bacteria and purification on Ni-NTA agarose Transform BRF plasmid into strain BL21 DE3 (pLysS)or JM25 (DE3 containing t ...

Materials Expression plasmid (e.g.pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells) ZB = 10 g NZ-Amine A 5 g NaCl 860 ml final volume 10X M9 Salts = 1 g NH4Cl 3 g KH2PO4 6 g Na2HPO4 100 ml final volume M9ZB = 86 ...

George P.Smith Division of Biological Sciences Tucker Hall (573)882-3344 Introduction to B-PER B-PER from Pierce Chemical Co.is a Tris-buffered detergent formulation that lyses bacterial cells without ...

一、血清灭活问题。 1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？ 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？ 回答a：血清都是灭活是56℃30min。每次我都是这样灭活的。 回答b：应该是分血清的吧，若已灭活，就不用灭活了，未灭活，最好还是要灭活的。 回答c：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养 ...

问：大豆胰蛋白酶抑制剂sigma有type-1和type-2两种，请问他们是怎么分类的，和kunitzbowman-birk有什么关系？他们对胰蛋白酶，凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶抑制的特异性如何？ 答：根据蛋白酶抑制剂所作用于蛋白酶的类型，大致可以将其分为四大类：丝氨酸蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、天冬酰胺蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂。丝氨酸蛋白酶抑制剂是研究较多的一大类，其中就包括您提到的K ...

问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！ 答：1、胰酶是0.25%这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。 2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在 ...

问：急需木瓜蛋白酶（papain）和菠萝蛋白酶的核酸或者蛋白序列，可好像在Pubmed里检索不到，不知哪位大虾有这方面的讯息可提供，或者告知哪里可以查到，不胜感激！ 答：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=Protein&cmd=Search&term=AAA72774&doptcmdl=GenPept http ...

问：有谁知道酸性蛋白酶产生菌的筛选方法？谢谢您的帮助。 答：下载这几篇文章看看：1、酸性蛋白酶高产菌株的选育http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/lsyslgy/lsys99/lsys9903/990313.htm2、酸性蛋白酶高产菌株6042（Aspergillus niger6042）的选育和形态鉴定http://eng ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20 ...

由于现在国内的细胞库资料不是很充足，而且比较零散，包括建株时的技术层面不一，没有比较严格统一的操作规范，所以在遇到比较重要的实验项目时，一般都比较倾向于购买国外的细胞株，但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点： 1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。 2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰（一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。 3、 ...

一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟---& ...

丝氨酸蛋白酶是一个蛋白酶家族，它们的作用是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质。其激活是通过活性中心一组氨基酸残基变化实现的，它们之中一定有一个是丝氨酸（其名字的由来）。在哺乳类动物里面，丝氨酸蛋白酶扮演着很重要的角色，特别是在消化，凝血和补体系统方面。 弹性蛋白酶为水解酶类的一种，对丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸等含羧基的多肽键起催化水解的作用，因曾认为此酶主要作用于弹性蛋 ...

丁香园网友dwp123的问题为： 我实验室有广州光学仪器厂生产的倒置显微镜一台和数码相机一台，想给细胞拍照，有人说直接从目镜中拍摄，有资料说需要一转换接口，有没有哪位院友有这方面的经验，可否介绍介绍，能不能提供转换接口的型号及其厂家 丁香园网友swan119的观点为： 根据以下步骤你就可以 1、确定你数码相机的品牌和型号 2、确定你显微镜的品牌和型号 3、准确搞清楚数码相机镜头直径以及是否可以加装 ...

问：请教一个实验问题，PMSF，胃酶抑制剂以及DTT会不会影响HRP活性？要做ELISA，样品中不知道可不可以加复合蛋白酶抑制剂？请大牛指教！ 答：不会影响酶活性，因为蛋白酶抑制剂，抑制的是蛋白水解酶活性。而HRP不是蛋白酶类，而是过氧化酶。（不过dtt肯定会破坏HRP）。即使会影响酶活性，实际上做elisa也不影响，因为加样品和加hrp是分开的，不存在。 答：我在研究各种抑制剂对L－ ...

请问：有人知道蛋白酶产生菌的相关文献在哪里可以查阅的到？谢谢帮忙！ 答：用GOOGLE的学术搜索试试，可以找到一些文献，如这篇文章： 题目：弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究 下载地址：http://www.journals.zju.edu.cn/agr/2003/200301/030114.pdf 还有很多，到这里看看：按以下方法操作即可！http://scholar.google.c ...

1、细胞（组织）培养年鉴 1878 Claude Bernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。 1885 Wilhelm Roux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。 1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的 ...

问：简并引物的简并度并没有超过512，但是PCR时总是不能得到特异的带，只是在预定的位置出现一片弥散的带。后来提高模板浓度，并将退火温度从 50℃ 提高至65℃，做单引物对照即只加一条引物时能扩增出特异的带，而正常PCR却什么也扩增不出来，偶尔能扩增出一些片断也跟单引物对照的是一样的。并且重复性不好，有时能扩增出来有时什么都没有。确定模板没有问题，因为16S能扩增出来。请各位支招，感激不尽！ 答： ...

请问：测定微生物的脂肪酶活力时，油脂培养基中的花生油可以用豆油代替吗？ 答：首先应该分析花生油盒大豆油的主要成分，脂肪酶活力测定一般都用油酸作为底物。天然油脂中，分布最广的二烯酸是碳原子数为18的亚油酸（顺9，顺12-二烯十八酸），在所有植物油中几乎都含有亚油酸，棉子油、大豆油的主要成分是亚油酸。亚油酸为含有两个双键的不饱和脂肪酸。花生油中油酸的含量也在60％～80％之间，所以两者基本可以换用。 ...