彩色免疫金银染色方法的基本原理是在IGSS法的基础上,根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的,即IGSS后,在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应,将银颗粒氧化成溴化银,后者与彩色显影剂起还原反应,生成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料,并沉积在银颗粒的部位,金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位,不会发生非特异性背景染色。
物理显影液的配制:硝酸银显影液、乳酸银显影液、醋酸银显影液、彩色显影剂的配制、漂白液的配制、定影液的配制、缓冲液。
微量移液器之拆解与组装方法步骤:微量移液器 (micropipet) 是进行生化实验或分子生物学实验的必备工具,然而使用方法的正确与否,以及微量移液器的准确性,都直接影响了实验结果的正确性。
微量移液器基本使用方法:选择适当的Pipetman:不同型号的微量移液器,各有其吸取体积范围,请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。
微量移液器的使用与准确度检测:将适当微量移液器之体积调整圈调至总体积处,以干净的微量移液器头吸取管中的溶液,并检查……
检测微量移液器的准确度:天平上预先放置秤药纸或秤药盘并归零……由结果判断你的微量移液器是否该校正维修了?
蛋白质纯化实验中,将会测定 b-glucuronidase (GUS) 的活性,是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质,加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色,可测定 415 nm 之吸光度,利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。
仪器用具: 酒精灯 接种环 药品试剂: E. coli 菌株 (JM109) LB 培养液: 1% (w/v) Bacto tryptone 0.5% Bacto yeast extract 1% NaCl以5 N NaOH 调至pH 7.0 后,以湿热法灭菌。 LB agar plates: LB 培养液中添加1.5% (w/v) Bacto agar. 方法步骤: 1) 每组应有一支15 mL ...
DEAE membrane吸附法分离与纯化DNA片段利用离子交换的原理,在低盐情况下使DNA 吸附在带正电荷的滤膜上,再利用含有高浓度盐类的缓冲液将DNA 自膜上溶离下来。
Silica gel吸附法分离与纯化DNA片段:经BamHI 及HindIII 作用的pBlueGus 及pQE31,置于65℃水浴10 min,移至冰浴降温后,以含EtBr 的1.0% agarose gel 进行电泳 (两种样品各用六个wells,每个well 注入30 μL 样品)。
DNA 的定量与连接反应:纯化的gusA 片段与经BamHI/HindIII 作用的pQE31 片段混合后,末端序列互补的部份会进行黏合,但仍须藉由DNA ligase 催化phosphodiester bond 的形成,将缺口接合起来。
利用冰冷的CaCl2 制备competent cells以传统方法进行质体的转形。 仪器用具:37℃培养箱;42℃水浴;冰浴 药品试剂: 0.1 M CaCl2置冰浴中 2 M glucose: 取18 g glucose溶于水中,并调体积至50 mL,无菌过滤,分装后置 -20℃贮存。 2 M Mg2+: 取20.3 g MgCl2 · 6H2O及24.65 g MgSO4 &mi ...
取80 mL SOB培养基装入250 mL灭过菌的三角瓶。 另取1 mL SOB加于微量离心管中。由SOB固体培养基上选8 个约2~3 mm大小的单一菌落接入1mL SOB中,震荡将菌体打散后,加入80 mL SOB中,于37℃震荡培养约2~3h,直至细胞数约为4~7×107/mL.
X-Gluc 可被GUS作用而释出蓝色的产物,若转型株所带的质体接有gus 基因的重组质体,则应可在IPTG 的诱导条件下表现出蛋白质,若此重组蛋白质具有GUS 活性,可将进入菌体的X-Gluc 分解而使菌落呈蓝色
mRNA提取纯化
Precellys组织匀浆器
高通量提取植物组织
组织匀浆器
这个方法是以phenol 及chloroform 溶菌后直接进行电泳分析,并未将质体DNA与宿主细菌染色体DNA 分离,得到的DNA 也不能用限制酶作用。
在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。