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SDS碱裂解法小量提取小麦基因组DNA

1、取0.1~0.2 g左右小麦叶片于1.5 ml的Eppendorf离心管中,将离心管直接放入盛液氮的冰壶中冷冻。从冰壶中取出离心管,用小玻璃研棒直接插入离心管中迅速研磨,至淡黄色粉末为宜;2、向离心管中加入600 ml的DNA提取缓冲液“S”,振荡充分混匀,65 ℃水浴30 min,其间温和混匀几次;……

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小麦Southern杂交分析方法

1、取适量小麦基因组DNA,用适量的限制性内切酶消化完全(约5 U/mg DNA,酶切12 h左右),取少量电泳检测酶切完全性;然后依次用酚:氯仿和氯仿:异戊醇抽提,乙醇沉淀。而后溶解在20 ml TE Buffer中;2、在1%的琼脂糖凝胶上电泳10~12 h,电压为3 V/cm;……

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真菌菌丝DNA的提取

由于真菌菌丝体中多糖含量较高,很多方法不易去除干净,不能用于做基因组酶切。使用如下方法提取菌丝DNA产量高,多糖和蛋白质含量低,符合分子生物学研究要求。

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一些供评比的PCR仪器生产商/品牌

  PCR 技术现在已成为现代分子生物学实验工作的基础技术和有效工具,在医学、农业、检验检疫等领域中使用十分广泛。其核心设备-PCR仪经过不断改进,已经越来越完善和智能化,分类也更加细化,但厂家一般自行命名型号,技术指标的参数也不统一,给用户的选择带来了困惑和麻烦。   总体来说PCR仪可分为普通PCR仪、梯度PCR仪器和实时荧光定量PCR仪等。   下面将列出一些PCR仪器生产商/品牌供评比。

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原位PCR和原位RT-PCR操作规程

原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。

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增加RT-PCR特异性的办法

第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法,各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。随机引物法是三种方法中特异性最低的。Oligo(dT)起始比随机引物特异性高。基因特异性引物(GSP)对于逆转录步骤是特异性最好的引物。

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PCR实验操作程序

引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏,导致引物变质降解失效。④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等。

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人类基因组标准寡核苷酸库基因序列的选择和探针的设计

人类基因组标准寡核苷酸库针对人类基因组中20,726个确证的基因设计了22,740个70mer的寡核苷酸探针。每一个探针都经过了严格设计和优化,从而确保了基因表达阵列分析能得到非常好的结果。

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PCR反应中Taq酶的选择

随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入,PCR已成为一门相当成熟的常规技术,而热聚合酶(即Taq酶)的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶,能够满足多方面的实验需要。那么,如何选择最合适的Taq酶?根据用户经常考虑的指标,如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等,我们在这儿将主要的Taq酶归归类,其性质、用途也就一目了然了。

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博士德ELISA试剂盒一般操作流程

已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数。

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凝胶电泳新纪元

像所有自动化设备一样,我们所要做的就仅仅只是将样品放入机器,然后在电脑上选一个程序,然后,等着看结果。不过QIAxcel除了这些高度的自动化之外,更省去您在看到结果之前的漫长等待。从开始到结束,3-5分钟,完整的电泳结果就呈现在您的面前。

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质谱定量的简介和LC/MS监测的模式

传统上,在使用现代质谱定量之前,定量是用HPLC高效液相色谱和UV紫外检测器实现的。HPLC 药代动力学分析建立在保留时间、峰面积和紫外光谱性质的基础上的。HPLC方法的缺点是灵敏度不够、缺乏特异性。我们已经看到一些实例,一个化合物的确已经代谢了,然而保留时间和紫外光谱上,母离子和代谢物无法区分。这种缺少特异性的分析时不时会误导研究者。所以在药代动力学分析中,基于质谱的表征现在是一种新型的重要的工具。

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SNP(单核苷酸多态性)

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DNA的分子可视化视频

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进化是如何工作的——介绍

进化是如何工作的——介绍(1)

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“Real-time PCR”的四个循环阶段

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Real-time PCR 仪器使用(动画)

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RT-PCR步骤

RT-PCR的实验步骤: 取200mg组织,放到1.5ml EP管中,加入1ml Trizol剪碎。震荡30s。加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min……

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过氧化钠的使用安全

过氧化钠,黄白色粒状粉末,易吸收空气中水分和二氧化碳。密度:2.6,熔点:5960℃(分解),用于氧化剂、漂白剂、脱臭剂、防腐剂、医药品、水的精制、纤维的染色和印染以及矿石的处理等。

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铝粉(Al)的使用安全

铝粉,无气味,银白色金属粉末,自燃温度:5900℃,粉尘爆炸下限:40g/m3。用来制造:油漆、油墨、颜料和焰火,也可用作多孔混凝土的添加剂。铝还可作为治疗和医药用品,此外还用于汽车和飞机工业。本品无毒,对呼吸道有致肺纤维化作用。

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