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在园中看到有些战友对质粒提取的问题有些误解。现把我找到的关于质粒提取的原理列在下面，希望对大家有所帮助。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后 ...

RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effec ...

本版精彩幻灯集锦中所有链接均来自DXY和网上,朋友各取所需吧!同贺DXY四岁生日!由于本人还不知怎样使用超连接,所以有点浪费版面!1 基因敲除幻灯(219.5k)http://www.dxy.cn/bbs/user/download/401898/last%20result.ppt2 一些RNAi的幻灯片a http://www.genesil.com/docs/index.asp?toPage=1&mySort=8b 因只是单个都超过了粘贴上 ...

1．目的学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的基本技术。2．原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的DNA酶切片段。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，微波炉，水漂，恒温水浴 ...

RNAi在药物最佳靶点筛选和鉴定中的应用摘要最佳药物靶点的筛选和鉴定是新药研发的核心，是药物开发的第一步，也是药物筛选及药物定向合成的关键因素之一。在过去十年里，科学界已经在此领域做出了巨大的提高，如：基因组学和蛋白质组学以及人类基因序列的测定，而且在制药工业的投资不断加大。然而新药研发受到多因素调节、单因素之间相互作用等复杂药物调节机制的制约，临床上药物疗效还涉及到药物代谢以及药物的毒副作用。因此急需能够 ...

做RNAi的战友可以先学习学习了。1、PTGS转录后基因沉默（post transcriptional gene silencing）一种首先在植物中确定，然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法，现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具――RNA干扰。2、协同抑制（Cosuppression）基因沉默的一种特殊情况，来源于转基因的RNA与同源内源基因同时被抑制。3、静息作用（ ...

打开峰图文件，依据图形初步判定测序质量，SAP酶纯化后的头峰杂度比较大，至少前50bp序列一般不可信，后续峰形如果还不错，主峰高、噪峰低、未见干扰峰，测序结果应该可信。一个正常的成功反应，能保证测序峰形清晰的长度为500 Bases (实际600 —800 Bases)。在进行DNA测序时，紧接引物的10 — 30 Bases有时不一定能完全读清楚。 由于DNA结构上的原因，有时会出现反应中途无法进行之情况。如：G/C rich; G/C Cluster；Po ...

1．电转化感受态细胞的制备1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，250 ...

我刚从生工测序回来，样品基因片段是用PCR扩增出来，约2.1Kb。扩增片段两端的酶切位点为Nhe1和Xho1，扩增这个片段的引物是这样：Ck-fullNX-F: 5' GTG CTA GCC ATG AAC AAT CCA TGG TC 3'Ck-fullNX-R: 5' GCG CCT CGA GCT ACA GAG ACT TAA AG 3'接在pcDNA3.1(+)的 Nhe1和Xho1之间。连接克隆后经酶切和PCR验证都完全正确。利用pcDNA3.1(+)的T7 promoter primer 和BGH引物从两端测序 ...

“分子克隆”第三版有下面两段话： DNA 和 RNA 纯制品的 OD260:OD280 值分别是 1.8 和 2.0，若样品中蛋白或酚的污染较严重，则 OD260:OD280 低于上述两个数值 (p1695 倒数第 5 行)。水饱和酚在 270nm 处有特征性吸收，其 OD260:OD280 比值为 2 (p1697 的框内倒数第 2 行)。当时看到时就觉得这两段话是矛盾的；翻看英文版，发现没有翻译上的错误。难道真的会出现这样的现象：在 OD260:OD280 比值为 1.8 的纯 DNA 中加入比值为 2 的水饱和酚，则比值会小于 1.8？试图找 ...

RNA 干扰是一种自然发生的基因沉默机制，应用于基因功能研究和临床疾病治疗，就成为一种功能非常强大的工具。不过，开展RNAi实验并不难，不需要特殊的仪器，RNAi实验所需的4大要素一点不复杂：1对应目标基因的dsRNA(siRNA,长dsRNA，shRNA载体,看实验需要）；2适合的转染或者其他将dsRNA递送进入细胞的方法；3适当的对照；4检测目标基因表达情况的方法1. 对应目标基因的dsRNA在非哺乳动物细胞中，直接 ...

