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在过去的几年中，许多生物的基因组完成了测序工作，如何对如此庞大的原始序列信息进行分析和应用，正是现在最为棘手的问题。大量的基因预测软件和在线工具应运而生。如何广泛而深入地了解并能有的放矢地利用这些工具，已经成为21世纪分子生物学家的必修课。 随着大规模EST和cDNA序列信息的获取，那些基于表达序列同源范围的程序，在基因组注释中的作用日益显著。即使在稀少基因或组织特异性表达的基因中，基因组序列的相 ...

DNA测序的方法有很多种。目前最常见的是双脱氧终止法了。在测序用的缓冲液中含有四种dNTP及聚合酶。测序时分成四个反应，每个反应除上述成分外分别加入2，3-双脱氧的A，C，G，T核苷三磷酸（称为ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP），然后进行聚合反应。在第一个反应物中，ddATP会随机地代替dATP参加反应一旦ddATP加入了新合成的DNA链，由于其3位的羟基变成了氢，所以不能继续延伸。 ...

DNA序列测定是分子生物学领域最重要的技术之一，是了解基因结构和功能的基础。DNA测序技术的不断完善和仪器自动化程度的不断提高，为大型基因组测序奠定了基础，当今大多数蛋白质序列都是通过基因或cDNA的核苷酸序列推导出来的。DNA测序方法主要有双脱氧链终止法（Sanger法）和化学降解法（Maxam－Gilbert法）。目前不管是传统的手工测序法，还是仪器自动测序法均使用前者，而仪器自动测序法以其快 ...

DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答：溶解DNA测序样品时用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应需要一个最佳的酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后在进行了测序反应时DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客户在溶解DNA测序样品时使用TE Buffer。的确，TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性， 但TE Buf ...

鸟枪法测序的操作方法 1、用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA 并用Agarose凝胶电泳进行回收。 2、对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理，然后用T4 DNA Polymerase对小片段 DNA进行末端平滑化。 3、 进行Agarose电泳，切胶回收1 kbp ~ 2 kbp的小片段DNA。然后用BcaBest DNA Polymerase在DNA的 3' ...

1、流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞。 2、流式细胞仪的荧光检测灵敏度： 一般能测出单个细胞上＜600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3、前向角散射（FSC）光检测灵敏度： 前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。 4、流式细胞仪的分辨率： 通常用变异系数CV ...

常见传染病包括细菌性、病毒性传染病，常见寄生虫病实验动物细菌性传染病病原: 1人兽共患病病原菌是一级动物必须排除的病原菌. 2动物致病菌和条件致病菌是二三级动物要求排除的病原菌. 主要病原菌 (一)志贺菌属(Shigella) (二)沙门菌属(Salmonella) (三)波氏杆菌属(Bordetella) (四)巴氏杆菌属(Pasteurella) (五)分枝杆菌属(Mycobacterium) ...

流式细胞仪（flow cytometry，FCM）是集激光技术、电子技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，具有灵敏度高、重复性好、特异性强、方法灵活、分析速度快等优点。我院自2000～2002年用美国BD公司生产的FACSC-ALIBUR流式细胞仪，结合科研医疗开展了淋巴细胞亚群（CD3、CD4、CD8、CD19、CD56）分析、白血病免疫分型、DN ...

流式细胞术（flow cytometry，FCM）自70年代中期就成为研究细胞生物学的重要技术，至今己被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域。FCM能对大数量的单个细胞同时进行多个物理和化学参数检测，其中包括细胞的大小、细胞内颗粒、细胞复杂性和细胞的相对荧光强度等。 我科使用美国BD公司生产的FACSC-ALIBUR流式细胞仪已有1年多，我们认为该仪器的性能稳定，操作简便，电脑软件设计较 ...

本人养胃癌细胞sgc-7901已经半年多了，这半年来，可以说是及其不顺，同门的师哥师姐都说这个细胞很好养，增殖快，传代快，生命力旺盛，不容易感染，然，到我这里似乎就不像他们说的那样，问题接二连三的出现，但我从这一连串的失败中从一个懵懂无知者变成一个动作娴熟的能手，说句实在话还得感谢这批细胞给我带来的宝贵经验。 首先我要说一点：无菌操作 刚一接手细胞时，无菌相关事项早已耳熟能详，但我的第一批细胞在传 ...

