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PCR-SSCP的发展现状　　随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)等等已成 为基因分析的有力工具.但这些方法操 ...

平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19的Hinc ...

文章题目：Consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primers for amplification of distantly-related sequencesNucleic Acids Research, 1998 Apr 1; 26(7):1628-1635.设计兼并引物的方法很多，但你听说过如何降低兼并度，以及如何提高成功率的方法吗？CODEHOP方法肯定是一篇这方面的精典文章！推荐出来，与大家共享！摘要：We de ...

我做大鼠心肌的醛固酮合酶RT－PCR，都2个月了，一点结果都没有，偶尔出一条带还不是我所需要的条带，最近有人看了我的基因序列发现局部GC 含量高，建议用la Taq,就又花了300多元反复作了多次还是没有结果，用脑及肾上腺的cDNA作阳性对照也同样，而用同样的cDNA能扩出其他4对目的基因。真郁闷啊，快过年了，老板说节前做不出来节后先上班，业余时间作试验，一定要做出来。看来春节过不好了！那位高手能指点迷津,在下多谢了。我的 ...

Multiplex PCR-based reverse line blot hybridization assay (mPCR/RLB)—a practical epidemiological and diagnostic tool.Sequence-specific amplification polymorphisms (SSAPs): a multi-locus approach for analyzing transposon insertions.Single nucleotide poly ...

ORIGIN1 gaattcaact tagtgtgctg tgtcaaatcc tactggaact tcaggcaaga ggaagcatca61 gtgatgccac ccctttattt agaaaacaga attgctattt catgcatagt ggattttttg121 cattagtttt tatttttaat attatattat tgtaagtctt gattgccgag ttttttggag181 ctctttaaag tttgtgccct ggctgg ...

PROTOCOLS FOR RECOMBINANT DNA ISOLATION, CLONING, and SEQUENCINGedited byBruce A. RoeJudy S. Crabtreeand Akbar S. KhanDepartment of Chemistry and BiochemistryThe University of OklahomaNorman, Oklahoma 73019e-mail: broe@ou.eduphone: 405 325-4912fax: 405 325-7762Augu ...

这是我做PCR后跑的6%琼脂糖的电泳图。请各位分析一下，谢谢。我扩增的目的DNA只有59个碱基，一对引物只有12bp长，都是由公司合成的。我的反应体系如下Taq E.(5U/ul) 0.5ul1undefinedBuffer(Mg2+ free) 5ulMgCl2(25mM) 3ulundefineddNTP(各2.5mM) 4ulprimer1(20uM) 2ul （Tm=51.4）primer2(20uM) 2ul (Tm=44.6)Template(10ng/ul) 10ul (59bp ssDNA)dd ...

各位老师：您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DR ...

准备做Real time-PCR,目的基因序列（cDNA)和引物见下（PP5.0设计）我用Blast分析了一下，可是出来的结果不太懂，有哪位大虾解释一下及给出建议。谢谢！BLAST地址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi结果：见附图上游：CTCTGGCTGACTTGGCTTGG下游：GATTTGGTTGCTCTGTTGACTC原cDNA序列：atgaccgcgc ggggcgcc ...

我准备用Tagman探针做real time PCR,帮我设计一下好吗？我要设计三组，检测的是两个基因, 内参用P－actin，或GAPDH， 最好能参照你用过的内参引物探针.谢谢各位大侠快帮忙啊！急1）RNA (U50930.1:645..772, U50931.1604..1837)CDS U50930.1:712..772, U50931.1604..1749)agctcag cctccaaagg661 agccagcctc tccccagttc ctgaaatcct ...

我初次接触PCR，准备做转基因后体内表到的半定量RT-PCR。用primer和oligo设计了一对引物，在primer上二个引物都打了100分，产物98分。但是有人说软件设计的引物有时候得分很高也会做不出来，所以想请各位高手帮忙看一下。:)我对这对引物有两个疑问：1 下游引物以AAT结尾是否不太好？2 产物长度是213，是否太短了，跑胶不好看？Selected Primers-------------------------------------------------- ...

每次拿到生工的合成报告单，就要计算引物的溶解体积。所以写了个网页，可以做一个简单的计算，希望能用得上：其中分子量和OD值按合成报告单来；引物浓度按自己的需要来；其他两项自动计算出结果。代码：function Calc(){if(Primer.InputMW.value!=0){Primer.OutputMol.value=Primer.OD.valuundefined33/Primer.InputMW.value;Primer.Volu.val ...

恼人的污染！该死的污染！求助：DNA污染如何避免污染如何避免PCR产物污染PCR实验室污染PCR污染与对策PCR污染与对策PCR污染与对策PCR污染与对策紧急求助！pcr污染PCR污染与对策RT-PCR中DNA污染问题请教！急切4次PCR 仅有一次污染（阴性对照见条带），why？Hi,DEAR 师傅:如何在阴性对照组中避免DNA污染的问题PCR污染，原因不知道，请各位高手帮忙分析，谢谢如题，给像我一样在苦苦思考为什么PC ...

应助后请PM求助者！【求助】相同条件下，模板稀释后扩增不出来目标条带http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6324633&sty=1&tpg=11&age=0请问同一种属不同品系的同一基因的MRNA相同吗http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6328875&sty=1&tpg=10&age=0【求助】请教真菌中RT-PCR的内参http://www.d ...

Routine PCR? Let’s be honest, there’s no such thing. Even with the simplest PCR reaction things can go wrong, so you need to have a good checklist of ideas for troubleshooting and rectifying the problem. Today I have brainstormed all of the ways I can think of to approach problems with standard PCR reactions. ...

我想根据keratin基因（有30多个亚型）的共有保守序列，设计引物扩增，那位大侠能帮我找一下好吗？谢谢！keratin 5atgtctc gccagtcaag181 tgtgtccttc cggagcgggg gcagtcgtag cttcagcacc gcctctgcca tcaccccgtc241 tgtctcccgc accagcttca cctccgtgtc ccggtccggg ggtggcggtg gtggtggctt301 cggcagggtc ag ...

我最近设计引物有些困难，我要扩增EBV的BNLF1基因(编码LMP1)的cDNA,两引物各带EcoRI、BamHI 的酶切位点，但是两者的Tm值相差太大，实验时间紧迫，望各位高人替小女子改一改。无限感激！！！！！此致敬礼！！！EBV（B95-8序列，Genebank Acession NO.V10555，1999年）的LMP1的编码基因BNLF1的基因序列（只给出内含子、外显子的序列）：Exon1:169207-169474nt（267b ...

极小巧的序列编辑器我自己设计的只有2K的小巧DNA序列编辑器，为网页文件，无需安装，只要有IE即可运行，辅助进行分子生物学序列编辑、引物设计，可生成互补、反向互补、大写、小写序列、编辑空格等。下载地址：ftp://www.souwo.net/DNA_editor.rar后期原作者将提供自己编写的《引物设计教程》下载或者将下列代码复制并存入文本文件并将扩展名改为htm(网页文件）即可。如果调试有效,请多回贴支持进一步的工具发 ...

基因序列cds，引物，目的片段如下：atggggacgccgggggaggggctg301 ggccgctgctcccatgccctgatccggggagtcccagagagcctggcgtcgggggaaggt361 gcgggggctggccttcccgctctggatctggccaaagctcaaagggagcacggggtgctg421 ggaggtaaactgaggcaacgactggggctacag ...