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问：我要合成四段长约10aa的肽来做免疫动物(兔子)，获得抗体(多抗)，想问一下在多少纯度合适？多少合成量合适？不胜感激！ 答：合成越长越好，纯度越高越好，量越大越好。不过太长了不容易合成，纯度更难以掌握。容易操作应该是指肽合成量大后，使用起来更宽裕一些，不至于太紧张。类似帖子以前也有，搜索一下吧。 答：合成长约10aa的肽有点短了，建议合成15aa的肽。纯度90%以上足可以了。合成多少量，取决于 ...

问：想合成一个12肽和22肽作为检测抗原检测猪血清中的抗体。考虑到不好直接包被，欲与载体偶联。请教用什么载体合适？合成肽是否需要加特殊氨基？ 答：12肽和22肽未必很难包被到板子上，你可以先尝试一下直接包被，检测一下。我们试过很多更小得肽，6肽，能够直接包被到板子上做实验得比例还是很大的。另外多肽得包被除了跟你多肽得大小有关系以外，还和你多肽得亲水性和暴露情况有一定得联系。如果确实包被不上，建议 ...

问：我手上有一15氨基酸的合成肽，要和BSA耦联，用于制备抗体，想用戊二醛法或用EDC/DCC法，但是我这合成肽中间的9个氨基酸是抗原表位，并且有含羧基的Asp和含氨基地Lys，用戊二醛法或用EDC/DCC法和BSA耦联会不会影响抗原性？还有没有更好的方法？希望各位赐教。 答：会影响。戊二醛法或用EDC/DCC法利用的是氨基酸残基的羧和氨基，尤其是赖氨酸的氨基。你的15氨基酸的合成肽内有巯基吗？如 ...

问：我现在合成一个小肽！有谁知道哪儿能查到比较系统的资料吗？或有谁知道应看那些书啊！我不只应怎样确定量的多少，还有具体用那种方法最好！ 多长的肽？ 准备用Fmoc？设备准备的如何？ 答：书的话，可以看看这本，Fmoc固相合成介绍的非常系统：Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis ...

利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针，避免了用双链DNA探针在杂交中自我复性，提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段，在严格的杂交条件下，可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此，寡核苷酸探针的研究，对于提高核酸杂交技术 ...

问：哪位知道根据32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤啊？我做的是骨骼肌，知道需要多少含量的骨骼肌，麻烦把详细的步骤告知，谢谢。 答：AMPK是一个蛋白激酶（protein kinase）吗？合成肽就是这个激酶的底物吧？如果是这样的话，您可以参看PKC激酶的测定protocol，很多公司比如sigma都有。（请参看附件，上面有详细的介绍和计算公式）。至于操作过程，简单的说，就是在 ...

黄惟庆、陈常德85版多肽合成，中国第一本多肽合成的专著。请下载： ...

倘若要将两种模拟肽段A和B（两者的氨基酸序列已知且已制备成功）合成一种新的嵌合肽，其多肽合成策略是否应该选用“固相合成法”中的以下策略：在固相载体上进行片段组合，即把一个个纯制过的保护多肽片段按次序接到固定在载体上的一个多肽片段上，从而得到需要的多肽。 也有文献提示，只需把A和B共轭联合在一起便可以到嵌合肽C（因为嵌合肽C仅仅是A和B的单纯连接，而并不改变A和B的序列）.倘 ...

是通过适当保护的亚磷酰胺核苷的3′端磷酸基团与5′末端羟基的酯化每次产生一个碱基而合成的，5′端羟基是通过一个接头连接到固相载体上。合成是从3′到5′的方向合成，而酶促反应是以相反的方向进行的。每一轮偶联反应包括四种反应：轻度碱水解、轻度酸水解、亲核取代和 氧化还原 替换。在偶联过程每一阶段反应后，未参与反应的化学物被洗掉。 ...

问：吴教授为什么不合成表面抗原、核心抗原表位（T.B.Th1)的氨基酸全序列？而只合成这些表位的部分氨基酸序列，再将他们组合在一起？如：核心抗原上第18-27氨基酸序列我们都知道是HbcAg的CTL表位，那141-151，117-215。。。都是什么？ 答：HBV核心C基因在不同亚型间最为保守 在它编码的180多个氨基酸中，CTL表位多位于第150位氨基酸（amino acid AA）以前，其中1 ...

1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。 今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建 ...

在肽合成的技术方面取得了突破性进展的是R.Bruce Merrifield，他设计了一种肽的合成途径并定名为固相合成途径。由于R.Bruce Merrifield在肽合成方面的贡献，1984年获得了诺贝尔奖。下图给出了肽固相合成途径的简单过程（合成一个二肽的过程）。 氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团（图中的X）保护的氨基酸共价连接在固相载体上。在三氟乙酸的作用下，脱 ...

合成的理论来讲主要就是把氨基酸按一定的顺序排列起来，利用氨基和羧基的脱水形成肽键，进而形成我们所需要的结构。为了避免副反应的进行，我们需要事先把不需反应的氨基进行保护，使它们在合成过程中不会参与反应，从而避免副产物的生成。否则，一般羧基活化方法使反应活性提高的同时总伴随着反应选择性下降;反之，选择性虽然改善，但反应活性则又不够。 因此，肽合成的根本问题是氨基的保护问题。合成多肽可以通过溶液相和固相 ...

基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是， 这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链， 同时产出N，N?/FONT>-dy ...

多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成。 具体合成由下列几个循环组成： 1. 去保护：Fmoc保护的柱 ...

本实验中由苯胺和醋酸经高温脱水而生成酰胺，由于反应温度高，会引起反应原料苯胺的氧化，所以此反应中加入还原剂金属锌以抑制苯胺的高温氧化。 本实验中产品是经水结晶而纯化的，结晶是最简单、有效、经济的纯化手段，结晶时常有少量絮状物不溶，导致加入过多溶剂形成不饱和溶液，使结晶收率低或不结晶。为此结晶溶液需过滤除去絮状不溶物杂质，对于遇冷结晶的溶液需保温过滤。为了得到好的结晶，常需保温结晶，结晶时间较长。 ...

问：现在有没有比较好的方法标记内毒素LPS的，或直接标记好的？ 答：可以用FITC标记的，附件是文献。 ...

（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl，pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。　　（2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl，pH7.4；11mmol/L EDTA； 0.5% SDS。　　（3）DNaseⅠ:干粉状DNaseⅠ(2000～30 ...

1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。 （1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。 （2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂： 新鲜变性的DNA 1-3 六聚核苷酸混合物 2（管5） dNTP标记用混合底物 2（管6） 加无菌重蒸水至 19 D ...

非放射性物质标记核酸探针的方法通常是通过在核酸分子中引入诸如半抗原、生物素等惰性小分子。这些小分子一般通过连接到dUTP等核苷三磷酸上。这种经修饰的核苷三磷酸再通过酶促反应掺入到探针中，例如用于随机引物法标记长链探针或是通过末端转移酶标记寡核苷酸的3′端。 杂交后用与一种酶相连接的抗体（或者如果是生物素，则用链霉抗生物素蛋白streptavidin）来检测，这些酶如碱性磷酸酶或辣根过氧 ...