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一、清洗新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗，以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口，均已无菌密封包装，可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2～3次，晾干备用。细胞培养中的绝大部分器皿系玻璃制品，清洗过程为以下步骤。1.浸泡　新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30mi ...

原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。1.剪切组织　先将所取得的组织，用D-Ha ...

原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的最大利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。1.操作步骤（1）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。（2）向瓶 ...

1． 瘤细胞悬液接种（1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。（2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。（3）培养细胞应用PBS洗两遍。（4）计数并调整细胞浓度至107～108／ml。（5）常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml／部位，＞106细胞)。初次接种成功 ...

细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。 1． 冻存细胞 （1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。 （2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×107／ml左右密度，离心，去上清。 （3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 ...

细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。1.细胞形态　生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原 ...

1.实验原理　人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead提出来的。正常情况下，人外周血小淋巴细胞都处在G1期（或G0期），但在体外给予一定的条件，进行培养，经72 h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。在培养液中加入植物血凝素（PHA），淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，可抑制细胞分裂时纺锤丝的形成 ...

1.实验原理　染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。大小应为主核的1/20～1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，所以可用简易的、快速、灵敏的微核计数来代替繁杂的畸变染色体计数。Matter ...

动植物细胞培养是指动、植物细胞在体外条件下的存活或生长。动植物细胞培养与微生物细胞培养有很大的不同（表14-1）。由于动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长；对营养要求严格，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需有血清。动物细胞对环境敏感，包括pH值、溶氧、C02、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的监测和控制。相比之下，植物细胞对营养要求较动 ...

动物细胞体外培养的历史可追溯到1907年，美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基成功地在试管中培养了蛙胚神经组织达数周，创立了体外组织培养法。1962年，其规模开始扩大，随着细胞生物学、培养系统及培养方法等领域的不断丰富和完善，动物细胞培养技术得到了很大的发展。发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗 ...

植物细胞培养是指在离体条件下培养植物细胞的方法。将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，使组织分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，获得大量的细胞群体。小规模的悬浮培养在培养瓶中进行，大规模者可利用发酵罐生产。植物细胞培养是在植物组织培养技术基础上发展起来的。1902年Haberlandt确定了植物的单个细胞内存在其生命体的全部能力(全能性)，使成为植物组织培养的开端。 ...

　　生物体是一个高度统一的整体，而的主要对象是生物体内的各种细胞，很显然，在整体条件下研究单个细胞或某一细胞群在体内（in vivo）的功能活动是非常困难的。细胞培养的意义主要在于两点，其一是人工培养条件易于改变并能严格控制，便于研究各种因素对细胞的结构、功能和各种生命活动规律的影响；其二是细胞在体外培养环境中可以长期存活和传代，可以比较经济地、大量地提供在同一时期、条件相同、性状相似的细胞作为实 ...

　　（一）细胞培养在临床病原学诊断中应用　　临床上多种病原生物如病毒、立克次体、衣原体、胞内寄生的细菌、原虫等的分离培养和药物敏感试验是通过细胞培养技术完成的，如人免疫缺陷病毒(HIV)和新近出现的严重急性呼吸综合征(SARS)病毒等就是通过细胞培养发现的。临床应用微量全血培养技术诊断HIV的感染，已用于儿童HIV垂直感染的早期诊断及可疑感染者的确认。　　1． 病毒的分离的常用细胞　　对病毒性疾 ...

仪器及药品 冰箱、天平（0.0001g）容量瓶: 1000 ml 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺 标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol ...

为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键， ...

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA 不整合到宿主 染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它 调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分 析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β 半乳糖苷酶等来帮助检测。 ...

转染技术是指将外源分子如DNA，RNA 等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生 物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因 功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。影响转 染效率的因素有很多，细胞株本身的特性和活性，细胞培养条件，转染的DNA 或RNA 的质量， 转染方法，转染试剂的选择等。常规转染技术可分为两大类，一类 ...

转染效率收多种因素影响，主要因素有下面几个：1. 细胞培养物健康的细胞培养物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基，血清和添加物。低的 细胞代数（ 都会有专门的说明。推荐在转染前24 小时分细胞，这将提供正常细胞代谢，增加对外源DNA 摄入的可能。一定要避免细菌，支原体或真菌的污染。2. 血清大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清（FCS）经常用到，便宜一点的有马或牛血清。 通常的，血清是一种 ...

DEAE葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。磷酸钙共沉淀法因为试剂易取得、价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和CaCl2混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞 ...

1. 器皿洗涤玻璃器皿洗涤：新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡一昼夜，再用合成洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。已使用过的试管、烧杯、三角瓶等的洗涤方法是，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用合成洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上， ...