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【求助】茜素红染液配制？ 参与者：qianjunqz 前面有位兄弟已经发过类似的帖子，但答案都不太完整，这里我想重新把这个问题提出来，希望大家帮助解决。 1）Tris－HCl是缓冲液，是先配PH值8.3的Tris－HCl，再加入茜素红，还是加入茜素红后再调节溶液PH至8.3？ 2）茜素红的规格是怎么样的，要加多少量的茜素红哪？ 参与者：liuzeyi2002 茜素红S 中文名称： 茜素红S英文名称 ...

我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好! 简述如下： 1) 将培养瓶内旧的培养液弃 ...

我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。 我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。 培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察 ...

弃血清---PBS洗一或两遍---加1-2ml的消化液（0.1%的胰酶+0.02%的EDTA）消化45秒作用（不用放回培养箱，细胞面紧贴自己的手掌心，平放）---弃去胰酶后让残留的胰酶再作用1分钟----立即加含血清培养基终止胰酶的作用---轻轻吹打细胞很容易就脱离瓶壁。注意，吹打次数不要太多，机械损伤对细胞的损害非常大，吹打过程中也不要有太多气泡，以免气泡的剪切力损害细胞。 一般而言，细胞消化传 ...

【求助】悬浮细胞如何转染？ 参与者：独钓寒江雪 请问有人做用悬浮细胞转染细胞么 具体转染过程是怎么样的呢 我打算用脂质体做转染 但是没有经验所以想请问一下做过这方面的人 非常感谢 参与者：DXY721 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达 ...

【求助】用fugene 做过转染的进来！！！ 参与者：yinqiscott 小弟准备用罗氏公司的fugene HD来做细胞转染，但是一点不明白，在载体和质粒无血清孵育15分钟后，加到细胞里，这时候的培养液应该用无血清的还是有血清的呢??? 参与者：shilly 我们用的是fugene 6，加到细胞里面的时候是有血清的培养液 说明书上说不影响，如果要换无血清培养液也要几个小时以后换。 参与者：scm ...

【求助】是否瞬转成功的检测 参与者：zhou0958 我现在想做瞬转，然后24，48，72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体，这种载体是不带荧光的.请问各位大侠，我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢? 参与者：DXY721 检测转染成功与否的方法很多，流式，RT-PCR，WB应该都可以 参与者：easticebird 是不是可以和有荧光的一起转染 ...

吸出培养瓶中的培养基用Tr-EDTA洗1次； 加入刚解冻的Tr-EDTA少量，轻轻摇晃，让所有细胞与其充分接触。置于37度培养箱作用2-3min 在镜下看到细胞圆缩，右手拿细胞瓶呈水平方向与左手掌托（肉较多处）轻轻磕n次，可以看到细胞哗哗往下掉，立即加培养基终止消化。 用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：3分瓶。 ...

【求助】pIRES2－eGFP转染细胞有经验者请帮忙？ 参与者：水仙子2005 最近用pIRES2－eGFP做转染，可是看不到荧光（就连空载体也没有），由于实验要在3月底出结果，所以现在很急，准备寒假加班加点做。 有人说这个载体的GFP表达很不稳定，不知道有没有人用过这个载体，能否给点建议，对于好的建议愿以积分相赠 参与者：Crazyvirus 不知你是固定以后观察荧光还是转染后直接看的，若是固定 ...

我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。 1、0.25%胰酶新鲜解冻不需要预热。 2、倒掉培养瓶中的培养基并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。 3、加入约1-2ml的胰酶晃动瓶子使液体浸润瓶底。 4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟） 5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）见 ...

目的 评估所建立的CA50时间分辨免疫分析法（CA50 TRFIA）的技术指标及应用价值。方法 建立CA50时间分辨荧光免疫分析法，分析其曲线的性质参数，研究该方法的特异性、精密度和回收率、灵敏度、稳定性、平等性，以及和免疫放射分析方法（IRMA）法间的相关性。结果 10批标准曲线拟合相关系数均值R为0.9978±0.0022,最大结合比Bm/Bo为127.26±9.85,批内和批间变异分别为2.6%和3.5%，平均回收率为108.61%，灵敏度为1.08U/mL，测定结果与进口CA50 IRMA药盒测定值比较相关系数为0.94,其他肿瘤标志物无明显干扰，同批试剂连续6个月应用分析结果稳定。结论 CA50 TRFIA本底低于干扰小，特异性强、稳定性好，灵敏度高，无放射性污染，是一种非放射性的标记免疫新访求，值得推广应用。

1、 0.25%胰酶先解冻，并置入孵箱中预热20分钟。 2、 倒掉培养瓶中的培养基，并用PBS洗两次。 3、 加入月1.5ml的胰酶，并晃动瓶子，使液体浸润瓶底。 4、 将瓶置入孵箱约2分钟 5、 镜下观察，见细胞边缘折光增加，即可加入含血清的培养基终止消化。 6、 吹打20次左右，细胞就能脱壁了。 7、 稀释，分瓶接种 ...

流式细胞仪（flow cytometer，PCM）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，流式细胞术就是对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。从流式细胞术的发明、改进，流式细胞仪的研制、革新，到今天在众多应用领域的拓展，每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、电子工程 ...

细胞：猪肾细胞系(IBRS-2) 猪 国内 来源： 猪 生长类型：贴壁生长 传代步骤： 弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞３次并到尽所有液体-->加入１ml无钙镁水，用巴氏吸管滴１－２滴２.５％的胰酶-->放入37度二氧化碳温箱中消化１－２-->弃去胰酶，加入２０ml含１０％小牛血清的ＭＥＭ生长液，拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分2瓶--& ...

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已 ...

【求助】GenBank使用的疑问 参与者：ctyw708 众所周知，引物设计常常用到GenBank，但是我查到的是mRNA的序列，用的软件Primer Premier 5.0，里面要输入的是DNA sequence，该如何转换，按照碱基配对原则进行变换（reverse complemently）就可以了？ 能利用软件对文献的引物进行评价么？ 谢谢路过的大侠！ 参与者：银色黎明 查cDNA序列嘛. ...

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。 正常情况下，2天换一次液4-6天传代一次. 传代过程： 1、直接倒掉DMEM培基 2、pbs将细胞洗2次 3、倒掉pbs 4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶 5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟 6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。 7、加入完全培基 ...

【求助】肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 参与者：greentrees 肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 肝素和硫酸类肝素都属于糖胺聚糖吗？ 不知道发在这里合适不合适，有知道的同道可否告知一下 参与者：liuzeyi2002 肝素（heparin）属于糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）类生化药物，是一类在结构上不均一、聚合程度上高度分散的硫酸多糖，一般指肝素 ...

特性：悬浮细胞 培养条件：37度 5% CO2培养（方瓶站立培养） 营养需求：1640+15%FCS+10%TPB+100U双抗+100U两性霉素，状态不佳时适当地加2%鸡血清或2%马血清 生长特性：细胞对密度没有高的要求，生长较快；但对pH值要求高，需要在6.8-7.2，不能过高。 传代：对于隔夜的细胞只需要将细胞分为两/三孔/瓶即可，对于细胞液过酸时，则将细胞悬浮，1000rpm离心后，弃取上 ...

【求助】关于葡萄糖转运实验的一些问题 参与者：qqhhrainbow 1、我买回来的氚-2D-葡萄糖，包装上标注的0.25mci……0.25ml in ethanol： water 9：1……这些信息如何理解，如果我要达到1 μCi/ml的加药量，应该从包装瓶里去出多少加入1ML水呢？ 2、还有就是最后收集细胞的问题，为什么有的实验是将 ...