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问：吾欲纯化一种丝氨酸蛋白酶，为了保持其活性和防止其他酶的降解，吾欲加PMSF，行乎？ 答：你不能加PMSF，因为PMSF是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，可抑制羧肽酶Y，糜蛋白酶，Factor Xa，木瓜蛋白酶，纤溶酶，蛋白酶K，枯草杆菌蛋白酶，凝血酶及胰蛋白酶。 不知道你的丝氨酸蛋白酶从哪里提取的，我们也在做丝氨酸蛋白酶的分离纯化，一般不加抑制剂，只是你操作的时候应该尽量保持低温，同时样品应 ...

问：我想用该法测一种蛋白酶对混合蛋白底物（其实是昆虫体壁蛋白）的酶活。请问：像我这种情况，还有必要做酪氨酸标准曲线吗，用得找吗？结果的酶活力应该怎么表示？是相当于对照吸光值增加的百分比吗？对照的设计，除传统的先加TCA后加底物外，我是否可以先用沸水浴灭活处理酶，然后按正常的顺序做底物，再做TCA？ 答：这个与Folin-酚有什么关系？ 1、你的底物不是酪蛋白。 2、沸水浴灭活处理酶，这样的对照肯定 ...

问：大家好，我要做牛胰蛋白酶的表达，但是还没有找到相关的文献，有谁知道他的序列，是223个氨基酸残基。现在这谢谢大家了！ 答：看看是不是这个！http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&val=NM_001113727 LOCUS NM_001113727 879 bp mRNA linear MAM 22-JAN-2 ...

问：我用中性蛋白酶酶解我的样品后，跑了SDS-PAGE电泳，结果泳道上出现了蛋白酶的条带， 蛋白酶应该如何从样品中除去呢？是不是灭活后再离心就除去了？那为什么我离心后的样品中还有蛋白酶的存在呢？ 答：实在不行过个亲和色谱柱吧。 ...

问：我在蛋白方面比较菜，我有个蛋白需要做酶切，蛋白表达主要是以包涵体为主，溶解在8mol/l 尿素，或者1%SDS中，蛋白已经变性了，请问蛋白酶切是否能在变性的条件下酶切，还是一定要等到蛋白复性以后才能酶切? 还请指点一二。能否这样做，就是把变性的蛋白通过透析成酶切的缓冲液体系，然后再酶切，这样那些变性的尿素和SDS都去除，不知道这样操作符不符合理论？ 答：既然你的蛋白是包涵体，为什么不直接连接到 ...

问：请问各位高手，我想让酵母蛋白酶Ａ失活，决定采用ＰＣＲ进行ＤＮＡ序列的突变，此法行的通吗？可有前人研究过？ 答：国外有了"蛋白酶缺失"的用于重组蛋白表达的菌株。国内也许也有，小龙对于上游不大懂，不知道自己构建蛋白酶缺失的酵母菌是否有技术上的难度。参见一篇综述《生命的化学》2003 年23 卷1 期CHEMISTRY OF L IFE 2003，23(1) 酵母表达系统及其应 ...

问：蛋白酶底物Glt-ALA-ALA-phe-MCA，加入酶反映完毕后，需要用到excitation wavelength and emission wavelength， 高手能否解释一下，多谢。 答：你需要用两个波长，一个是激发波长，一个是释放波长，激发波长是用来激发酶反应，而释放波长，是反应后的生色产物的释放波长，可以通过测定吸光值得变化测定酶活 问：我用stop method 测活性 加 ...

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问：我购买的是GIBCO 0.25%(w/v)胰蛋白酶（25200-072）如何稀释成0.1%(w/v)？ 答：用D-Hanks液按一定的比例配置即可。 答：那要看你平时用什么缓冲液了。pbs，还是D－hanks？用你平时的那种缓冲液就行了。 ...

问：木瓜蛋白酶和胰蛋白酶在消化组织块上有什么区别吗？哪一个效果更好？ 答：常用的细胞消化液为胰蛋白酶（Trypsin），其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，改变细胞间的连接，使组织或细胞片分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。 木瓜蛋白酶（Papain）是从木瓜果实中提炼而得的纯天然生物酶，简称木瓜酶；木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为27000u，由一种单肽链组成，含有2 ...

问：有人说白颜色胰蛋白酶的要比黄颜色的效果好，是吗？我近期买的胰蛋白酶倒是白颜色的，但是不能溶解在PBS中，呈细小的悬浮颗粒状，是GIBCO公司出产的。这会是什么原因呢？望各位师兄师姐回复。 答：以我们的经验确实是这样的，我们做过比较的是白颜色的比较好，究其原因我们认为是黄颜色的胰蛋白酶提纯不够，里面混有杂质所致。 ...

问：我要配不同浓度的胰蛋白酶加到细胞里面观察MTT值，请问用什么浓液配啊？可不可以用完培，我怕里面的血清会影响胰蛋白酶的作用。请各位前辈指点，谢谢！ 答：血清肯定会影响胰酶的作用啊。不可以用无血清的培养基吗？ ...

问：小弟要做蛋白酶体抑制剂筛选相关的工作，在dxy上看了前辈的不少文章，先谢谢大家了。不过我还是有些不了解： 1、大家做蛋白酶体相关实验时，蛋白酶体需要纯化吗？一般怎么纯化？ 2、做蛋白酶体抑制剂的筛选相关步骤。 3、大家有没有谁做过蛋白酶体的表达的，亚基也行。 答：你去找一套叫 Methods in Enzymology的书，在 Volume 398 的PartB应该有你需要的东西 ...

一、用途 本试剂盒用于定量检测大鼠血清中的IL-6的浓度。 二、原理 本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗大鼠IL-6单抗包被于酶标板上，大鼠标本中的IL-6会与单抗结合。加入生物素化的抗大鼠IL-6（二抗），它将与结合在单抗上的大鼠IL-6结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。大鼠IL-6的 ...

ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题，本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难，虽然有师兄师姐铺路，但还是常常做得一塌糊涂，比如说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低。。。。。。自己也为此苦恼过很长一段时间，随着自己技术水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气，也是熟能生巧吧，现在做方阵，做 ...

许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题，标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败，那么究竟如何绘制或制作标准曲线呢？ 一、做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意： 1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。 2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验 ...

一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗 ...

Pulsed Field Gel Electrophoresis Preparation of Chromosome-sized Yeast DNA Molecules in Solid Agarose (Modified from Schwartz and Cantor CELL 37:67 1984 ) 1.Grow 5 ml yeast culture in YPD Broth to &qu ...

Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formalde ...

Preparation of gel for Posi blot transfer 1、Cut gel to size of preexisting mask or cut new mask. 2、For depurination: put gel in pyrex dish add 500ml .25N HCl (10mL conc. HCl+450ml H2O) and shake 15min ...