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我要作半定量RT-PCR,在文献上查引物序列用Primer分析，才50-60分，不知是直接引用文献的好，还是自己设计.下面是我从文献上查的几对引物，请帮忙看一下，可否直接引用，还是要重新设计。本人就要开始作RT-PCR了，急需您的帮助。Smad3 (308 bp, GenBank Accession No. NM_005902)5’-CAGAACGTCAACACCAAGT (nt 238–256)and 5’-ATGGAATGGCTGTAGTCGT (nt 545 ...

1。二次PCR的第一次PCR产物应该稀释多少倍http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/622786_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/623784_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1025255_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/ ...

各位大侠：我是PCR新手，第一次作PCR，模板是含ANX A5的原核质粒。ANX A5的DNA全长如下ccatggcaca ggttctcaga ggcactgtga ctgacttccc tggatttgatgagcgggctg atgcagaaac tcttcggaag gctatgaaag gcttgggcac agatgaggagagcatcctga ctctgttgac atcccgaagt aatgctcagc gccaggaaat ctctgcagc ...

AIB1-U primer (5'-ATA CTT GCT GGA TGG TGG ACT-3'; sense; positions 110–130; GenBank accession no. AF012108)AIB1-L primer (5'-TCC TTG CTC TTT TAT TTG ACG-3'; antisense; positions 458–438; GenBank accession no. AF012108);如上为我的目的基因上下游引物，请各位同道帮忙用软件及blast分析一下，本人非常焦急，因试验结果很不好，正在 ...

请教高手，我做一蛋白的定点突变，采用overlap的方式，但当我把短片段扩出来后，就怎么也不能将全片段（1.58Kb）扩出来，我不知道是不是引物的问题，请大家帮我看看这是整个CD序列：ATGGAACTGAAGGCCGAGGAGGAGGAGGTGGGTGGCGTCCAGCCGGTGAGCATCCAGGCCTTCGCCAGCAGCTCCACACTGCACGGCCTGGCCCACATCTTCTCCTACGAGCG ...

来自该网站：http://www.archimedes.rwth-aachen.de/MolbioProtocols/Phage%20Display/PCR%20amplification%20of%20variable%20regions%20(SOE-Protocol).htmlThe SOE-Protocol given below utilises our initial set of primers for mouse and chiocken phage displ ...

亚硫酸氢盐修饰DNA步骤一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）EcoRⅠ TaKaRa 消化DNA 37℃ 3hddH2O 11ulH溶液 2ulEcoRⅠ 1ulDNA 6ul37℃ 孵育 3h二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26 gauge needle 5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）2.加2.2ul新鲜配制的3M NaOH 到18 ...

DQ探针是上海辉睿生物自行开发的拥有自主知识产权的第五代探针技术，DQ探针打破了荧光定量PCR领域国外专利技术垄断的现状，并成为国家“十一五”“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项成果中的亮点，解决了大量细菌耐药、SNPs等方面中单碱基突变特异性检测的难题。研发背景：思考→什么是核心竞争力？测序、荧光定量 → ABI → 美国 诊断试剂 → Roche → 瑞士化学试剂 → Sigma → 美国 液相芯片 → Luminex→ 美国LNA(锁核酸) → Exiqon → 丹麦 中国 ？？？？？？？？ ...

感谢您的积极参与！银染背景深怎么回事此引物设计是否合理RNA 2100bp,ORF框1600bp 如何设计引物求教长链PCR扩增的问题哪位有35S启动子和 Nos 终止子的比较成熟的引物序列求助关于制作和应用PCR诊断试剂盒方面的资料MSP中醋酸铵用法MSP不见条带做病毒的基因的RT－PCR能否用oligo（dt）？急需有关基因测序方面的问题和测序仪发展史 多重pcr上下游引物Tm不同，该如何安排反应体系扩不出目的片段这个 ...

如何确定是TAG出错，还是模板变异？我的测序结果怎么不对？合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 帮忙设计嵌套PCR的引物有人用过Takara的mutanbest试剂盒么?差异显示电泳设备的选择？关于同种不同品系看家基因的可比性问题基因特异性引物如何设计? oligodT共1OD时怎么进行稀释用于RT?b-actin作内参时如何使结果归一的原位RT-PCR是否既可定量又可定位？讨论：SSCP分析基因多态性 ...

生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9me ...

PCR反应模板的制备　　PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高 模板核酸的产量.　　传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组份，溶解细胞膜， 使蛋 ...

有战友做PCR-SSCP吗？下面是找到的有关PCR-SSCP的原理及具体的protocol，同大家一齐分享，希望对各位有所帮助！聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)　 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。　PCR-SSCP ...

呵呵，希望各位高手多多参与，及时帮助广大战友解决问题哈！质粒做realtimepcr用的标线的几个问题普通的RT-PCR所用的引物能采用文献中Real Time PCR的引物吗关于位点特异性引物设计无脊椎动物的内参照用什么豚鼠RT-PCR内参是什么请教PCR问题关于内参的问题/G+的链球菌（原核）的内参是什么长PCR分段扩增后的酶切连接问题,PCR带消失了测序结果信号差的原因扩增支原体16srRNA基因如何设置内参 ...

大家好,我都快急哭了,希望各位多多关照...我刚进实验室,老板就给我一课题,就是做病毒外壳蛋白基因的原核表达,我查了大量资料,一点头绪都没有.首先我要设计引物,这是我最大的难题.因为没有人带我,只有自己摸索,万般无奈下,我只好来到丁香家园向大家求救.下面是我课题一些情况:我要作的病毒CP基因序列:ORIGIN1 atgggcacca acaagccagc cactctagct gatttgcaga aggcaattaa tggcatctc ...

【求助】有谁做过透析袋电洗脱DNAhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5875697&sty=1&tpg=32&age=0【求助】用superscript III做5' RACE的方案，请指点http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5876087&sty=1&tpg=32&age=0【求助】请问PRIMER PREMIER 有几版啊?http://www.dxy.cn/b ...

克隆PCR产物1)克隆PCR产物的最优条件是什么？最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比1：8或8：1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4oC过夜。在这2种温度下，缺T-凸出端的载体会自连，产生蓝斑。室温保温1小时能满足大多数克隆要求，为提高连接效率，需4oC过夜。2)PCR产物是否需要用凝 ...

我正在做用SYBR GREEN I做荧光染料的实时定量PCR，遇到的问题不少，同时也有点心得，借些平台和各位站友交流，望各位给以指证和帮助。首先，主要的问题是反应效率低下：我用10-1 ～10-9 的浓度梯度的反转录产物作为模板，预设它们的浓度是1×10-1 ～10-9 ，结果作出的各个模板浓度对应的CT值与理论完全相反，即：浓度越小，反应曲线就越快地起峰，就是CT值越小。作溶解曲线有时单峰，有时是双峰。BIO-RAD的ICYCLER软件作 ...

聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆Ⅰ、 概 述　　PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板进行 ...

我对引物设计的一些建议很多人都想学会引物设计及软件的应用，这些其实很简单，看看书大致原则就清楚了，但仍然很少有书介绍引物的设计流程，我将自己的一点体会在这里和大家交流。但愿初学者能有所收获。1．首先要明确设计引物的目的。是检测还是构建，是克隆还是表达，表达还分原核与真核表达之分。检测：一般说来，检测引物的设计相对简单。但若要求特异性，则需分析被检测的基因是否有高度同源性，这一般在引物设计完后在genbank上bl ...