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红色荧光蛋白（red florescence protein，RFP）是细胞研究的常用蛋白标记，是细胞生物学示踪研究中的重要标记物，荧光显微镜下可被直接观察，因此被广泛用于肿瘤的生长、浸润及血管发生等追踪性研究［1-2］。质粒转染和病毒转染是将RFP 转染到细胞内的常用方法。慢病毒作为一种较新的病毒载体，具有转染能力强、毒性小、目的基因表达稳定等优点。 通过含有红色荧光蛋白基因的慢 ...

神经干细胞（NSCS）是指一类具有多分化潜能（能分化为神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞），能自我更新和克隆性增殖的一群细胞。在NSCS移植研究中，有必要对NSCS进行示踪标记，以便实时跟踪和区分植入的NSCS和宿主细胞。绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因是一种新的报告基因，其表达产物GFP可在紫外光或蓝色光激发下稳定地发出绿色荧光，不需要任何底物或 ...

QuickShuttle系列转染试剂是由北京康碧泉生物科技有限公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点。QuickShuttle特别适合用于快速、高效转染各种常规哺乳动物细胞，尤其是用于各种病毒载体的大规模制备。 QuickShuttle区别于常规转染试剂的几大特点： 1. 某些细胞可在传代后未贴壁时立即转染（即立传立转）； 2. ...

细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo?荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病 ...

QuickAntibody系列免疫佐剂是由北京康碧泉公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，专业用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体。 与常规使用的弗氏佐剂的比较 QuickAntibody佐剂特色详解： 1、为什么无需乳化？ QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂，抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下，即可混匀；弗式佐剂为油性佐剂，需要繁琐的乳化，形成 ...

概述 cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中，在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因，因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。 cDNA文库显然比基因组 ...

1 光学显微镜和倒置显微镜 （1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 （2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评 ...

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活 ...

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微 ...

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ? 和Mg? 依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200bp核小体DNA多聚体。 DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3'-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶 ...

1. 实验目的 通过实验了解细胞凋亡的一般过程和形态特征，了解诱导细胞凋亡的因素；学习和了解细胞凋亡检测的常规手段，掌握利用梯状DNA电泳法鉴定细胞凋亡的方法。 2.实验原理 细胞凋亡是多细胞生物体在发育过程中或在某些环境因子的作用下发生的受基因调控的主动的死亡方式。对于生物体的正常发育、自稳平衡及多种病理过程具有极其重要的意义。细胞凋亡（apoptosis）的概念最早由Kerr于 ...

以小鼠腹水型肝癌细胞亚系Hca/16A<3>-F为细胞株，建立小鼠皮下种植瘤模型，用依托泊苷Vp-16治疗，诱导该肿瘤细胞耐药，一周后建立耐药模型，再用重组人肿瘤坏死因子α衍生物K2Rh-TNFα-Dk2治疗，通过电镜下的形态学观察以及促凋亡基因bax和抑凋亡基因bcl-2的蛋白表达情况，来研究TNF-α能否诱导对Vp-16耐药的肿瘤细胞凋亡，为克 ...

原代心肌细胞的培养及实验方案 取出生后0~24 h C57BL/6cr小鼠心脏，按改良的Lader方法进行细胞的分离。 获取博动的心脏迅速放置于无Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡液中。剪碎心脏，放置在4℃条件下100 g/L的Trypsin溶液中消化16~18 h，用Trypsin抑制剂中止消化。然后在37℃下，用胶原酶Ⅱ于CO2培养箱内，在摇床上继续孵化消化45~60 min， ...

1 适用范围 本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。 本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 2 血凝试验 2.1 材料与试剂 2.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、注射器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。 2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方 ...

药物敏感试验简称药敏试验（或耐药试验）。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。 一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目性，往往 ...

胚胎冷冻对活组织和细胞进行冷冻保存时冷冻过程将可能对细胞造成损伤.主要的损伤机制包括：①溶液效应造成化学损伤.在冷却速度较慢的情况下胞外溶液中水分大量结冰.与海水中的冰山主要是淡水形成而盐分很低的情况相类似细胞外溶液结成的冰中溶质很少这样就造成胞外溶液浓度提高从而使胞内水分大量渗出细胞强烈收缩并使细胞长时间处于高浓度溶液中；②细胞内结冰造成物理损伤.冷却速度过快时胞内水分来不及通过 ...

胚胎移植技术是克隆、转基因、体外受精和性别鉴定等各项胚胎生物技术研究和发展必要的技术手段和环节也是目前比较流行的动物繁殖技术之一。 供体、受体母牛的选择 提供胚胎的个体称为供体，而接受胚胎的个体称为受体。 (1)供体母牛的选择：供体牛选择的原则 当制定应用胚胎移植计划时，一定要慎重地选择好适合的供体牛，要求 健康无疾病、具有较高的育种价值和生殖机能处于较高的水平。技术和经济两方面考 ...

异种体外受精是将不同种动物的雌雄配子模拟体内条件混台培养使其融合受精的一项生物高技术。通常采用金黄地鼠卵为雌配子与各种哺乳动物或人的精子进行实验 ，因此又称精子穿透试验(SPA)。人精子与地鼠卵体外受精结果与人同种体外授精呈高度正相关系。可取代人卵用来检测人精子的受精能力。SPA可反映精子获能、顶体反应精卵相互作用诸多方面的功能，因此可用于以上方面的生理学、药理学和毒理学角度的研究。目前国际上已广 ...

酵母感受态细胞的制备 (1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜； (2)测定过夜培养物的OD600值为3.0～5.0之间； (3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2～0.4； (4)在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其OD600值达到0.6～1.0； (5)于室温1500g离心5 min ...

一、 神经干细胞的分离和传代 无菌条件下取新生SD大鼠(出生48h内)脑组织，D-Hanks液充分漂洗后，在解剖显微镜下剥离脑膜，准确分离海马，用眼科剪将海马剪碎后，再转移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的无血清培养基，吸管吹打机械分离制作单细胞悬液，台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞浓度为5×104~5个/ml，置于24孔培养板中培养，每孔 ...