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一、按实际用途分类 实验用动物分为：实验动物、家畜家禽观赏动物、野生动物 二、遗传学分类 1. 同基因型动物 （1）近交系动物是同胞兄妹或亲子之间交配20代以上，基因纯度可达98.6%以上。 血缘系数（R）：个体间遗传相似的程度达99.6% 近交系数（T）：个体间遗传基因纯合的程度达98.6% （2）杂交子一代动物两个不同的近交品系动物之间进行有计划交配所获得第一代动物，简称F1 ...

一、 遗传质量的控制 1. 遗传控制的目的 （1）是有效地区分不同品系的近交系动物。 （2）是发现遗传污染。 2. 遗传监测的内容和原则 （1） 遗传测定的内容 ①严格的繁殖制度 ②具有详细完整的遗传背景资料 ③遗传监测的技术和方法。 （2）原则（4E原则） ①exact 准确 ②easy 简便 ③efficient有效 ④economics经济 （3） ...

一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施 亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的5-甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败，体会如下： (1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在3.0～3.9 mol/L为好，其pH值必须用NaOH精确调整至5.0 ...

一、基因组DNA的提取。 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。 使用两者的细节： 1. 蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20 mg/ml； 2. RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10 mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消 ...

DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6~1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。 一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得，你可以自己算一下OD260/OD280，如果在要求的范围内，说明你的OD320偏高，即可能有有机物污染，比如酒精未充分挥发。 纠正一下，纯DNA的A260/A ...

一、总RNA的提取 总RNA的提取方法多种多样，目前常用的酸性异硫胍一步法、Trizol法和使用标准RNA分离试剂盒。抽提的关键是尽量减少RNA酶的污染，为减少假阳性，相比较的样品在同一条件下应用同种方法同时抽提，抽提的总RNA在反转录前必需经过脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNaseⅠ）充分消化，可设立不加反转录酶的对照来检验DNA是否被去除。紫外分光光度仪测其纯度，甲醛变性凝胶电泳测其完整性，28sRN ...

巢式PCR的定义 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通 PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。巢 式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢 ...

1. 在western实验中，通常有人采用TBS，有人采用PBS，在使用中有什么区别？ 选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很重要的。PBS的缓冲能力强于TBS（因为混合缓冲液在一定的离子强度下常常具有更宽的缓冲范围），TBS在pH7.0以下缓冲能力较弱（不过PBS易污染）。但我们常常要根据我们实验目的选用合适的缓冲液，如在蛋白纯化中进行阴离子交换层析 ...

1. 凝胶肿胀或卷曲： 注意转膜之前，切割下来的凝胶一定要在转膜缓冲液中浸泡平衡5-10分钟，要含有20%的甲醇。 2. 条带歪斜、或漂移 因为转膜仪使用时间太长，两块板之间的海绵由于长期使用变得很薄。当按照阴极-海棉-滤纸-胶-膜-滤纸-海绵依次放好后两块板不能压紧，因而在胶和膜之间可能存在潜在的间隙，电转移时蛋白从胶和膜之间的空隙中流走，形成如图所示的形状。使用十几张 ...

免疫PCR主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定过程；第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中，首先用待测抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相应的特异抗体，于是抗体就与固相上的抗原结合形成抗原抗体复合物，蛋白A-链亲合素（Protein A-Streptavidin）嵌合体（重组融合蛋白）中的 ...

一、注意事项： 1. 清洗厚薄两块玻片：初次使用需要用酒精棉球擦拭干净。经常使用用自来水冲洗干净后，再用单蒸水冲洗，晾干。也可用酒精擦拭。 2. 取合适大小，容器将各液体依次加入，在加AP和TEMED前将玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich，放在水平桌面上锁定后，固定在casting stand上，注意垂直放置，压紧底面的胶条 ...

1. 安装：（1）先找到图一所示的图标，双击安装。 图一 （2）系统重启后桌面出现图二所示的图标 图二 2. 激活：在文件夹找到图三 图三 （1）双击后出现图四所示的对话框 图四 （2）点击Apply patch后，打开桌面Quantity One图标，激活完成。 3. 应用： （1）首先，随便打开一个Western blot结果图片（注意：图片格式为T ...

1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。 2. 加一抗后最好4℃过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4℃也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。 3. 磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的 ...

（1）Tris 吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 （2）氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。 （3）X-半乳糖 （X-gal）：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。 （4）β-半乳糖苷酶：有 ...

1. DMSO DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。 DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电 ...

1. 测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入： 模板种类/长度 模板量 200 bp（PCR产物） 16 ng（120 fmol） 3000-5000 bp（超螺旋质粒DNA） 4 mg（2 pmol） 48 ...

由武汉大学生命科学院教授、武汉禾元生物科技有限公司董事长杨代常领衔的研发团队历经3年的研究与开发，利用水稻种子表达出多功效的重组人碱性成纤维细胞生长因子。相关论文 “Expression of a Functional Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor from Transgenic Rice Seeds”( ...

材料和试剂 1. 乙醇 2. 异丙醇 3. 氯化钠 4. EDTA（乙二胺四乙酸） 5. SDS（十二烷基磺酸钠） 6. Tris，pH7.5 仪器 1. 研钵及研杵 2. 台式离心机（Eppendorf） 3. 振荡器（VWR） 步 ...

方法和试剂 母液 1. 冰醋酸 2. 乙醇 3. 1 M NaOH(氢氧化钠) 4. 100 ml 1 M K2HPO4（磷酸氢二钾） 5. 100 ml 1 M KH2PO4（磷酸二氢钾） 6. 苯胺蓝（Fisher） 7. 甘油 工作溶液 1. 冰醋酸含量为10%的乙醇溶液（固定组 ...

原理 拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。 步骤 1. 准备种植用土 我们使用Miracle-Gro混合土（2立 ...