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我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。 1、0.25%胰酶新鲜解冻不需要预热。 2、倒掉培养瓶中的培养基并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。 3、加入约1-2ml的胰酶晃动瓶子使液体浸润瓶底。 4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟） 5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）见 ...

目的 评估所建立的CA50时间分辨免疫分析法（CA50 TRFIA）的技术指标及应用价值。方法 建立CA50时间分辨荧光免疫分析法，分析其曲线的性质参数，研究该方法的特异性、精密度和回收率、灵敏度、稳定性、平等性，以及和免疫放射分析方法（IRMA）法间的相关性。结果 10批标准曲线拟合相关系数均值R为0.9978±0.0022,最大结合比Bm/Bo为127.26±9.85,批内和批间变异分别为2.6%和3.5%，平均回收率为108.61%，灵敏度为1.08U/mL，测定结果与进口CA50 IRMA药盒测定值比较相关系数为0.94,其他肿瘤标志物无明显干扰，同批试剂连续6个月应用分析结果稳定。结论 CA50 TRFIA本底低于干扰小，特异性强、稳定性好，灵敏度高，无放射性污染，是一种非放射性的标记免疫新访求，值得推广应用。

1、 0.25%胰酶先解冻，并置入孵箱中预热20分钟。 2、 倒掉培养瓶中的培养基，并用PBS洗两次。 3、 加入月1.5ml的胰酶，并晃动瓶子，使液体浸润瓶底。 4、 将瓶置入孵箱约2分钟 5、 镜下观察，见细胞边缘折光增加，即可加入含血清的培养基终止消化。 6、 吹打20次左右，细胞就能脱壁了。 7、 稀释，分瓶接种 ...

流式细胞仪（flow cytometer，PCM）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，流式细胞术就是对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。从流式细胞术的发明、改进，流式细胞仪的研制、革新，到今天在众多应用领域的拓展，每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、电子工程 ...

细胞：猪肾细胞系(IBRS-2) 猪 国内 来源： 猪 生长类型：贴壁生长 传代步骤： 弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞３次并到尽所有液体-->加入１ml无钙镁水，用巴氏吸管滴１－２滴２.５％的胰酶-->放入37度二氧化碳温箱中消化１－２-->弃去胰酶，加入２０ml含１０％小牛血清的ＭＥＭ生长液，拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分2瓶--& ...

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已 ...

【求助】GenBank使用的疑问 参与者：ctyw708 众所周知，引物设计常常用到GenBank，但是我查到的是mRNA的序列，用的软件Primer Premier 5.0，里面要输入的是DNA sequence，该如何转换，按照碱基配对原则进行变换（reverse complemently）就可以了？ 能利用软件对文献的引物进行评价么？ 谢谢路过的大侠！ 参与者：银色黎明 查cDNA序列嘛. ...

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。 正常情况下，2天换一次液4-6天传代一次. 传代过程： 1、直接倒掉DMEM培基 2、pbs将细胞洗2次 3、倒掉pbs 4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶 5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟 6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。 7、加入完全培基 ...

【求助】肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 参与者：greentrees 肝素，硫酸类肝素，低分子肝素有什么区别？ 肝素和硫酸类肝素都属于糖胺聚糖吗？ 不知道发在这里合适不合适，有知道的同道可否告知一下 参与者：liuzeyi2002 肝素（heparin）属于糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）类生化药物，是一类在结构上不均一、聚合程度上高度分散的硫酸多糖，一般指肝素 ...

特性：悬浮细胞 培养条件：37度 5% CO2培养（方瓶站立培养） 营养需求：1640+15%FCS+10%TPB+100U双抗+100U两性霉素，状态不佳时适当地加2%鸡血清或2%马血清 生长特性：细胞对密度没有高的要求，生长较快；但对pH值要求高，需要在6.8-7.2，不能过高。 传代：对于隔夜的细胞只需要将细胞分为两/三孔/瓶即可，对于细胞液过酸时，则将细胞悬浮，1000rpm离心后，弃取上 ...

【求助】关于葡萄糖转运实验的一些问题 参与者：qqhhrainbow 1、我买回来的氚-2D-葡萄糖，包装上标注的0.25mci……0.25ml in ethanol： water 9：1……这些信息如何理解，如果我要达到1 μCi/ml的加药量，应该从包装瓶里去出多少加入1ML水呢？ 2、还有就是最后收集细胞的问题，为什么有的实验是将 ...

【求助】caspase-3的检测方法 参与者：yansunqin 在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法 （1）：免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞 （2）：western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活花 （3）：RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理， ...

培养条件：RPMI-1640培养液，10%（胎牛或小牛）血清，5%CO2，37度饱和湿度孵箱培养。 细胞生长状态：上皮样贴壁生长。 传代： 细胞长满95%->弃培养液->0.25%胰酶消化2min->弃掉胰酶->加入培养液吹打贴壁细胞，将细胞悬液分瓶传代。若一传二，则3天长满；若一传三，则需要4-5天长满。 ...

红血球脆性试验（RBC Fragility test）是血液实验室用以检查贫血疾病的项目之一，特别是针对遗传性球状红血球贫血。本次实验在探讨新鲜检体之立刻反应与经37℃孵育24小时后检体反应结果的相关性及经孵育测试的参考值，并对以不同的转速离心做评估。结果发现经37℃孵育24小时的步骤是不可省略的，因只有如此才可筛检出具轻微症状的病人；我们以25位体检病人求得经37℃孵育24小时结果的参考值，分别 ...

本文探讨了时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）的背景、不同模式优缺点以及新配基设计原则，并讨论了TRFIA的未来研究方向。

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题） 消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37º ...

【求助】如何挑蚀斑？ 参与者：lxwgww 最近需要进行病毒的单克隆化，在论坛看到可进行挑蚀斑，受益很多！因为病毒是细胞结合毒，所以想参考细胞的单克隆化方法！ 看到有用滤纸挑细胞克隆的方法，不知道具体如何操作，是否可行？ 希望做过相关试验的战友能够提供细胞结合毒纯化的方法！？？ 参与者：smh9839 拿微量移液器，安黄枪头的，100μl或200μl的均可。 等蚀斑形成后，先在板子背面 ...

吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。 ...

【求助】G418 原代细胞筛选 参与者：lxwgww 在论坛看了很多关于G418的帖子，正在做原代细胞转染的筛选，不知道是否可以使用G418 筛选？是否可以筛选到稳定的细胞株？？ 请做过相关研究的战友指教！！ 参与者：zhaolifei 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时 ...

细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。 2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰 ...