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本人养胃癌细胞sgc-7901已经半年多了，这半年来，可以说是及其不顺，同门的师哥师姐都说这个细胞很好养，增殖快，传代快，生命力旺盛，不容易感染，然，到我这里似乎就不像他们说的那样，问题接二连三的出现，但我从这一连串的失败中从一个懵懂无知者变成一个动作娴熟的能手，说句实在话还得感谢这批细胞给我带来的宝贵经验。 首先我要说一点：无菌操作 刚一接手细胞时，无菌相关事项早已耳熟能详，但我的第一批细胞在传 ...

1． 材料和试剂 1.1培养液A ：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）。 1.2培养液B：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）和终浓度为0.7--1μg/ml 的放线菌素D。 1.3 L929细胞株：鼠结缔组织纤维母细胞，来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。 1.4 结晶紫染色溶液：0。05%结晶紫 (50mg结晶紫加入20ml乙醇加蒸馏水 ...

293细胞培养技术，供大家参考。 1、293细胞明显适应酸性环境pH值在6.9～7.1时可顺利贴壁生长 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。 2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇使之流遍所有细胞表面即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s镜下观察细胞变圆就可加DMEM ...

【求助】有没有战友用24孔板做过成骨细胞的钙结节染色计数？ 参与者：qianjunqz 有没有战友用24孔板做过成骨细胞的钙结节染色计数？如果有，请问在这一过程中要注意些什么问题？谢谢！！ 参与者：houjiaquan 染色后还要计数吗？怎么操作？关注中 参与者：qianjunqz 我也没做过，在文献上看到，很多都做钙化结节染色计数 参与者：sunlijun0918 是用四环素染色吗，我做过统计钙 ...

我做的是胃癌三种细胞株MGC-803BGC-823以及SGC-7901的培养，具体方法步骤如下 1）细胞传代： A将复苏长满细胞的培养瓶中培养基吸出加3ml 0.86%生理盐水洗涤两次弃去洗涤液加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml消化液均匀覆盖细胞表面消化时间约1-3分钟。 B消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆边缘折光性增强在细胞尚未脱落时倒掉消化液立即加入血清或含血清的培养基终止消化。 C 用 ...

【求助】ELISA测细胞上清肿瘤坏死因子TNF-a 参与者：juaden 我做体外细胞实验看某种药物刺激下小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-a的量 买的是BIO-source的ELISA试剂盒 标准曲线很正常 但是挑选LPS作为阳性对照 阳性结果很不明显 几乎就是空白值 请教做过的老师同学 LPS浓度和刺激时间有什么特别的要求么？ 还有 细胞上清测之前需要特殊处理么？如蛋白酶灭活之类的 谢谢！ 参与者： ...

【求助】关于TGF-Beta，FN酶联免疫（ELISA）试剂盒的选择 参与者：txl4fox 我是要酶联免疫（ELISA）的方法测细胞上清液中的TGF-Beta，FN抗原的表达情况，关于ELISA试剂盒的选择我想请教几个问题：我想买酶标板自己包被一抗，那我应该如何选择ELISA试剂盒？有没有不带酶标板只带一抗，二抗，酶底物，以及底物显色剂而且够做五六张板的ELISA试剂盒？如果没有，是不是我应该分 ...

1、传代前24h先将组织块去除：等到细胞覆盖瓶底80％以上后进行组织块去除操作。可用弯头玻璃吸管将组织块轻轻挑起吸出，确保无组织块留下，以防坏死污染。 2、胰酶消化：倒掉旧培养液，用D－HANKs液清洗两边，加入已预热（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后镜下观察，发现胞质收缩，细胞间隙增大，立即用含胎牛血清的培养液终止消化。 3、弯头吸管吹打细胞：吹打一定时间后到镜下观 ...

【求助】急：免疫细胞化学PBSA和PBST的配制 参与者：greentrees 搜索了一下，没有找到详细的配制方案 不知道这两个怎么配制阿？ PBSA=PBS+BSA，BSA是买的sigma分装的，浓度1% PBST中的T是Triton嘛？我看到很多是指Tween，也有说是Triton的，到底是哪个阿？T的浓度多少阿？ 爬片的洗液是不是TBS比PBS更好呢？ 我要检测的目标抗原在胞浆内。 参与者： ...

