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        拟南芥花粉管苯胺蓝染色

        互联网

        12157
        一、方法和试剂

        母液

        1. 冰醋酸

        2. 乙醇

        3. 1 M NaOH(氢氧化钠)

        4. 100 ml 1 M K2HPO4(磷酸氢二钾)

        5. 100 ml 1 M KH2PO4(磷酸二氢钾)

        6. 苯胺蓝(Fisher)

        7. 甘油

        工作溶液

        1. 冰醋酸含量为10%的乙醇溶液(固定组织使用)

        2. 50 mM 偏磷酸钾溶液:4.17 ml 1 M 磷酸氢二钾+0.83 ml 1 M 磷酸二氢钾+995 ml 水,pH7.5

        3. 苯胺蓝含量为0.01%的KPO4溶液(染色)

        4. 含有50%甘油的偏磷酸钾溶液(封固剂)

        二、仪器

        1. 紫外显微镜

        三、步骤

        1. 在1.5 ml 离心管里加入250 μl 冰醋酸,将雄蕊浸泡到冰醋酸里至少固定1.5小时。如果需要可将组织过夜固定。

        2. 将固定完的组织浸泡在1 M 氢氧化钠溶液里过夜处理,是组织软化。

        3. 用偏磷酸钾洗植物组织三次。(在这个阶段植物组织是易碎的)

        4. 用200 μl 苯胺蓝对组织进行染色5-10分钟或者最久可以染色10小时。

        5. 染色后,将组织放置到载玻片上在紫外显微镜下观察。如有需要可以压片观察。

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