1． 材料和试剂 1.1培养液A ：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）。 1.2培养液B：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）和终浓度为0.7--1μg/ml 的放线菌素D。 1.3 L929细胞株：鼠结缔组织纤维母细胞，来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。 1.4 结晶紫染色溶液：0。05%结晶紫 (50mg结晶紫加入20ml乙醇加蒸馏水 ...

293细胞培养技术，供大家参考。 1、293细胞明显适应酸性环境pH值在6.9～7.1时可顺利贴壁生长 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。 2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇使之流遍所有细胞表面即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s镜下观察细胞变圆就可加DMEM ...

【求助】有没有战友用24孔板做过成骨细胞的钙结节染色计数？ 参与者：qianjunqz 有没有战友用24孔板做过成骨细胞的钙结节染色计数？如果有，请问在这一过程中要注意些什么问题？谢谢！！ 参与者：houjiaquan 染色后还要计数吗？怎么操作？关注中 参与者：qianjunqz 我也没做过，在文献上看到，很多都做钙化结节染色计数 参与者：sunlijun0918 是用四环素染色吗，我做过统计钙 ...

我做的是胃癌三种细胞株MGC-803BGC-823以及SGC-7901的培养，具体方法步骤如下 1）细胞传代： A将复苏长满细胞的培养瓶中培养基吸出加3ml 0.86%生理盐水洗涤两次弃去洗涤液加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml消化液均匀覆盖细胞表面消化时间约1-3分钟。 B消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆边缘折光性增强在细胞尚未脱落时倒掉消化液立即加入血清或含血清的培养基终止消化。 C 用 ...

【求助】ELISA测细胞上清肿瘤坏死因子TNF-a 参与者：juaden 我做体外细胞实验看某种药物刺激下小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-a的量 买的是BIO-source的ELISA试剂盒 标准曲线很正常 但是挑选LPS作为阳性对照 阳性结果很不明显 几乎就是空白值 请教做过的老师同学 LPS浓度和刺激时间有什么特别的要求么？ 还有 细胞上清测之前需要特殊处理么？如蛋白酶灭活之类的 谢谢！ 参与者： ...

【求助】关于TGF-Beta，FN酶联免疫（ELISA）试剂盒的选择 参与者：txl4fox 我是要酶联免疫（ELISA）的方法测细胞上清液中的TGF-Beta，FN抗原的表达情况，关于ELISA试剂盒的选择我想请教几个问题：我想买酶标板自己包被一抗，那我应该如何选择ELISA试剂盒？有没有不带酶标板只带一抗，二抗，酶底物，以及底物显色剂而且够做五六张板的ELISA试剂盒？如果没有，是不是我应该分 ...

1、传代前24h先将组织块去除：等到细胞覆盖瓶底80％以上后进行组织块去除操作。可用弯头玻璃吸管将组织块轻轻挑起吸出，确保无组织块留下，以防坏死污染。 2、胰酶消化：倒掉旧培养液，用D－HANKs液清洗两边，加入已预热（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后镜下观察，发现胞质收缩，细胞间隙增大，立即用含胎牛血清的培养液终止消化。 3、弯头吸管吹打细胞：吹打一定时间后到镜下观 ...

【求助】急：免疫细胞化学PBSA和PBST的配制 参与者：greentrees 搜索了一下，没有找到详细的配制方案 不知道这两个怎么配制阿？ PBSA=PBS+BSA，BSA是买的sigma分装的，浓度1% PBST中的T是Triton嘛？我看到很多是指Tween，也有说是Triton的，到底是哪个阿？T的浓度多少阿？ 爬片的洗液是不是TBS比PBS更好呢？ 我要检测的目标抗原在胞浆内。 参与者： ...

【求助】请问细胞凋亡后beta－actin会降解吗？ 参与者：xywu2003 我的蛋白可能有凋亡作用，用anti－beta actin抗体做wb，未转染细胞（正常细胞）有条带，转染空质粒和带目的基因的质粒无条带，请问这是为什么？ 参与者：jfeiharry beta actin is a type of cell skeleton protein.Its gene is a house keep ...

原代培养 1.取新生3d以内BALB/c小鼠，断颈处死后立即投入75%酒精中消毒5min（虽有头部皮肤保护，但时间不要过长，所以事先要把准备工作做好之后再去杀老鼠）。 2.D-Hank’s液漂洗后分离颅盖骨，刮除骨膜和结缔组织，DMEM清洗颅骨骨片并剪碎。（自我感觉碎一点好一些） 3.加入0.25%胰蛋白酶（含0.02EDTA），37°恒温消化20min，吸出消化液，之后1mg ...