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RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 一、RT和PCR时的引物设计一定要先知道目的基因的序列。 在RT时，引物设计 ...

一、拖尾 现象：产物在凝胶上呈Smear状态。 原因： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数 二、假阳性 现象：空白对照出现目的扩增产物 原因： 靶序列或扩增产物的交叉污染 对策： ...

一、实验目的 1．学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法。 2．理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性。 3．了解引物设计的一般要求。 二、实验原理 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR )：原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93-95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～65℃）情况下，两条人工合成 ...

本次在线讲座重点介绍内参在real-time PCR病原体检测中的应用。Real-time PCR可快速、灵敏的检测病毒RNA和DNA以及细菌DNA，因此是许多应用的理想工具。为提高检测过程的安全性，协助对阴性结果的解读，应使用阳性内对照。 此次研讨会将介绍： 1. 病原体分子诊断中的挑战 2. 适用于不同病原体检测的各种内参 3. QIAGEN的新型内参，可用于实验室的不同检测 主讲人： Li ...

第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。 引物种类对特异性的影响 随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。为了获得最长的cDNA，需要按经验确定每个RNA样品中引 ...

卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测动物组织中β-兴奋剂类药物的方法公布如下：

随着分子生物技术的发展，科研及临床检测要求的提高，核酸纯化方法也经历了密度梯度离心，酚氯仿、苯酚、异戊醇抽提，二氧化硅吸附等化学物理方法。目前，基于硅胶膜对核酸特异结合的原理所开发的方法已成为核酸纯化的主流方法。为了减少化学、物理因素对核酸的破坏和降解，科学家们力求开发快速、温和的纯化方法，在确保遗传信息的完整性同时，提高工作效率。而KingFisher磁珠纯化法不仅满足了科研工作者对核酸质量的高要求，同时其自动化、通量高、速度快、灵敏度高的特性也提高了科研工作者的工作效率。目前转移磁珠的磁珠纯化方案正在逐步替代以往的各种方法，特别是目前普遍应用的离心柱法。

1. 脑瘤模型 可用甲基胆蒽等化学致癌埋于皮层，或用肿瘤移植的方法复制脑肿瘤。 2. 脑卒中模型 常用显微手术结扎大鼠、猫、狗的大脑中动脉和将自凝血块注入颈内动脉，引起梗塞。 3. 癫痫模型 家兔肌肉注射马桑内酯或噪音刺激大鼠等方法常用作复制癫痫模型。 4. 脑水肿模型 于颈内动脉内注入伤寒内毒素制作急性模型或外力作用引起外伤性脑水肿。 ...

二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌：取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。 按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次。其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。共约4个月可诱发成肝癌。或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。 4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌：用含0.06%DBA的饲料喂 ...

1. 新生大鼠窒息后实验性脑瘫动物模型： 新生大鼠清醒局麻状态下，行右侧颈总动脉结扎术，再将动物置于恒温密闭玻璃容器中，通以8 %氧气+92 %氮气的混合气体，2 h后取出，观察幼鼠表现，然后分组断头取脑。 2. 大鼠中枢性痉挛性瘫痪模型： 按手术先后随机将上述上肢痉挛性脑瘫的大鼠分为2组，每组8只大鼠。实验组：切 断C6神经根。 3.大鼠痉挛性脑瘫模型的改进： wister大鼠，雌雄不限，20 ...

SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上述坐标的钻孔开骨窗，去除颅骨，挑开硬脑膜，用自制双刃不锈钢刀片(宽2mm，厚0.1mm)按上述坐标从脑冠状面插入脑内。然后将刀向外移 ...

Ambion and Applied Biosystems have joined forces to provide a complete convenient solution for performing gene silencing experiments and validating the results by real-time RT-PCR. Ambion's Silenc ...

植物制片是进行园艺植物科学研究所需用的一种基本方法，比如进行植物各个器官的解剖构造观察、花芽分化研究、授粉受精观察、贮藏营养观测以及染色体观察等等都需要进行制片。 。通过对切片结果的分析，可以比较不同试验处理的效果以及了解不同树种和品种相应的生物特性等。植物制片技术是一个相对独立的体系，内容繁多。

背景： 全血中提取DNA是一项古老又基本的分子生物学的工作，根据不同的下游的实验和分析，历史上使用方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，硅胶模离心柱吸附法，磁珠法，等等。各种方法都有自己的优点和缺点。不同的方法适合不同的下游实验需求。一直以来血样，尤其是病例血样的采集是一个很繁琐和高成本的问题。随着时代的发展，各种成本更是急剧上升，准确、清晰的采集血样的成本急剧上升的后果是研究工作者非常 ...

microRNA是一类小分子非编码RNA，在调控基因表达方面发挥着重要作用。最近有研究表明，不同的肿瘤显示出特异性的microRNA表达谱，肿瘤来源的microRNA能被释放到循环系统中，进入血液组织。而在血液组织中，microRNA能避免被RNase降解，具有良好的稳定性。因此，血清血浆中的microRNA有成为肿瘤生物标志物的潜力。例如，最近的研究发现在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的血清中miR-21的含量比正常人群高。

在细胞中，成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC)，降解靶mRNA或者抑制转录（图1）。在人类中普遍存在4种Ago蛋白（Ago1-Ago4），在Ago家族蛋白中表达最多的是Ago2，它具有Slicer活性，可切割其靶RNA，在microRNA调控路径中具有重要意义。针对这种Ago蛋白，利用抗体，经RISC免疫沉淀，即microRNA与靶mRNA共沉淀，由此可回收microRNA。

一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并 ...

一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化，则必须至少3×108 的细胞，这样才能正确 ...

一、技术背景： Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy 同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒 ...

1. 应该在细胞状态最好的时候，进行病毒接种或复苏； 2. 接种前头天，进行细胞传代，细胞数量应以能让细胞在第二天内达到覆盖满90%的培养瓶为准，并且一定要在细胞传代后48h内接种病毒； 3. 第二天细胞长为单层且状态较好时，开始接种病毒； 4. 先移弃培养瓶中的生长液，用undefinedPBS轻轻洗细胞面3次，最后用移液管吸干净培养瓶中残留的undefinedPBS。为保持培养瓶中pH环境的稳定，及减少undefinedPBS对细胞 ...