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RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)技术(二)

一、RIP技术简介 由于miRNA被发现在癌症机理中起重要的作用,尤其是与肿瘤转移相关联,因此对于miRNA的研究来说,最让人兴奋的是有希望应有于癌症治疗中的RNA 抑制疗法或模拟miRNA表达疗法,尤其是对于出现肿瘤转移的癌症病人的治疗。 但是miRNA具有成百上千个靶标,所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应与肿瘤发生之间的联系,是一项非常具有挑战性的工作,尤其是在癌症研究中鉴别 ...

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RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)技术(一)

一、microRNAs(miRNA)简介 1. microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。 miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA结合到核糖核蛋白(Ribonucleoprot ...

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RNA蛋白免疫沉淀技术简介

一、RNA蛋白免疫沉淀技术简介 RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的 ...

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GUS报告基因的定性和定量检测

一、GUS报告基因的定性检测 GUS能与显色底物X-gluc 反应,显现蓝色,因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好,组织定位精确,成为在植物中运用很广的报道基因。 1. GUS染色底物的配制 按下表1配制GUS染色的底物。 表1. GUS染色底物的配制 试剂名称 母液浓度 母 ...

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MLPA方法与遗传疾病检测

MLPA(Multiples ligation-dependent probe amplification),多重连接依赖探针扩增,是一种在同一反应管内检测多达50个核苷酸序列的拷贝数变化的方法。MLPA可以快速同时鉴定几十个基因的缺失和插入,可用于血液,肿瘤样本的DNA,mRNA的表达谱分析。而且,MLPA方法可用于甲基化分析。MLPA已经证实是可信而可靠的方法,目前已广泛应用于全世界900多 ...

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微载体培养技术的介绍

微载体培养技术(micro-carrier culture technique)于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展,该技术日趋完善和成熟,广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认最具发展前途的一种动物细胞大规模培养技术,其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点,且容易放大。该技术已广泛用于培养各类型细胞,如293细胞、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞。 一、 微载 ...

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基因芯片数据处理流程与分析介绍

当人类基因体定序计划的重要里程碑完成之后,生命科学正式迈入了一个后基因体时代,基因芯片 (microarray) 的出现让研究人员得以宏观的视野来探讨分子机转。不过分析是相当复杂的学问,正因为基因芯片成千上万的信息使得分析数据量庞大,更需要应用到生物统计与生物信息相关软件的协助。要取得一完整的数据结果,除了前端的实验设计与操作的无暇外,如何以精确的分析取得可信数据,运筹帷幄于方寸之间,更是画龙点 ...

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如何选择进口高压灭菌器

进口高压灭菌器因其使用的安全性和自动化程序高,深受实验室用户的喜爱。那么,怎么才能买到称心如意的产品呢?怎样区分哪些产品是原装进口?哪些是国内组装产品呢?下面将告诉您如何选择进口高压灭菌器: 在选购进口高压灭菌器之前,首先需要了解,进口高压灭菌器,尤其是50升以上的进口高压灭菌器,在中国属于特种设备,在使用前,用户需要向当地的特种设备检查机构(或是锅检所,或是技术监督局,按各地的实 ...

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细胞培养中一定要用血清吗?

动物细胞培养技术在生物技术领域起着重要的作用。它在生物医药领域、细胞工程、酶工程等领域中都是不可缺少的工具。 培养基是人工配制的满足细胞生长和维持的营养基质。培养基的发展大致经过3个阶段:天然培养基阶段(直接采用某些组织凝块、生物性液体和组织提取液等作为细胞的培养基),合成培养基阶段(如DMEM、RPMl 1640等)和无血清培养基阶段。合成培养基通常需在其中添加一些诸如血清(常用 ...

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以生物路径丛概念从事复杂疾病之基因分析

在后基因体时代,基因芯片 (microarray) 的出现让研究人员得以宏观的视野来探讨分子机转。在许多努力和资源投入到寻找新的疾病基因后,许多单基因疾病已成功地找出致病基因。然而,在复杂疾病 (例如高血压、糖尿病及一些常见癌症) 的研究上,收获却不如期待中的丰富。大多数复杂疾病的研究中都可找出分布在不同染色体上的致病基因,但其与疾病仅有小至中等的连结 (linkage) 或关联性 (assoc ...

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新型发光试剂ImmunoStar®Zeta的开发

前言 日本和光纯药株式会社于2009年正式将免疫印迹高灵敏度发光试剂ImmunoStar®LD(code NO.290-69904等)投放市场。这种试剂的发光底物,使用了鲁米的诺衍生物L-012(8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido 4-d pyridazine-14-(2H 3H ) dione Sodium Salt)。L-012与鲁米诺相比,发光信号更 ...

