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Detection of b-Catenin Localization by ImmunohistochemistryMethods in Molecular Biology v468. chapter 7Abstractβ-catenin is a widely expressed 90-kDa protein with dual functions in cell adhesion and Wnt signalling. At the membrane, β-catenin forms complexes with E-cadherin ...

Detection of Cytoplasmic and Nuclear Localization of Adenomatous Polyposis Coli (APC) Protein in CellsMethods in Molecular Biology v468. chapter 6AbstractThe adenomatous polyposis coli (APC) tumour suppressor gene is mutated in the majority of colon cancers.APC is a multi-dom ...

Inhibition of Glycogen Synthase Kinase-3Methods in Molecular Biology v468. chapter 5AbstractThere are two homologous forms of glycogen synthase kinase (GSK)-3, GSK-3a and GSK-3b, whichplay overlapping roles in the regulation of Wnt, Hedgehog, and insulin pathways, as well as the act ...

AbstractGlycogen synthase kinase (GSK)-3 is a key signalling intermediate in the action of Wnts. This protein kinaseis ubiquitously expressed and has high inherent activity but is inhibited by activation of Wnt signalling oractivation of growth factor receptor tyrosine kinases (e ...

AbstractRecombinant expression of secreted Frizzled-related proteins (sFRPs) in mammalian expression systemsis a convenient source of these proteins for biological studies. Yields of protein vary; screening of clonallines for high expression is usually worthwhile. Hep ...

Wnt proteins and their signaling cascades are involved in a wide variety of developmental processes, andderegulation of this pathway is frequently associated with tumorigenesis. Unlike many other growthfactors, Wnts long eluded biochemical purification, in large part because of their hydrophobic nature,which is imparted by one or more lipid modifications (1 – 3) . Here I describe a complete protocol thatoutlines the purification process for Wnt proteins. While this protocol has not been applied

Embryonic development of multicellular organisms is an incredibly complex process that relies heavily on evolutionarily conserved signalling pathways to provide crucial cell–cell communication. Typically, secreted signalling proteins such as Wnts, BMPs, and Hedgehogs released by one cell population will trigger concentration-dependent responses in other cells located some distance away. In adults, the same signalling pathways orchestrate tissue renewal in organs such as the intestine and ski

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。 1、细胞固定和通透 为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键，细胞和抗原需要保证最佳的结构，并利于抗体与抗原 ...

·什么是粪便潜血试验？ 粪便潜血试验（FOBT）是对粪便样品执行的测试，以检测正常颜色粪便中的潜血（即肉眼不可见的血液）。粪便潜血通常是上消化道或下消化道内部慢性出血（通常是间歇性出血）导致的。慢性出血并不改变粪便的颜色或产生可见的明亮的鲜血。因此，血液只能通过实验室测试粪便来发现。潜出血与其他形式的更快速的胃肠道出血的很多原因相同，比如直肠出血（直肠鲜血通道和/或血凝块）和黑粪症（由于上肠道出血比如溃疡导致的柏油样大 ...

树突状细胞培养操作步骤准备补充剂将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后，把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子，轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B，它们都是以100X 的原液状态运输的。注意：此时不要将化合物B加入培养基中。DC基础培养基不带细胞因子，因此使用时必须另外自行添加。新鲜分离的单核 DC 细胞的传代对于新鲜分离自 ...

1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决没有ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带，而内参用同样体系就没有呢?引物被 ...

1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决没有ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带，而内参用同样体系就没有呢?引物被 ...

一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度 ...

qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验，也看了很多的资料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单的说就是：首先将一次实验的所有基因Ct值整理好，之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值，得到的数就是△Ct ...

基因表达的定义：每当说到基因表达，我自己都觉得不知所云，是指RNA，还是蛋白？是指mRNA还是包括风头正旺的非编码RNA？mRNA还有不翻译的RNA呢。应该说转录水平指的是RNA水平，而蛋白应该叫翻译水平？我们这里就特指编码蛋白的mRNA的量的检测。方法：很多很多，我们常用的也就是RT-PCR和northern（实际上我也只知道他们，丢人啊），但是RNA酶保护分析在国外很常用，也有半定量的功能，一次性试剂盒还能以此 ...

缺血性脑血管病的发病率、病死率和致残率均很高，越来越受到研究人员的重视。目前，急性脑梗死的早期诊断主要依靠临床检查和神经影像学技术，但CT或MRI检查通常在数小时后才能显示病灶。通过检测血清神经元特异性烯醇酶(NSE)、S100蛋白(s100B)水平虽然可早期诊断，但同样也缺乏特异性和敏感性。近期的研究表明，脑梗死超早期可出现血清心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)水平增高，且敏感性和特异性较高，可作为早期诊断缺血性 ...

许多同学都会遇到这么个问题，每当要进行一个从没有做过的实验时，总会抓狂，到哪找protocol呢，度娘似乎是万能，但是度娘总是返回一些乱七八糟，浪费时间的Protocol。想必，这一直是困大家的问题。好吧，师兄今天将传授你七种兵器，帮你你找到它。1. 查实验工具书比如《分子克隆指南》、《蛋白质技术手册》、《蛋白质-蛋白质相互作用》、《Using antibodies》、《动物细胞培养——基本技术指南》等等，这些参考书中都较为详细地介绍 ...

白色念珠菌(Candidaalbicans)又名白假丝酵母菌(Saccharomycesalbicans)属假丝酵母菌属(Saccharomyces)。在SDA上培养2日后涂片镜检，呈革兰阳性(如图1)，但着色不均，菌体呈卵圆形(2.5~4μm)、薄壁;而在玉米粉一吐温80培养基上培养3日后涂片，可见顶端圆形的厚壁抱子(如图2)。白色念珠菌以出芽方式繁殖，在适宜的培养基上有芽生孢子及假菌丝生长，在假菌丝间其末端形成厚膜孢 ...

近年来，CRISPR技术掀起了基因组编辑的热潮。短短一年间，CRISPR技术已登上了数个知名榜单，包括Science的十大科学突破，Nature Methods的值得关注技术，以及Technology Review的十大突破技术。利用CRISPR技术发表的文章更是层出不穷。今天就和大家分享下CRISPR实验的主要步骤及需要考虑的因素。第一步，你要确定你做CRISPR的目的，即选一个CRISPR系统你要考虑清楚为什么 ...

目前，国内正规的制药行业均依据《药品生产质量管理规范》(GMP)进行工厂管理，生产环境的要求及其严格。为了保证药品质量安全，GMP中对不同类型药品的生产环境洁净度都进行了限定，因此，生产环境监测就成为了把关药品生产安全的重要一环。最新版《药品生产质量管理规范》附录1：无菌药品中，第十一条指出：“应当对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法(如棉签擦拭法和接触 ...