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Blast指南http://www.dxy.cn/bbs/user/download/385095/BLAST%20tutorial%20%28part%201%29.htm如何进行BLAST,如何分析BLAST后的结果,请访问http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/BLASTinfo/tut1.htmlblast 讲座幻灯片http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&i ...

一．实验材料及其仪器1．实验仪器iQ5 Real Time PCR Detection System： Bio-Rad2．实验材料及试剂All-in-OneTM miRNA Q-PCR Detection Kit： GeneCopoeia (Cat. No. R0101S )验证模板：人源十个不同的组织所制备的cDNA测试引物：共5 对（具体引物序列等详细信息附在产品说明书处，此处略）Catalog# Primer ID Mature_Acc Mature_ID PCR SIZE1 miRQP0227 hsmq ...

总RNA提取具体步骤：（关键是防止RNA酶的污染）⑴1) 称取-85℃冰冻保存的标本50-100mg，于液氮中夹碎(用剪刀将组织块剪成若干碎块)(须避免RNA酶的污染)。2) 将组织碎块加入1ml TRI zol变性缓冲液中(所加组织块的体积不能超过TRIzol体积的10%)，在玻璃匀浆器中充分研磨至无明显大的组织块为止，研磨过程在0℃冰水中进行，以防止组织RNA被降解。⑵ RNA的分离3) 然后将组织匀浆液转移到1.5ml的Eppendorf管 ...

第三代测序技术简介 转自sciencenet 作者 廖新化如果有人告诉你用显微镜实时观测单分子DNA聚合酶复制DNA，并用它来测序，你一定会认为他异想天开，没有一点生物的sense。我最初就是这样认为的，然而它不仅可以实现，而且已经实现了！这个就是被称为第三代的测序技术，Pacific Biosciences公司推出的“Single Molecule Real Time (SMRT™) DNA Sequencing”（单分子实时DNA测序）。我有幸在 ...

整理整个定向园的关于细胞转染的内容如下：干细胞转染率的问题骨髓基质干细胞转染BMP-2骨形成蛋白后分化为骨细胞，之后其转染基因还会长期表达吗？★以上为干细胞与组织工程讨论版版块发表的帖子，共：2个★p19 细胞转染的请教promega用于细胞转染的试剂盒的质粒提取问题,谢谢关于PC12细胞转染请教关于稳定转染的问题，是在受不了了。中秋节，顺便祝丁香园的各位兄弟姐妹中秋快乐,试验顺利！请教关于细胞转染的问题？请教关于 ...

一些分子生物学常用实验技术方法大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述　　在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。　　转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种 ...

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。胶回收的质量好 ...

Northern Blot继分析DNA的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA或含poly A尾的RNA样品中特定mRNA分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA最为常用的经典方法。与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电 ...

20个测序常见的问题1．为什么需要新鲜的菌液？首先，新鲜的菌液易于培养，可以获得更多的DNA，同时最大限度地保证菌种的纯度。2．如何提供菌液？如果您提供新鲜菌液，用封口膜封口以免泄漏；也可以将培养好的4～5ml菌液沉淀下来，倒去上清以方便邮寄。同时邮寄时最好用盒子以免邮寄过程中压破。3．如何制作穿刺菌？用灭菌过1.5ml或2ml离心管加入LB琼脂(7g/L)斜面凝固，用接种针挑取分散良好的单菌落穿过琼脂直达管底，不完全 ...

非常感谢lewis 1121！！！另外在论坛中找到部分关于滤纸上质粒溶解提纯保存的方法，贴在这里，供同道参考。（没有进行系统整理，也未按原发贴顺序，详情还请见原文）请问：如何从滤纸上洗涤下质粒DNA？(dxyshining )我是这样做的,加入PH8.0 TE,边加边用枪尖压实滤纸,直至确认能吸出一点液体,然后用这液体去做转化.记住要留出点呵.滤纸也不要马上扔掉. (楚风)4度下TE浸泡过夜,次日即可使用....(roger )１。滤纸有质粒部 ...

原位杂交的基本方法一、组织的取材注意事项：刀要锋利、不能用力向下挤压组织； 组织块不宜过大、及时固定。二、固定（一）原则：及时固定、避免RNA酶的污染4％多聚甲醛（0.1M PBS PH7.4，可加1/1000的DEPC）,动物实验标 本最好先灌流固定。（二）固定液的浓度、固定时间及温度要适宜1 浓度越高组织结构保存的越好，但mRNA的保存越差；2 固定时间越长，mRNA破坏的越多；做原位杂交组织固定时间不宜过长，一般24h，不能高温固定（微波可使组 ...

什么是高通量测序？高通量测序技术（High-throughput sequencing，HTS）是对传统Sanger测序（称为一代测序技术）*性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing，NGS )足见其划时代的改变, 同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为深度测序(Deep sequencing) ...

摘要：荧光条形码标记的单分子检测技术是一种全新的高通量检测基因表达谱、miRNA等分子的技术，其定量结果可与real-time PCR相媲美。由于它的高通量和高精确性填补了基因芯片和real-time PCR之间的技术空白，一经问世大受欢迎，其检测结果频频登载在nature、science、cell等顶级杂志上。NanoString公司研发的荧光条形码标记的单分子检测技术最早诞生于Leroy Hood博士创立的系统生物 ...

Q1: 抽提DNA 去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好?A1: 酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变 性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。作为表面变性剂的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定 ...

上海莱枫生物科技有限公司 网址：www.lifefeng.com订货电话：021- 64810180,25966877 传真：021-54252754技术解答：shanghai@lifefeng.com 技术支持：400-600-1087,13817902990(上海)各位战友如有需要我们可提供4次免费试用装个人认为彻底去除细胞DNA是实验可重复性的关键，后续PCR添加BSA或Carrier DNA或增强剂是非常有必要的。我们旨在提供 ...

酶切反应建议一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的酶在底物DNA ...

基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 上海南方模式生物研究中心 技术顾问 周效华从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9 ...

本期明星技术：核糖体展示 (ribosome display)ribosome display技术的核心是利用体外核糖体表达载体构建 sc Fv抗体库 ,并于体外转录为 m RNA,体外翻译表达 ,随后以固相化的抗原分子亲和筛选出核糖体 -m RNA-sc Fv复合物中的高亲和力 sc Fv。这种技术在实验中不用任何细胞 ,是第一个完全在体外筛选有功能蛋白的方法。该技术克服了其他一些蛋白质筛选技术 (如噬菌体展示 )需转化细菌或真核细胞 ,因效率不高而降低库容 ,减少抗体多样性 ...

本人经常用以下方法提取DNA,做PCR,效果不错,很简单.大家可以尝试下!整个过程不需要离心.1. Lysis: the lysis buffer (usually 0.5ml) is added to the tissue or cell ( for a 75cm2 flask, add 5ml directly to the cell). Digestion is complete within several hours at 37C (cell, 2-3h) or 55C (tissue) with agitation.Lysis buffer100mM Tris Hcl pH ...

脂质体转染目前仍然是基因重组中主要的应用方法，虽然并不复杂，但问题也有不少，这里将DXY的有关资源总结如下：脂质体转染方法脂质体转染常见问题与解决http://www.dxy.cn/bbs/thread/1709497http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710130http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710363http://www.dxy.cn/bbs/thread/1710381h ...