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电转化 请教电转化 求助！电转化！！！！！！ 求助！电转化！！！！ 电转化！求助！ ［求助］关于电转化 关于电转化 请教 电转化TG1菌转化效率 急！ 球面对称设计在大肠杆菌JM109电穿孔转化优化试验中的应用 提取的质粒进行电转化的过程中怎样防止污染？？ 电转化,谁来帮我一下,现焦头烂额 求助：电转化仪器使用和实验步骤 枯草芽孢杆菌的电转化没有转化子，请指教！ 请问大肠杆菌能否用电转仪转化载体 SOS！电击转化老是失败！ 请问有没有师兄师姐做过电转化化学转化 请教：关于连接转化 关于连接转化的问题 ...

第四节 病毒载体携带的siRNA介绍在大多数真核细胞，RNAi是一个高度保守的机制，它被认为是基因表达和抗病毒机制的调节剂。1-4 RNAi是一个多级的过程，第一步是:在一种核糖核酸酶Ⅲ样的酶(Dicer5 )的作用下，双链RNA(dsRNA)被裂解成小干扰RNA(siRNA)。6这些21到23个核苷酸的siRNA随后参与构成RNA诱导的沉默复合物(RISC)，可以将siRNA带到同源mRNA的地方，并将其破坏。在2001年，E ...

我以前做的实验都是通过感受态的转化方法来转化枯草芽孢杆菌的。但是枯草芽孢杆菌的感受态转化效率比较低。最近我采用电转化的方法，但是遇到了一个问题：就是每次电击完毕后，加入复苏缓冲液37度复苏2h后，发现原来还混混的转化液竟然变得澄清了！涂布后一个转化子都没有！不知道是怎么回事？还有：垂悬菌体必须要温柔吗？我挺用力的，但不至于一个转化子都没有吧？质粒样品里面的RNA很多有没有影响啊？我的质粒RNA蛮多的。质粒加多了 ...

第三张“基因变异图谱”与第二代基因组测序技术——评“千人基因组计划”首期研究成果的医学意义世界上任意两个人的基因99%都是相同的，而恰是那1%不同，负责着个体间的表型差异。《自然》杂志近期披露，当人体内携带有250到300基因变异位点的时候，相关基因就就会“沉默”。甚至，一个人只携带了 50到100基因变异位点，就可能患上某种疾病。10年前，“人类基因组计划”这一耗资30亿美元、历时10余年的伟大科学工程完成之际，人们以为得到 ...

骨髓细胞染色体标本的制备一、原理骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者，特别是慢性或急性粒细胞性白血病，因为骨髓反映粒系统细胞增生情况，这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病，也不主张用外周血，因为加PHA刺激外周血培养，只能获得正常淋巴细胞分裂相，并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。骨髓细胞属不断增殖的细胞，培养可分短期培养和直接制片法，无论哪种其培养液中均不需加PHA。二、用品和试剂同外周血染色体制 ...

CGH（比较基因组杂交）: CGH用不同的荧光染料分别标记肿瘤基因组DNA（如spectrum-green-dUTP）和正常基因组DNA（如spectrum-red-dUTP），再以相同比例与正常人中期染色体杂交，然后测定沿染色体长轴的两种荧光信号的相对强度比值，通过肿瘤和对照DNA间荧光信号比值的差别找出肿瘤标本中异常DNA区域。正常染色体的绿红比率变化一般在0.85-1.15之间，超过此范围就是异常，若增加的倍数超过 ...

DNA分子标记、基因组作图及其在植物遗传育种上的应用(2)发布日期：2003-2-16 22:17:00 作者： 出处：中国农网b　SPARs(Single Primer Amplication Reactions)标记　通过采用基于微卫星或简单重复序列(SSR)的单一引物来扩增SSR之间的DNA序列(Gupta等，1994)。在二碱基，三碱基，四碱基和五碱基的简单重复顺序中，以四碱基的简单重复顺序最为有效。这些标记大多数散布于DNA序列中，它们多为 ...

Re:cDNA文库构建问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=729416BAC文库构建完全手册,无私奉献!欢迎下载!!!http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=969664这是我们常用的建基因组文库的流程，与大家分享。如有不足，尚请指正！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=895823cDNA文库建库流 ...

这段时间在作实验,这篇文章我觉得特别好,现在拿出来和大家分享一下!从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。每个曾经用碱法抽提过质粒朋友，希望你看本文后能有所收获。 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先 ...

一、 GFP背景概述绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由Osamu Shimomura于1962年在水母（Aequorea victoria）（图2a）中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用（图3）。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小，仅为27 ...

