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        32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤

        互联网

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        问:哪位知道根据32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤啊?我做的是骨骼肌,知道需要多少含量的骨骼肌,麻烦把详细的步骤告知,谢谢。

        答:AMPK是一个蛋白激酶(protein kinase)吗?合成肽就是这个激酶的底物吧?如果是这样的话,您可以参看PKC激酶的测定protocol,很多公司比如sigma都有。(请参看附件,上面有详细的介绍和计算公式)。至于操作过程,简单的说,就是在反应中加入ATP和32P标记的ATP,当然这个体系中有AMPK和合成肽。然后取固定体积点到P81膜上,磷酸终止反应,乙醇漂洗,液闪计数确定活力。

        激酶活性算法.pdf

         


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