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一、Western Blot成功要素 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第 ...

分子伴侣与疾病刘慧萍 柴玉波 陈苏民（第四军医大学生物化学与分子生物学教研室，西安，710032）摘 要　　近十年来，由于分子伴侣的发现和深入研究，使经典的蛋白质折叠“自组装”学说受到挑战。越来越多的研究证实，“辅助性组装学说”更加符合体内蛋白质折叠的特点和途径：即蛋白质多肽链的正确折叠和组装需要其他蛋白质分子的帮助，分子伴侣与折叠酶一起，构成了两种重要的辅助折叠分子。这为揭示生理或病理条件下蛋白质的折叠机理提供了新的研究思路，因 ...

Western blot的原理、操作及注意事项原理：通过电泳区分不同的组分，并转移至固相支持物，通过特异性试剂（抗体）作为探针，对靶物质进行检测，蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点，可检测到低至1～5ng（最低可到10－100pg）中等大小的靶蛋白。一、抗原的选择和制备A：样品的制备1 组织：组织的处理方法：组织洗涤后加入3倍体积预冷的PBS，0℃研磨，加入5×STOP buf ...

Western blot实验是目前进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一，其原理是经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。West ...

蛋白质研究相关技术旧帖整理蛋白质药品冷冻干燥技术研究进展http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2546179&sty=1&tpg=1&age=0肽电泳资料http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2597696&sty=1&tpg=1&age=0armersham公司的蛋白质纯化手册http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=6 ...

DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA化学降解法测序策略　　目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱 ...

国内做western的实验室现在很多，但是western因为是历时比较长，试剂多，总是出现各种各样的问题，园子里帖子很多，讲述经验的，在这发帖主要是想让大家抒发一些做western的感受以及感觉实验的key point是什么，最容易犯的错误是什么，希望大家踊跃发音，其中附一篇网上及园子里流传很广的一篇文章，希望大家多多跟帖，发表自己的感想这是园子里的一篇帖子，非常欣赏，转过来，希望大家多写写，主要是1 key point 2最 ...

其实研究王晓东的科研思路，发现这个规律是相当明显的，他自己也曾在讲课时提到科研的三板斧，其中的两板斧肯定是：建立体外生化检测系统，用这个系统跟踪蛋白纯化过程。他的过人之处就在于他的实验室能用 100升的细胞，过5，6个column最终纯化得到单一的生化组分。这个毅力有点像那个从几十万个猪脑提取某个激素的故事，他的实验比提激素可能要简单，但是他提取的不是一个，而可能是几个，这几个将细胞调亡线粒体途径阐述得相当干净明了 ...

作者: 圭多·格兰迪出版社: 化学工业出版社出版年: 2006-7页数: 236定价: 40.00元ISBN: 9787502584887内容简介 · · · · · · 　　疫苗开发是首先得益于基因组学、蛋白质组学和生物信息学等高新技术的诸多领域之一。目前已获得了很多细菌的全基因组序列，并逐步了解了其致病性菌株(与非致病菌株比照)的作用机理，由此研制出的现代疫苗可以针对传统疫苗不能发现的特殊基因产物。本书阐述了疫苗开发领域的最新进展，结合实例详述了研制新型疫苗的不同 ...

蛋白酶抑制剂类生化试剂　　破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。 　　PMSF 　　1 ...

蛋白的复性是一个世界性的难题，没有通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如果有人知道原创作者或网上出处，请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体：包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性：一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状或缺口的质粒DNA，以及脂体、 ...

常见蛋白质数据库NCBInr(National Center for Biotechnology Information，美国国立生物技术信息中心. ) 全球最有影响的生物学网站之一。提供综合的、混合数据库（非单一，non-identical）的蛋白和核酸数据库。包括GenBank CDS 翻译库(GenBank CDS translation)、PIR、SWISS-PRO、PRF和PDB。NCBI为了避免重复，花费了很大精力为这些数据库里的序列提供了相 ...

经过N年的非人的生活，俺终于毕业了，硕士，博士，真的是一种煎熬。但是当一切结束，回头看的时候才发现一切的辛苦化为乌有，只有那一本博士毕业论文给一点慰藉。就象死后重生内心再难起波澜。在这里我作一个小小的总结，以便让大家在读医学研究生生涯中能借鉴。一、.首先心态要积极，我就是心态比较消极，结果过的几年越来越觉得辛苦，到最后都快崩溃了。作科研本身就是一个充满困难，挑战困难的过程，在这里不要害怕失败，不要畏缩不前，从心理上不 ...

花了些时间把关于原核表达方面的帖子整理一下，如有重复在所难免，希望大家原谅，也希望能够给大家有所帮助！！～～1. 原核表达？？？？http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1576298_1.html2. 急急--- 原核表达http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1699575_1.html3. 原核表达http://www.dxy.cn/bbs/actions/arc ...

多肽物质分离与分析方法研究进展　　摘　要　综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色谱法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。　　关键词　多肽，分离，分析，进展　　多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物学活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节 ...

Western的原理几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集。最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上。变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关 ...

一.液体蛋白芯片指纹图谱系统液体蛋白芯片指纹图谱系统以MALDI TOF/TOF质谱系统为基础，把样品分离、质谱分析和生物信息学相结合，克服了2D电泳的缺点，为差异蛋白的发现提供了新的途径。与普通蛋白质组学不同的是，临床蛋白组学研究的主要目标是寻找疾病相关的蛋白标志物。该方案简单、重复性强、通量高，分离低丰度蛋白效果尤其显著，充分适应临床蛋白质组学研究的要求。 血清（人、小鼠）、细胞裂解液、尿液、组织等； 肿瘤 呼吸疾病 乳腺癌 卵巢癌 呼吸衰竭 ...

一、抗血清的制备　　有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。　　（一）用于免疫的动物　　作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为/// ...

分享我刚找到的有关RNAi的资料，现附目录如下，希望对战友们有用，如果您觉得不错，烦劳顶一下，呵呵（共42个分卷压缩包）=========================================2002年世界十大科学成就之首.caj2006年生命科学的十大新闻.txtH1启动子siRNA载体的构建及应用.kdhmicRNA和siRNA基因调控技术研究进展.cajmiRNARNAi和siRNA.cajRNAi_DNA稳定表达载体的构建与应用.k ...

记得在有一集《生活大爆炸》中，那些智商超高的科学怪才们又在捣鼓开发一款iPhone程序，想通过直接拍照来解微积分。不记得这款程序最终开发出来没有，但iPhone和iPad这些潮物在科学家中的普及肯定是毋庸置疑了。因此，也就涌现出一大批应用程序来帮助大家搞研究。下面就介绍两款蛋白方面的应用程序。随着科学家逐渐解析出更多蛋白的结构，并将这些结构添加到数据库中，目前的蛋白结构数正在快速增长。过去，如果想要查看某个蛋白 ...