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PCR操作规程及污染的监测与防治

PCR与定量PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度,但易污染一直是困扰各实验室的大问题,极微量的污染就可能造成假阳性反应,破坏试验结果。如何监测与防止PCR污染,是现在各实验室的重要课题。一、污染监测一个好的PCR实验室,必须要时刻注意污染的监测,考虑是否受到污染,如有污染,是何原因造成的。通过有效地监测,采取正确的相应措施,防止或消除污染。对照试验是监测PCR污染的重要手段。1、阴性对照:阴性 ...

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脂肪干细胞(ASCs)的提取及鉴定

一、实验技术及原理 运用细胞培养技术、流式细胞术(体外扩增后ACSs的表型会发生改变,主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化),差异离心术(可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离,沉淀中除ASCs,还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞,基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中,基质细胞可贴壁,造血和其他杂质细胞不贴壁,在随后的传代过程中被出去,最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态 ...

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大鼠间充质干细胞培养

一、细胞复苏和接种 1. 37℃预热大鼠间充质干细胞培养液(RM-001)和基础培养液(RM-001B)。 2. 从液氮中取出细胞产品管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。 3. 在生物安全柜中,用75%的酒精擦拭产品管外壁。 4. 将产品管中的细胞移至15 ml无菌离心管中,慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液(RM-001B)4-5ml混匀 ...

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肽的溶解性及溶解方法

肽的溶解性 根据经验,溶解肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列,所以,如果实验允许,肽序列中至少应包含20%的带电残基以增加其溶解度。 在使用之前,客户可以遵循以下三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多肽。首先,所选溶剂一定能充分溶解多肽。其次,所选溶剂能与实验条件兼容,最后,所选溶剂不能与肽反应,也不能使肽降解。只要肽的量允许,可 ...

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抗癌磁导靶向药物缓释制剂

一、简介恶性肿瘤严重威胁人类健康,全世界每年新增肿瘤病例1000万,死亡达600万,占年死亡总人数的12%。我国肿瘤患者总数约450万人,发病率以每年2.5%的速度增加,年新增患者180-200万人,死亡率约占总死亡人数的20%。目前大剂量化疗药物对正常组织产生极强的毒副作用和化疗间歇期耐药肿瘤细胞出现、癌症转移几率增加是化疗失败的主要原因。因此寻求高效、低毒的针对恶性肿瘤病变组织的靶向药物或靶向 ...

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细胞大规模培养技术之细胞滚瓶培养

随着细胞培养技术在大量生产疫苗和生化制剂领域的不断发展,对细胞基质的需求量越来越大, 迫切需要发展大规模培养细胞的技术。大规模的动物细胞培养开始于本世纪50年代,经过多年来的研究,人类对动物细胞培养技术进行了大量的研究开发,取得了很大的进展。通常用于疫苗和某些生物制剂生产的原代细胞核二倍体细胞属于贴壁生长细胞,因此贴壁生长细胞的大规模培养技术一直备受关注。 贴壁生长细胞的大规模培养 ...

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磁性微粒偶联生物分子的原理以及使用

xMagTM磁性微粒表面分别含有氨基、羧基等功能基团,利用戊二醛或1-乙基-3碳二亚胺(EDC)等偶联试剂,将蛋白质、抗体和核酸等生物分子共价结合在其表面,可应用于蛋白纯化、免疫学检测、核酸纯化和核酸杂交检测等领域。 产品特点 偶联稳定:共价偶联保证在苛刻条件下生物分子仍可稳定固定于磁粒表面。 高效偶联:相比同类产品具有更多的活性基团,有效提高生物分子的利用率。 操作简单:借助磁性 ...

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白酒塑化剂的整体检测解决方案

日前,媒体报道的白酒塑化剂风波持续发酵,月旭公司也在密切关注事态发展,并在第一时间内迅速组织相关技术人员讨论和开发应用解决方案,现已开发出全套的专业检测方案。可以为您提供分析所需的:固相萃取小柱、液相色谱柱、气相色谱柱、滤膜和过滤器等各种色谱耗材,也可以提供相应的技术支持和解决方案。 为什么白酒中会出现增塑剂? 媒体报道这次事件中并未发现人为添加塑化剂,但是并没有说明 ...

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抗体和重组蛋白的使用及保存方法

无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,Immune tech的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。 1. 收到抗体和重组蛋白后的操作 & ...

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