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凝胶过滤实验方法 1.凝胶的选择 根据层析物质分子量的大小选择不同型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的G25或G50，G250多用于分离蛋白质单体，G200多用于分离蛋白质凝胶聚合体等。 2.凝胶的预处理 称取适量的凝胶加入过量的缓冲液在冰箱（或室温）中充分膨胀，或在沸水中煮，膨胀时间应根据不同型号的凝胶而定。 凝胶量与型号和层析柱大小与规格及凝胶用量 ...

1.凝胶层析操作简便，所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质—凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。 2.分离效果较好，重复性高。最突出的是样品回收率高，接近100%。 3.分离条件缓和。凝胶骨架亲水，分离过程又不涉及化学键的变化，所以对分离物的活性没有不良影响。 4.应用广泛。适用于各种生化物质，如肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸的分离纯化、脱盐、 ...

凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质，当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时，由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢，在缓冲液洗脱时，分子量大的物质不能进入凝胶孔内，而在凝胶间几乎是垂直的向下运动，而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行，这样就可以按分子量的大小，先后流出凝胶柱，达到分离的目的。 具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、 ...

1，透析袋浓缩法 利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%－40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。 主要用于更换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特 ...

由于所含营养物质的限制，单一的饲料原料无法全面满足动物的营养需求，这就应选取不同的饲料原料，按各种动物的营养要求及每种原料的营养物质含量互相搭配，使其所提供的各种营养素均符合饲养标准所规定的数量，这样的设计步骤称为日粮配合。但在实际运用中是按日粮的饲料百分比配制出大量混合饲料，即按生产目的相同的动物群体配制大批混合饲料，这样的饲料称为饲粮。 在畜牧业及实验动物行业，习惯上将动物所用的饲粮称为配合饲 ...

动物所需营养素的种类及影响营养需要量的因素 实验动物和其他动物一样所需的营养物质根据化学组成的不同共有约50种，就其主要功能可大略分为以下三大类： 作为能量来源：脂肪、碳水化合物、蛋白质； 作为身体构成成分：蛋白质、矿物质； 调节身体功能：维生素、矿物质。 各种实验动物对以上所提到的营养素的需要量是不同的，除受到遗传因素影响而有存在的明显的种间差异外，还因性别、年龄、生理状况而不同。 1、动物维持 ...

1、玉米 玉米具有适口性好、价格低廉的特点，属于能量饲料，是饲料业的首选原料。黄色玉米籽实中还含有维生素A元的色素即隐黄素，数量虽然不多(约1PPm)但与其他籽实类饲料相比较，仍不失为优点。由于玉米含有较高的淀粉，故能值较高。玉米的蛋白质中赖氨酸和色氨酸等几种必需氨基酸含量较低，蛋白品质稍差，在实际使用当中应与其他含蛋白质较高的原料（如豆饼）相混合，而不能单独使用。 玉米含有较多脂肪，且其中不饱和 ...

饲料的分类 实验动物的饲料原料以植物为主，为了弥补蛋白质的不足，也采用少量的动物性饲料。 1、粗饲料 包括干草类及绝干物质中粗纤维含量≥18%的糟渣类、农副产品类树叶类等。 2、青绿饲料 天然水分含量≥60%的青绿饲料类、树叶类及非淀粉质的块根、 块茎瓜果类。 3、青贮饲料 用新鲜的天然植物性饲料调制成的青贮饲料及加有适量糠麸或其他添加物的青贮饲料。 ...

人们把生物从外界摄取维持自身生命所必需的物质及其消化、吸收和排泄过程称为营养(nutrition)。而人类饲喂给的营养物质称为饲料(feedstuff)对食物或饲料中所包含的各种营养物质则统称为营养素（nutrients）。 自然界中的各种物质均由化学元素所组成，在已知的一百多种元素中，至少有26种为动物所必需，这些元素绝大部分以化合物的形式存在。目前已清楚了解到，动物需要的营养物质达数十种，可以 ...

1.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制 1.1 各种母液的配制 1undefinedYNB：（含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基） 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基（无硫酸铵）+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。 50undefinedB：（0.02%生物素 Biotin） 4℃保存 保存期为1年。20mg的生物素溶于100ml水中，过滤除菌。 10undefinedH：（0.4%Histidi ...

