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一、 材料　　不同来源的DNA(50ng/ul)。 二、设备 　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。 三、试剂 　　1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。 　　2、Taq酶：购买成品。 　　3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。　　4、MgCl2 ：25mmol/L。 　　5、dNTP：每种2.5mmol/L。 四、操作步骤： 　　1. 在 ...

Step 1: Take an 100 mL aliquot of frozen cells from the -80oC and innoculate about 500 ml to 1 L sterile LB broth. DO NOT ADD antibiotic since these cells do not have an plasmid in them. Work as steri ...

The ChIP (chromatin immunoprecipitation) method has emerged as a very powerful tool to study in vivo protein-DNA interactions. It has been applied to the dynamics of chromatin structure regulation by ...

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and exp ...

在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等。以下就密码子最佳化、翻译终止效率和真核细胞中异源蛋白表达的问题加以说明。密码子最佳化（codon optimization） 遗传密码 ...

限制性内切酶可特异地结合于一段被称为限制酶识别序列的DNA序列位点上并在此切割双链DNA。绝大多数限制性内切酶识别长度为4、5或6个核苷酸且呈二重对称的特异序列，切割位点相对于二重对称轴的位置因酶而异。一些酶恰在对称轴处同时切割DNA双链而产生带平端的DNA片段，另一些酶则在对称轴两侧相对的位置上分别切断两条链，产生带有单链突出端（即粘端）的DNA片段。1个单位限制性内切酶是指在最适条件下，在50 ...

Choice of bacterial strain: The bacterial E. coli strains we use when plating out cDNA and genomic libraries are normally LE392 and NM538 but some times we also use XL1-blue cells. Streak out bacteria ...

脾细胞1．材料(1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。(2) 1640培养液(3) 2.5％FCS－1640营养液2．操作方法(1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。(2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。(4) 用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入小试管中。(5 ...

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或 ...

PCR克隆主要有TA克隆法 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一 ...

Introduction This manual is a compilation of many of the everyday methods used in the average molecular biology laboratory with emphasis on the techniques for large scale DNA sequencing protocols and ...

目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠－大鼠，小鼠－人以及人－人杂交瘤技术。一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。免疫程序、剂 ...

骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。选择骨髓瘤细胞的条件：①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者的组织相容性抗原一致；②骨髓瘤细胞必须是静息状态，不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外；③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度最好106个细胞/ml；④生长速度快，繁殖时间短。目前常 ...

In an attempt to be concise and understandable introductory level courses and textbooks frequently present concepts that are technically correct but lead to misconceptions on the part of the student b ...

Preparation of Chromosome-sized Yeast DNA Molecules in Solid AgaroseGrow 5 ml yeast culture in YPD Broth to " stationary" (OD600 10-14)Transfer 1ml to a microfuge tube ( PGC Scientific 2.2ml tube #509 ...

These protocols should yield enough cytosol and organelles for 1-200 MT/Organelle motility assays.Solutions and Reagents Freshly removed or flash frozen rat liver PBS Homogenization Buffer Homogeniz ...

I. Useful Values 1 mg/ml tubulin = 10 µM (assuming MW of ab-tubulin heterodimer is 100000; in reality it is ~110000 but almost all tubulin labs use this convenient conversion relationship) 1 µm of a m ...

LEVEL I Figure 7.3 Isolated microsomes Figure 7.4 TEM of hepatocyte MATERIALS 1% Glutaraldehye (GTA) 1% Osmium tetroxide Epoxy or vinyl resin for TEM TEM photomicrograph of liver cells ...

Although many protocols for tubulin preparation are available the procedure described below is the simplest and highest yielding preparation I have done. The protocol calls for 3 pig brains and shoul ...

I'm trying to do a southern blot and I have a trouble the bands I get are the same bands that appear in the genomic DNA digestion my probe is specific and it works in northern blot.Thanks -PPlopez- ...