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以下是在我查的因物设计要注意的一些问题，和大家共享PCR引物设计的黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为 ...

如何建立一个PCR实验室？为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。3）用于样品处理的工具不能被用作普通 ...

数据分析excel地址http://d.dxy.cn/detail/4503890△△Ct法的推导过程PCR指数扩增公式是：Xn = X0 * ( 1 + Ex )n 式中，Xn是第 n 个循环后目标分子数，Xo 是初始目标分子数，Ex是目标分子扩增效率，n 是循环数。用Ct 代表目标扩增产物达到设定阈值所经历的循环数，因此：Xt = X0 * ( 1 + Ex )Ctx 式中，Xt 是目标分子X达到设定的阈值时的分子数，是一个常数。Ctx 是目标分子X扩增达到阈值时（即达到规定的拷贝数时）的循环数。对于看家基因的P ...

pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引 ...

做LAMP实验有一年多的时间了，其间共做了3个关于LAMP的课题，目前为止基本没有污染~尤其是自己的毕业论文，用完了500uL的 FIP，全部开盖跑电涌，没有一次污染。今天为止做完了所有毕业实验，坐下来总结一下自己的心得~~我只是个小硕士生~~所以都是在浅显的方面叙述，希望大家不要鄙视~~首先感谢一下LAMP交流群，没有这么多老师和同伴在，我不可能顺利毕业。。比较可惜的是群里现在人满了。。下面开始正文~~1. 引物我一共用过8组 ...

PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多，商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。PCR产物纯化回收试剂盒（SunShinecleanTM PCR Product Recovery kit）可简单、快速、有效的从PCR反应或其它各种酶促反应液中纯化Dundefined*段。根据回收片段大小不同，最高回收率 ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

－－PCR/RT-PCR疑难问题解答1.问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1）RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8mM DTT时加 ...

一、分子生物学Promega:Promega公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的“老字号”。该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检测；蛋白酶、蛋白激酶、核受体检测，以及描述药物先导物的吸收、分布、代谢、排泄等特征性参数的一系列检测方法。Pr ...

我最近用一在线的引物设计软件设计了一对SD大鼠caspase-3 的引物,不知行不,请高手多多帮忙.结果如下:Primer3 Output--------------------------------------------------------------------------------WARNING: Numbers in input sequence were deleted.No mispriming library specifiedUsing 1-based sequence positionsOLIGO start len tm g ...

:(我需要扩增一段长约700bp的启动子区域，做过梯度，但每次跑出来的条带很浅，而且会随着电泳时间的增加逐渐变淡，同时，引物二聚体一直很明亮。后来做了阴性对照，竟然也出现一样的条带。我们怀疑是受了污染，但也说和引物有关。:?):?):?)所以在此求教各位帮忙提点参考意见。1 gtgcagtggc tcaatctcgg ctcactgcaa gctccgcctc ccaggttcat gccattctcc61 tgcctcagcc tacatagtag ...

Applied Biosystems Veriti™ 96-Well Thermal Cycler,Veriti™ Thermal Cycler 技术特点如下：Block Format 0.2 mL AlloyFeatures Standard 0.2 mL format and sample block. Enabled to run FAST chemistry,Max Block Ramp Rate 3.9 ºC/SecMax Sample Ramp Rate 3.35 ºC/SecEnabled to run FAST Chemistry YesTemp ...

大伙好，我购买Chemicon公司的CpGenome DNA Modificatio Kit 打算五月开始做，希望以后一起交流一下甲基化分析的实验技术。QQ：395848659Here are some online resources for methylation studyCpG island prediction:CpG Island SearcherCpG PlotMethPrimerCpGProD (CpG Island Promoter Detection) newCpG ...

我的基因的mRNA序列如下：1 atgaatggtg acacgcgggc cgcagtggtg acctcaccac ctccaaccac agcccctcac61 aaggagaggt actttgacag agtcgatgag aacaatccag aatatttgcg ggagaggaac121 atggcaccag accttcgtca ggacttcaat atgatggagc agaagaagag ggtgtctatg181 attctgcaga gtcccgc ...

In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions,” the paper described the technique that would come to be known as Real-Time PCR (for more info, click here). In the original re ...

查了一些发现在本版还是有一些免疫组化方面的求助的，而其他版又没有旧帖整理这个分版，所以发在这里，望主任理解。1。免疫组化的原理http://www.dxy.cn/bbs/thread/856955http://www.dxy.cn/bbs/thread/1008921http://www.dxy.cn/bbs/thread/10119982。免疫组化的步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1045385http: ...

大家好！我打算做半定量RT-PCR，把在文献上查到的引物（用来做实时定量）与GENEBANK里查到的cdna序列用PP5比较了一下，发现怎么好像不匹配？是不是我配的有问题？请大家帮我看看，谢谢！扩增产物有多长？CDNA:1 tggcgttgta tagttgggta cagcgaggct ggcgctgcgg tcagacgtgg gcgcctctct61 tgggtggcgg ctaccgggag ctctctgcga cccaggcccg gcag ...

请高手帮忙设计一对引物用于RT-PCR,有原基因全序列，我查了国外国内的文献上的引物，经PrimerPrimer5.0验证发现都不太好，自己又从来没有设计过引物序列，故恳请各位有经验的高手帮忙设计一下，多谢！！基因序列如下：ORIGIN1 gggggggggg atttagagac ttgctcttgc actaccaaag ccacaaagca gccttgcaga61 aaagagagct ccatcatgcc tggctcagca ctgc ...

1。PCR产物纯化需要的体积以及浓度http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3733888_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1477572_0.html2。PCR产物纯化后连接需要的体积http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3846185_0.htmlhttp://www.dxy. ...

刚开始作RT-PCR,让同学帮我设计了三个基因的上下游引物，如下： Primer A (bp233C): 5'-GAATTCACCACACGGCCATTGAAGCA-3'Primer B (bp25): 5'-AAGCTTCACATGGACGAGGAGGAGAC-3'Primer Balance: -A- -B- CommentLength 26 26% GC 50 53 3 % differenceTm(癈) 78 71 7 C?differenceTm (2nd round) 84 80 4 C?differencePrimer Ca ...