1、在病原生物学领域中的应用 甲醇酵母表达系统经过20多年的发展，已成为较完善的外源基因表达系统。应用该系统已高效分泌表达了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)、人血清白蛋白、蛋白酶抑制剂、膜蛋白等。。。在国内，甲醇营养型酵母表达系统主要应用在病 原生物学领域，如：SMAD4 (肿瘤抑制基因)蛋白、痘苗病毒生长因子(VGF)戊型肝炎病毒结 构区ORF2蛋 ...

1、问：我用毕式酵母表达一个27KD的蛋白，小量表达并做SDS－PAGE有一条类似三聚体的条带。用大量表达，表达上清用镍柱进行亲和层析，在FPLC上可以看到一个大峰，但跑电泳却没有发现条带，为什么呢？请赐教 参考见解：你在大量表达后有没有跑电泳检测?表达上清用镍柱亲和层析后洗脱液有没有电泳检测?你首先要做的是:1确定你的蛋白确实有表达;2亲和层析是表达的蛋白确实被洗脱下来了.然后再考虑FPLC的事 ...

酵母菌是单细胞真核生物，具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点，被认为是表达外源蛋白的合适宿主。几种工业酵母尤其是巴氏毕赤酵母(pichia pastoris Pp)，因具有旺盛的生长力以及其它一些独特的性质，已发展成为较成熟的蛋白生产的表达系统。已有许多细菌、真菌和高等动植物的基因在Pp中成功表达(如破伤风毒素片段Ｃ，12g/L)，但也有许多蛋白的表达量 ...

试验的注意事项 1、信号肽识别位点的设计 以质粒pPICZαA为例。在利用PCR反应在外源基因两端引入酶切位点的试验中。如果质粒pPICZαA双酶切中丢失了KEX2蛋白酶的酶切位点Lys－Arg，应该在上游中，增加了编码Lys、Arg的密码子AAA、AGA 。酵母细胞膜中中的KEX2蛋白酶是α-factor信号肽的切割酶，它能有效识别酶切位点Lys－Arg，通过 ...

P.Pastoris表达载体及其元件 由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或 Zeocin) ...

问：在实验室里做工艺，我用到2万转的告诉离心机进行微滤的前处理，不知道生产中的转速能达到这个吗？ 答：我们这里有13000转的。 答：管式离心机可达到1万转以上。 ...

离心技术是根据颗粒在匀迷圆周运动时受到一个外向的离心力的行为发展起来的一种分离分析技术。 1、用于工业生产的，如化工、制药、食品等工业大型制备用的离心技术，转速都在每分钟5000转以下。 2、用于生物、医学、化学等实验室分析研究的，转速从每分钟几千到几万转以上，此类技术的使用目的在于分离和纯化样品，以及对纯化样品的有关性能进行研究。 基本原理 1、离心力Centrifugal force ( ...

问：请问质粒提取中各步离心时离心力怎么确定？离心力的大小是不是对质粒的提取很重要？谢谢！ 答：现在提质粒的技术已相对成熟，离心时一般都用12000rpm/min；也有一些方法是采用10000rpm/min，对质粒的影响不大。但在提取大分子量质粒时，要特别注意离心的速度，速度过高会使质粒断裂。离心力在质粒提取时很少会提到。至少我没有听说过。 ...

问：我想分离平滑肌中的神经细胞，用1000转离心5分钟，共3次，得到的神经节特别少，是不是转数问题？ 答：我每次都是1000转8分钟，两次，效果还可以，不过也是越来越少。我认为不是细胞没有离心下来的原因，是本来细胞数量就少，我们肉眼所看到的越来越少，只是离心洗掉了很多杂质的成分，如一些膜的成分。 答：每一次离心都会丢细胞你可以延长离心时间减少细胞丢失。 ...

问：有没有人了解生产中使用的离心机，一般如何去选择型号规格，离心前的溶液密度多大合适？板框过滤和离心那个效果好些，板框能达到离心的澄清效果嘛？ 答：板框过滤倒是经常用，板筐过滤，还真是头一回听说。如果想用离心代替过滤，可能转速大些的会好点，1w转以上的应该就可以了，上离心机的药液浓度不宜太大，以免离心过程中损失过多，具体多大的药液密度，买了设备自己考察吧，不同的设备，数据可能会有偏差。 答：我公 ...