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在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验，所以我这里写的T载体构建只能算是入门级，给新手提供一点思路，有什么不足之处还希望大家多多指正。我克隆的这个片段大小是1.8kb，用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。反应体系：undefinedbuffer 5 ulMgCl2 5 uldNTPs 8 ulPrimer 1 1 ulPrimer 2 1 ulLA-Taq 0.5 ulcDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA）ddH2O up to 50 ul按照TaKaRa的说明书，我用了Cool Start法， ...

前不久在本论坛对转基因食品的一些探讨，中间发生了很多插曲，今天我收到了某生物工程的药理专业jinlzhao博士回信：全文如下：哈药：你好，最近太忙，无暇仔细阅读您的帖子，今日看毕，给出我的一点意见，你可以在合适的时候发出。首先声明，本人不熟悉转基因食品，但是本人有幸做过转基因动物实验。以我的经验以及我和国外几位转基因同行的交流，我发现，转基因动物实际上是不可控的，或者说是很难控制的。转基因动物的制作过程，在此我就不 ...

（1）取3 g样品，加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），用液氮研磨成细粉状，将细粉分为每份约3 g，并贮藏于-80℃下。（2）在5O ml falcon管中加入2O ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠（sodium tetriborate decahydrate）、30 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）、1% （W/V）十二烷基硫酸钠（SDS）、1%脱氧胆酸钠盐。再加入0.0309 g二硫苏糖（DTT）、200 ul乙基苯基聚乙二醇（NP-40 ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。常见的做法是在合成cDNA的双链后在两端连上接头，利用已知的接头序列再进行扩增 ...

以下是我构建载体的思路，但自己心里没底，不知是否可行，请各位老师指教!目 的：构建hPOT1正反义基因真核表达载体材料 DH5α大肠杆菌由学校细胞生物教研室提供；含全长hPOT1 cDNA的pLPCNMyc POT1质粒由美国Rockefeller大学的de Lange教授惠赠；pcDNA-3.1(－)真核表达载体购自美国Invitrogen公司；限制性内切酶BamHⅠ、Xho Ⅰ、Nhe I、T4DNA连接酶和牛小肠碱性磷酸酶（CIP）购自 ...

一、RNA抽提注意事项_尽可能无RNA酶的环境下操作，最好有专门场所_耗材的处理：电泳槽需0.5 M NaOH处理过夜后DEPC水清洗试管氯仿浸泡处理后DEPC水清洗枪头和eppendorf管DEPC水浸泡后灭菌处理_实验者本身防护：一次性手套，口罩等_启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成_正确的操作方式二、RNA操作常见问题分析　问题　　　　　可能原因　　　　　　　　解决方法产量太低　　　　样本裂解或匀浆不充分　　　延长匀浆时间　　　　RNA沉淀溶解不充分　　　　　　65℃加热可促进溶解A260/A2 ...

以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗RNA 干扰（RNA interference, RNAi）是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶（FAK）是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶，参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中 ...

尽管研究基因组的技术已经相当先进，科学家们还在致力不断的创新和改造技术使之更为强大。现代分子生物学两个划时代的技术——DNA芯片和RNAi (RNA-mediated interference) ，正在掀开生物医药的新篇章。RNAi，通过双链RNA引发目标靶基因沉默的一项强大的新技术，专一性强，可大规模操作，重复性高，应用前景极为广阔。另一方面，DNA芯片技术可以提供特定条件下一个细胞中所有基因表达情况的全景图，同样具有无 ...

DNA合成公司的尴尬和困惑DNA合成的价格降到这个份上，恐怕每家合成公司都在暗自掂量：还值不值得在DNA合成上继续投资？眼看人家国外的DNA合成公司已经把毛细管电泳、质谱分析等先进手段用在了Oligo DNA的质量监控，而我们还停留在PAGE检测上，条件稍好一点的，也就是再做一下HPLC分析。赛百盛近期与美国一家顶尖的DNA合成公司合作，对国内的DNA合成质量进行了一番分析研究。说是合作，是人家客气，其实是向人家 ...

http://www.ebiotrade.com/bbsf/xjszl/B20027816518.asp优化基因表达的关键因素之：基因的重新设计和合成密码子最佳化（codon optimization）遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons)，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用 ...

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编 ...

Gateway也可以被视为一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体（Entry Vector）后，就不用依赖限制性内切酶，而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶，高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体（Destination Vector，目的载体）上。Gateway的原理也是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子（INF、Int）的作用下，lambda的attP位点和大肠杆菌基因组的 ...

转载，感谢原作者DNA测序常见英文单词对照（1）Quantitative analysis of expression of myocardial CYP11B1 and CYP11B2 genes in rats of two groups Taking 100bp Plus Ladder as Marker,clear amplified strands could be seen at 440bp?461bp and 336bp sites,DNA sequencing proved they were the encoding gene seg ...

RNAi原理及演示1 RNAi的机制RNAi的机制可能是细胞内双链RNA在Dicer酶的作用下，可形成-22 bp大小的小干扰RNA(small interfering RNAs，siRNAs)，siRNAs可进一步掺入多部分核酸酶(multicomponent nuclease，RISC)并使其激活，从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了该基因在细胞内的翻译和表达.RNA酶Ⅲ是一种能切割双链RNA的酶，参与RN ...

Sequencher - DNA 序列分析软件Sequencher 是 DNA 序列分析的工业标准软件。它可以和所有的自动序列分析仪一同工作，并且因为它的极速 Contig 组装、很短的学习曲线、用户友好的编辑工具，以及卓越的技术支持而众所周知。从差不多 15 年前释出第一个版本到现在，Sequencher 在每个基因专业和制药公司中都应用与于序列分析任务，同时在全球超过40个国家里为数众多的学术和政府实验室中使用。Sequencher 被生命科学研究 ...

基因克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的Dundefined*段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此基因克隆又称DNA克隆、分子克隆、基因重组或重组DNA技术。基因克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的Dundefined*段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。为了方便大家学习和交流，我以问答形式介绍基因克隆及其常见 ...

影响电泳分离的主要因素：1. 待分离生物大分子的性质：待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质：缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH还会影响到其电泳方向，当缓冲液p ...

超经典的《miRNA实验指南》，美 Shao-Yao Ying主编军事医学科学院郑晓飞主译。研究microRNA的同仁值得一看。目录第一章microRNA---调控基因功能的RNA基因概述第二章microRNA前体结构分析第三章microRNA的生物形成-----分离与鉴定微处理体复合物第四章Pri-miRNA转录物的识别与切割第五章 以小鼠胚胎干细胞为遗传系统模型探索RNA干扰机制第六章microRNA与信使RNA的回归 ...

http://blog.bioon.com/user3/26347/archives/2007/148549.shtml含全文下载日本和美国科学家进行的两项独立研究，首次利用人体测表皮细胞制造出了类胚胎干细胞。这一技术有望用于特定疾病的干细胞研究和治疗，并且避开了利用晶胚或卵母细胞获得胚胎干细胞的伦理争议。相关论文分别在线发表于《细胞》和《科学》杂志。近些年来，从事干细胞研究的科学家已经试图将一些正常的体细胞直接转化 ...

刚才查文献时看到的，某机构发表的核酸相关研究的文章，都已经提供了PDF格式的链接。大家看看有没有自己需要的文献。http://genome.imb-jena.de/publications/index.pl2006:Birkenmeier G, Nicklisch S, Pockelt C, Mossie A, Steger V, Glaser C, Hauschildt S, Usbeck E, Huse K, Sack U, Bauer M, Schafer A (2006)Polymyxin B-conjugated ...