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1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物，轻轻吹打混匀，冰浴 30 min。 3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90 秒，立即放入冰浴中 2 min。 4. 加入 0.9ml SOC，于 37℃恒温摇床上 200rpm×1hr 温育。 5. 将菌液 4000rpm/min 离心 3min，留 200μ l 上清将菌体打散 ...

此方法适用于小量质粒DNA的提取提取的质粒 DNA可直接用于酶切PCR 扩增。 1. 取 1.5ml 细菌培养物于 EP 管中，4000rpm 离心 1 分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽量干燥； 2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的 100μl 溶液 I (50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/L EDTApH 8.0，25 mmol/L Tris-HClpH 8.0) 中，剧烈振荡； 3. ...

1. PBS 溶解抗原为 30 μ g/ml，加 100 μ l/孔于 PVDF 膜铺底的 96 孔灭菌板过夜； 2. 第二天吸去包被液后，加 5％FCS 的 PRMI 1640 培养基 100 μ l 封闭 1 小时，37℃； 3. 准备脾细胞悬液（用氯化铵去除红细胞，制备成单个脾淋巴细胞悬液） ； 4. 从 1 × 106/ 孔开始，按 1:3的稀释度开始逐孔稀 ...

实验动物免疫方案 1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。 2、免疫方式：皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。 3、不同动物免疫所需抗原量（以蛋白免疫为例） >18-20kDa <18-20kDa 动物 抗原量 最佳抗原 ...

1. 挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2mlSOB 培养液中，37℃摇床过夜。 2. 取 0.5-1ml 过夜培养的菌液 转种到 50ml SOB 中，18℃剧烈震荡，直到 A600达到 0.6。 3. 将培养物转移到 50ml 离心管中，4℃ 4000rpm/min离心 10min。同时在冰浴 上配置 TB 溶液。 4. 弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。 5. 取 1 ...

一. 细胞复苏与培养 将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞 ...

一、重组蛋白质的诱导表达 1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于3ml 选择性 LB 液体培养基中，37℃，250rpm/min振摇培养过夜。 2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10 ml（1: 20）选择性LB 液体培养基中，37 ℃，250 rpm/min振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本，10000g 离心 1 min 收集 ...

1. 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中，称琼脂糖带的重量； 2. 按照每100mg加 400μl 的量加入binding buffer， 放入到EP管振荡器中， 45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要 5 分钟） ； 3. 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2 分钟，8000rpm 离心1 分钟，弃 EP 管中的液体，将纯化柱放回 EP 管中； ...

一、按下列组成在PCR 反应管中调制反应液 Reagent Quantityfor 50µl of reaction mixture 10×One Step RNA PCR Buffer 5µ l 25 mM MgCl2 10µ l ...

定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科。目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳（DIGE）、同位素亲和标记（ICAT）等。同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术。结合非凝胶串联质谱技术，该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达8种不同样本同时进行定量分析。 蛋白 ...

DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异，统计学 ...

一、包被抗原 1. 用 50mM 的碳酸盐包被缓冲液 （pH 9.6） 溶解抗原， 使抗原浓度为 10-20 μg/ml，加 100 μ l/孔到 96 孔酶标板，4℃放置过夜。 2. 第二天弃去包被液后，用 PBST 洗涤 3 次，每孔加入 150 μ l 1％ BSA 37℃封闭 1 小时。 3. PBST 洗涤 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀释度的血清 ...

一、裂解细胞 1. 收集细胞。将培养瓶置于冰上，倒掉培养基，用PBS 或生理盐水漂洗两 次，留适量液体于瓶内，然后用特制的细胞刮棒朝一个方向刮取细胞。 将细胞悬液转移到离心管，离心取沉淀，-80℃ 保存。 （收集细胞要迅速， 低温下进行，以减弱蛋白酶的作用） 2. 裂解细胞。采用 RIPA裂解体系，使用前 4℃ 预冷，按 107 个细胞加入 1.0ml 裂解液，吹打混匀，加入适量的蛋 ...

1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子； 2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml） ； 3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固； 4. 室温下 30~ 45 分钟后凝 ...

一、DNA聚合酶的选择 实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymerase。TaKaRaTaqTM是一般的DNA 聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRaEXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA聚合酶，具有一定的保真性，而 ...

中医“证”的模型是在动物身上复制临床不同的症候，以不同的证型表现出来。 一、阳虚模型 肌注醋酸氢化考的松，口服地巴唑，羟基脲或手术切除双侧肾上腺。 二、阴虚模型 喂饲甲状腺片、皮下注射L-甲状腺素钠盐，人工高位小肠侧瘘手术。 三、脾虚模型 喂饲含大黄、玄明粉、番泻叶的低蛋白饮食，或皮下注射利血平。 四、寒证模型 三联疫苗腹腔注射，口服寒凉泻。 五、热证模型 口服或注射温热 ...

在收集到生物材料之后，最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。 1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizo ...

ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法 1. 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将 ...

在一般的概念里，ELISA技术的可操作性强，不需复杂设备，甚至完全手工加样、洗板和肉眼判读结果，便可完成该技术的操作。随着人们对质量控制意识的加强，尽可能做到最低限度的减少系统误差，以及减少劳动强度等观念的不断改进，解决ELISA技术中加样、温育、洗板及判读结果过程的系统误差问题及高效率运作问题导致了自动化概念的形成。ELISA技术的加样、温育、洗板及判读结果过程的科学地、有机地、系统地结合，尽 ...

一、脑瘤模型 可用甲基胆蒽等化学致癌埋于皮层，或用肿瘤移植的方法复制脑肿瘤。 二、脑卒中模型 常用显微手术结扎大鼠、猫、狗的大脑中动脉和将自凝血块注入颈内动脉，引起梗塞。 三、癫痫模型 家兔肌肉注射马桑内酯或噪音刺激大鼠等方法常用作复制癫痫模型。 四、脑水肿模型 于颈内动脉内注入伤寒内毒素制作急性模型或外力作用引起外伤性脑水肿。 ...