【求助】请问细胞凋亡后beta－actin会降解吗？ 参与者：xywu2003 我的蛋白可能有凋亡作用，用anti－beta actin抗体做wb，未转染细胞（正常细胞）有条带，转染空质粒和带目的基因的质粒无条带，请问这是为什么？ 参与者：jfeiharry beta actin is a type of cell skeleton protein.Its gene is a house keep ...

原代培养 1.取新生3d以内BALB/c小鼠，断颈处死后立即投入75%酒精中消毒5min（虽有头部皮肤保护，但时间不要过长，所以事先要把准备工作做好之后再去杀老鼠）。 2.D-Hank’s液漂洗后分离颅盖骨，刮除骨膜和结缔组织，DMEM清洗颅骨骨片并剪碎。（自我感觉碎一点好一些） 3.加入0.25%胰蛋白酶（含0.02EDTA），37°恒温消化20min，吸出消化液，之后1mg ...

【求助】茜素红染液配制？ 参与者：qianjunqz 前面有位兄弟已经发过类似的帖子，但答案都不太完整，这里我想重新把这个问题提出来，希望大家帮助解决。 1）Tris－HCl是缓冲液，是先配PH值8.3的Tris－HCl，再加入茜素红，还是加入茜素红后再调节溶液PH至8.3？ 2）茜素红的规格是怎么样的，要加多少量的茜素红哪？ 参与者：liuzeyi2002 茜素红S 中文名称： 茜素红S英文名称 ...

我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好! 简述如下： 1) 将培养瓶内旧的培养液弃 ...

我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。 我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。 培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察 ...

弃血清---PBS洗一或两遍---加1-2ml的消化液（0.1%的胰酶+0.02%的EDTA）消化45秒作用（不用放回培养箱，细胞面紧贴自己的手掌心，平放）---弃去胰酶后让残留的胰酶再作用1分钟----立即加含血清培养基终止胰酶的作用---轻轻吹打细胞很容易就脱离瓶壁。注意，吹打次数不要太多，机械损伤对细胞的损害非常大，吹打过程中也不要有太多气泡，以免气泡的剪切力损害细胞。 一般而言，细胞消化传 ...

【求助】悬浮细胞如何转染？ 参与者：独钓寒江雪 请问有人做用悬浮细胞转染细胞么 具体转染过程是怎么样的呢 我打算用脂质体做转染 但是没有经验所以想请问一下做过这方面的人 非常感谢 参与者：DXY721 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达 ...

【求助】用fugene 做过转染的进来！！！ 参与者：yinqiscott 小弟准备用罗氏公司的fugene HD来做细胞转染，但是一点不明白，在载体和质粒无血清孵育15分钟后，加到细胞里，这时候的培养液应该用无血清的还是有血清的呢??? 参与者：shilly 我们用的是fugene 6，加到细胞里面的时候是有血清的培养液 说明书上说不影响，如果要换无血清培养液也要几个小时以后换。 参与者：scm ...

【求助】是否瞬转成功的检测 参与者：zhou0958 我现在想做瞬转，然后24，48，72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体，这种载体是不带荧光的.请问各位大侠，我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢? 参与者：DXY721 检测转染成功与否的方法很多，流式，RT-PCR，WB应该都可以 参与者：easticebird 是不是可以和有荧光的一起转染 ...

吸出培养瓶中的培养基用Tr-EDTA洗1次； 加入刚解冻的Tr-EDTA少量，轻轻摇晃，让所有细胞与其充分接触。置于37度培养箱作用2-3min 在镜下看到细胞圆缩，右手拿细胞瓶呈水平方向与左手掌托（肉较多处）轻轻磕n次，可以看到细胞哗哗往下掉，立即加培养基终止消化。 用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：3分瓶。 ...

【求助】pIRES2－eGFP转染细胞有经验者请帮忙？ 参与者：水仙子2005 最近用pIRES2－eGFP做转染，可是看不到荧光（就连空载体也没有），由于实验要在3月底出结果，所以现在很急，准备寒假加班加点做。 有人说这个载体的GFP表达很不稳定，不知道有没有人用过这个载体，能否给点建议，对于好的建议愿以积分相赠 参与者：Crazyvirus 不知你是固定以后观察荧光还是转染后直接看的，若是固定 ...