国外癌症基础研究的主要进展黎彬 随着人类基因组计划的完成，加快了癌症分子水平研究的发展，本文对最近国外癌症分子水平的主要研究进展进行了分析。阐述了癌细胞作为侵袭性细胞所具有的6大特性。细胞癌变过程中关键的癌基因和抑癌基因如何发挥作用以及对抗癌治疗的影响。现代癌症基础研究的发展能够为癌的诊断和治疗提供更多途径以及更新的发展思路。通过癌症的基础研究为现代癌症治疗医学带来创新科学思维和行而有效的科学方法。1．有发展 ...

siRNA构建siRNA 质粒载体的构建RNA 小片段可以通过化学合成或质粒载体转录获得。质粒载体的构建是将长约70bp的含有特定茎环以及终止信号的DNA分子插入到特定载体中，该DNA分子可以 在细胞中转录为含有特定发夹结构的RNA双链分子。这些发夹RNA分子在细胞中被切割为19-23nt的双链RNA小片段，从而起到抑制特定基因表达的作用。siRNA 质粒载体的优点与化学合成siRNA相比，siRNA 质粒载体有以下优点：1. ...

来源：生物通第二代测序技术, 又称新一代测序技术, 是相应于以Sanger 测序法为代表的第一代测序技术而得名。第二代测序中3种主流测序技术分别为依次出现的 Roche/454 焦磷酸测序(2005 年)、Illumina/Solexa 聚合酶合成测序(2006 年)和 ABI/SOLiD 连接酶测序(2007 年)技术。与 Sanger测序相比, 3种新一代测序技术共有的突出特征是, 单次运行(run)产出序列数据量大, 故而又被通称为高通量测序技术。　　深圳华大基因研究院是国内 ...

随着人类基因组（测序）计划（Human genome project）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此，建立新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测、分析就显得格外重要了。基因芯片（又称DNA芯片、生物芯片）技术就是 ...

如何确认RNA的质量提取到质量良好的RNA（包括总RNA和mRNA，以下同）是非常困难，关于RNA的提取技术，我就不说了，为什么呢？或许各位非常关心呢，我是这样想的，我可以看到的资料或者是厂家的说明书，各位也同样可以看到的，内容当然都是一样的了，所以实验做的好不好，主要是心的投入多少的问题，所以希望大家自己多多思考啊！以下两种方法，相信大家都知道的：1）检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光 ...

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（s ...

丁香医学期刊征集《因特网医学信息应用》讲座专刊丁香园满3岁了。在过去的岁月里，许多战友通过学习检索知识，对于因特网的专业资源有了新的认识。论坛在专业知识交流的同时，仍希望在检索和医学信息的寻找和利用方面，继续保持特色。丁香医学期刊（电子版），是丁香园即将推出的专业在线杂志。在登载专业战友的研究成果以外，为了增强知识性和可读性，结合期刊的内容，准备不定期地开设专业医学信息应用方面的讲座。开设讲座的目的：1． 总结丁香园论 ...

1溶液配制:1.1 Buffer P1:(悬浮用)成分：50mM Tris.HCl, pH8.0, 10mM EDTA, 100ug/mL Rnase A配制：2M Tris.HCl, pH 8.025mL0.5M EDTA, pH 8.020mL双蒸水至 1L，灭菌。使用前每1L buffer加入100mg RNAse A，并于4℃保存。1.2 Buffer P2：（裂解用）成分：200mM NaOH, 1% SDS配制：8g NaOH固体溶解于500mL双蒸水中，成0.4M NaOH溶液10g SDS溶于500mL双蒸水中，成2% SDS ...

【鸡毛蒜皮】之巧用PCR—重组质粒的快速高通量筛选近几年，随着国内更多的公司掌握了Taq酶的制备技术，市场竞争进入白热化，Taq酶的价格一路猛跌，有的公司甚至推出跳楼价—1毛钱一单位。且不说具体哪个公司的质量好，单单从价格上就已经让人感觉到了类似北京冬天的大白菜和夏天的西红柿的味道。从另外一个方面来看，限制型内切酶的价格却多年不变，我们曾经一度以价格优势占领大片国内市场并把内切酶普及到更多实验室的华美公司近几 ...