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        液相色谱仪的保养

        1.HPLC的日常操作条件: 温度:10~30℃; 相对湿度<80%;最好是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。 2.泵的保养: 1)使用流动相尽量要清洁;   2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗;   3)流动相交换时要防止沉淀;   4)避免泵内堵塞或有气泡。 3.进样器的保养: 每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染。 4.柱的保养: 1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或 ...

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        色谱柱使用及维护

        新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装(不加预柱) 1.将卡套架套入柱芯;  2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套;  3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片;  4.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧;  5.然后依同样的顺序连 ...

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        免疫电泳实验

        免疫电泳(immunoelectrophoresis )是将电泳和琼脂扩散结合起来,用于分析抗原组成的一种定型方法,具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤: 1.电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同,在电场的作用下,其带电分子的运动速度具有一定的规律,因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。 2.琼脂扩散 电泳后在琼脂槽中 ...

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        硝酸纤维素膜吸附蛋白的常见问题处理

        基于膜的检测试剂研发人员应该严格考虑影响蛋白质在硝酸纤维素膜上结合众多因素,其中包括原材料的固有属性和处理过程等。 随着胶体金标记技术的发展、研发人员对胶体金快速检测技术深入研究,市场上基于膜的快速免疫层析检测产品的种类迅速增多。 虽然免疫层析产品的包装设计种类繁多,实际上目前主流的商品化检测试剂盒主要下面两种形式。最常用的检测形式为侧向层析 或者层析定量,这种检测形式通常应用于诊所或者由直销客户 ...

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        色谱柱

        引言 色谱柱是HPLC分离过程的核心。一支稳定、高效的色谱柱对建立普适性强、重现性好的方法是必不可少的。不同供应商的色谱柱,甚至来源相同、认为完全一样的色谱柱之间,可能也会存在很大差异,尤其是不同的色谱柱在塔板数、谱峰的对称性、保留值、峰间距以及使用寿命方面会有所不同,而这些不同对建立理想的HPLC方法会产生很大影响。本章中,我们将提供一些有关色谱柱担体、固定相及柱填料的信息供读者参考;讨论色谱柱 ...

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        湿气处理

        在新型免疫诊断产品的开发阶段,为保持蛋白质试剂在干燥和溶解状态下稳定而进行的实验至关重要。 对于IVD厂家来说,保持产品的质量和可信度是至关重要的。为确保他们生产出高质量的产品,公司实行严格的质量保证体系, 关键步骤符合国际质量体系标准,如原材料采购、生产、软件验证。 另一个同样重要的任务是确保在产品生产出来后一段长时间内,最终用户都能享受到高质量产品。公司为保证产品质量,在运输、仓储和产品使用过 ...

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        色谱柱的选择

        问:哪个公司的色谱柱好? chromexpert: 色谱柱从大的分有气相用、液相用、毛细管电泳柱等。 气相柱:气相柱又分为填充柱和毛细管柱。  进口柱主要有:Agilent、J&W等,种类众多、价格较贵。 国产柱:兰州化物所,北大化学系研制的色谱柱性能较好。  国产柱已完全能与进口柱媲美。 液相柱:进口柱:agilent、waters、岛津等,价格较贵。waters的口碑最好。  国产柱: ...

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        基于蛋白质原料的体外诊断产品的稳定性问题

        免疫诊断产品开发的基础——蛋白质,是一种生物大分子,它根据希腊神话中一位多变的艺术形象——Proteus(希腊海神)而命名。如同他们共通的名字所展示的那样,蛋白质具有改变自身构型的能力,不过这也导致了其活性的丧失。因此,例如抗体、凝集素、酶等蛋白质试剂所具有的特异性结合、催化反应功能,对在预处理、贮存、使用加工等操作过程中存在的潜在有害影响非常敏感。 ...