长期以来，肿瘤一直是严重威胁人类健康的重大疾病。目前，我国有恶性肿瘤患者约450万人，死亡率超过30%，而且每年新增的患者人数高达200万以上。然而，目前临床上治疗肿瘤的传统方法，如手术切除和放、化疗，对多数肿瘤的疗效有限，且始终未能彻底解决肿瘤复发和转移的问题，提示这些治疗手段很可能未靶向肿瘤发生发展的关键环节。新近的研究发现，部分肿瘤组织中存在少部分特殊细胞，被称为旁群细胞或SP细胞(side population ...

:)A腺苷脱氨酶缺乏症Aadenosine deaminase deficiency (ADA)定义：一种严重的免疫缺陷症，腺苷脱氨酶的缺乏可使T淋巴细胞因代谢产物的累积而死亡，从而导致严重的联合性免疫缺陷症（SCID）。通常导致婴儿出生几个月后死亡。腺嘌呤Adenine (A)定义：一种含氮碱基，是碱基对A-T（腺嘌呤-胸腺嘧啶）的一部分。腺病毒adenovirus定义：一组导致呼吸道疾病(包括常见的引起感冒)的DNA病毒。腺病毒 ...

本人刚刚开始做DNA抽提实验，遇到一些问题，请教大家。1）关于酚的PH值。我从公司买了一瓶tris饱和酚，略呈黄色，分上下两层。上层水相，下层是酚。我测了PH值，上层PH值是8，下层是5左右，我用试纸测的，没敢拿PH计测。问题是分子克隆那本书上说酚用tris平衡至PH值8.0，可是现在买的酚却是酸性的，怎么办呢？是自己再用tris平衡还是直接就能用啊？请有经验的战友解答,可能问题很菜，呵呵，谢谢大家帮忙。2）提取细胞DN ...

RNA干涉（RNAi）1995年，康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫（C. elegans）中的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达，而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA（sense RNA）以期观察到基因表达的增强。但得到的结果是二者都同样地切断了par-1基因的表达途径。这是与传统上对反义RNA技术的解释正好相反的。该研究小组一直没能给这个意 ...

重组质粒一月有余，颇有心得，与各位战友分享如下：1：关于双酶切的Buffer，一直是酶切的重点。有人喜欢A酶切完回收再B酶切，其实可以通过NEB网站上查询大部分双酶共切的Buffer问题，常见的双酶搭配甚至可以找一本TAKARA或者其他公司的Catalog，内切酶部分在前面肯定就有双酶切的Buffer推荐表。有些酶没有搭配的推荐，但是有各种酶在L，M，H，K及T+BSA的相对活性，AB两酶选一个合适的即可。注意尤 ...

一、miRNA的定义　　miRNA(microRNA)是一组由基因组编码的长度约20～23个核苷酸的非编码RNA，通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。　　miRNA(microRNA)在物种进化中相当保守，在植物、动物和真菌中发现的miRNA(microRNA)大部分在特定的组织和发育阶段表达。miRNA(microRNA)的组织特异性和时序性，决定组织和细胞的功能特异性，表明miR ...

一、基因芯片：1、基因芯片综合分析软件。ArrayVision 7.0一种功能强大的商业版基因芯片分析软件，不仅可以进行图像分析，还可以进行数据处理，方便protocol的管理功能强大，商业版正式版：6900美元。Arraypro 4.0Media Cybernetics公司的产品，该公司的gelpro, magepro一直以精确成为同类产品中的佼佼者，相信arraypro也不会差。phoretix™ Array Nonlinear Dyn ...

今天老师让我找一些比苯酚氯仿抽提法更简单的方法。通过专利文献和杂志，发现了一些简单的方法。现小结一下---血清中病毒DNA的提取一 煮沸法从血清中提取病毒DNA，与其它方法比较，此法最为简单，并且很多文献都有报道 。鲁艳芹等在一篇名为《乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒》专利(专利申请号为200610044679)中对六种方法提取血清中乙型肝炎病毒DNA的效率做了比较，得出结果是：NaOH裂解法最佳，其次是直 ...

题录集：静脉大容量快速注射siRNA或质粒有些老师曾经认为通过小鼠尾静脉注射200微升质粒液体都很困难。而现在，小鼠尾静脉注射1.3毫升的siRNA或质粒已经快成了在整体动物水平快速鉴定某个基因功能的标准手段。这种大容量快速注射还可以用于兔子、狗等大型动物。除了尾静脉是可以输入核酸的路径之外，还可以通过门静脉、肾静脉、下肢静脉等进行局部灌注。所以，以前用于反义核酸(ODN)的一些体内delivery手段，还可以 ...

〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 2007年零应助帖/疑难帖集合〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓已应助帖不代表求助已经解决，鼓励战友继续积极应助，加分机会与尚未应助帖均等不规范贴不在此次整理范围，请大家规范发贴请大家在发帖前仔细阅读版规,细心搜索文献资料及丁香园内部后再发求助帖,以减少版主和其他热心战友的工作量.谢谢!1.【求助】T4 DNA Pol 补平http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9229803&sty=1&tpg=25&a ...