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        毛细管电泳及其应用(capillary electrophoresis, CE)

        毛细管电泳是电泳技术和现代微柱分离相结合的产物,它具有效率更高、速度更快、样品和试剂消耗量特少的特性。

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        中国药典2005年版中药薄层色谱鉴别技术

        中药的真伪优劣直接关系到人民用药的安全和有效。在检验中药真伪方面通常采用的检测手段有形态鉴别、理化鉴别和光谱色谱分析等。而作为色谱技术一个分支的薄层色谱由于其独具的长处而被广泛应用于中药分析。自从《中华人民共和国药典》(1990年版一部)起,薄层色谱鉴别除有化学对照品作为鉴别药材的指标成分对照品以外,鉴于单一化学对照品不能反映药材的整体特征,一些多种植物共存的化学成分没有专属性,以及没有化学对照品 ...

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        蛋白质的保存

        The choice of storage method depends on several criteriaincluding the intrinsic stability of the proteinthe duration of storage requiredand how stringent the need for preventing damage is.There is tre ...

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        一些提高蛋白质的稳定性的方法

        1.葡萄糖异构酶(GI)在工业上应用广泛,为提高其热稳定性,朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后,用双引物法对GI基因进行体外定点诱变,以脯氨酸(Pro138)替代Gly138,含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达,结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍;最适反应温度提高10~12℃;酶比活相同。据分析,Pro替代Gly138后,可能由于引入了一个吡咯环,该侧链刚好能够填充 ...

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        蛋白质药品冷冻干燥技术研究进展

        1 引言 由于冻干药品呈多孔状、能长时间稳定贮存、并易重新复水而恢复活性,因此冷冻干燥技术广泛应用于制备固体蛋白质药物、口服速溶药物及药物包埋剂脂质体等药品。从国家药品监督管理局数据库得知,目前国内已有注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、注射用重组人干扰素α2b、冻干鼠表皮生长因子、外用冻干重组人表皮生长因子、注射用重组链激酶、注射用重组人白介素-2、注射用重组人生长激素、注射用A ...

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        蛋白质沉淀浓缩方法原理及详细解析

        在生化制备中,沉淀主要用于浓缩目的,或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂: 1.盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2.有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化,有时也用于蛋白质沉淀。 3.等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少,多与其它方法结合使用。 4.非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子 ...

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        醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白

        本实验以醋酸纤维素为支持物,分离各种血清蛋白,血清中含有清蛋白,α—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白和各种脂蛋白等。

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        蛋白质测定方法之双缩脲法(Biuret法)

        一)实验原理 双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。 ...

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        蛋白测定方法之Folin—酚试剂法(Lowry法)

        一)实验原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin&mdas ...

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        影响紫外吸收法测定蛋白质/DNA浓度的因素

        紫外吸收法测定蛋白质/DNA浓度的最大特点就是操作简单、测量迅速,而且不需要引入试剂;但是它也面临着很多问题,诸如测量准确性的问题。本节将讨论影响测定的一些主要因素。 (1)蛋白质的不同对测定结果的影响。 由于蛋白质是生物大分子,而紫外吸收往往是其分子内的小基团所引起的,例如酪氨酸、苯丙氨酸,色氨酸和肽键等等。因此当蛋白质不同,其包含的上述小基团含量发生变化时,就会影响蛋白质含量的测定。然而蛋白质 ...

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        紫外吸收法测蛋白质含量

        蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。 紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。低浓度的盐,例如生化制备中常用的(NH ...

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        胶粘剂迁移对层析检测的影响

        选择适当的胶粘层有助于厂商改善基于膜的诊断产品的加工处理并延长该产品的效期。 用于层析诊断检测的材料有两个共同特性:多孔渗水并有相关脆性。为弥补该类材料的物理强度的不足,该类材料通常会依靠胶粘剂的作用装配到特定支架上(见图1)。以前,产品开发者用过几乎所有种类的胶粘剂来装配这些物质,包括热固性胶粘剂。 现在,随着胶粘剂技术的发展,一系列适用于层析检测应用领域的胶粘剂已被制造出来。通过选择一种能将应 ...

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