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        丁香实验推荐阅读
        【旧贴整理】原位杂交的探针

        1.PCR引物序列来做原位杂交的探针序列http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=464691&sty=3&keywords=%D4%AD%CE%BB%D4%D3%BD%BB%B5%C4%CC%BD%D5%EB2.设计原则http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2339929_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

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        下面是我设计的引物的BLAST结果,请大虾帮我解释一下。谢谢

        下面是我设计的引物的BLAST结果,请大虾帮我解释一下。我这对引物做PCR是否有问题?谢谢。Query=(40 letters)Database: All GenBank+EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS,GSS,environmental samples or phase 0, 1 or 2 HTGS sequences)2,862,112 sequences; 12,768,194,998 total lettersIf you have any problems or q ...

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        UNISTS的序列是否可以直接作为RT-PCR的引物?

        我要做一个RT-PCR看看PEDF在组织中的表达在uni-sts里找到PEDF的STS请问是否可以直接拿Forward primer: AGAACAAAGATGAACGGTCGGTReverse primer: ACCAACTCTTTGCAGGACATGA来做RT-PCR的引物?如何验证?谢谢http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=211288UniSTS:211288 Li ...

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        【分享】AB定量PCR Webinar整理,学习零时差,定量PCR E次搞定

        以前对real-time了解并不多,但是现在工作需要,必须熟悉AB的定量产品,因此对其网站深度挖掘了一番,收获颇丰,给大家贴出来一起进步。总的来说AB的各个地区网站中,个人感觉tw地区的最好,pp的台湾mm,让你的学习体验非常有感觉,请大家点击感兴趣的课程,简单注册后即可免费在线学习,蛮好的哦!Real-Time PCR 原理http://www.appliedbiosystems.com.tw/webinar/reg_rtpc ...

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        【旧贴整理】重组PCR

        1.重组PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1263309_0.html2.是直接以初次PCR扩增产物作重叠延伸,还是电泳后切胶回收后再做http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5540543_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4745715http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

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        【公告】4月份中下旬0应助贴--加分从优!

        http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3226158&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3225948&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3223640&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/ ...

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        高手请进:评价设计的引物?急!!!

        预扩增包含8344位点的序列:8101 agatgcaatt cccggacgtc taaaccaaac cactttcacc gctacacgac cgggggtata8161 ctacggtcaa tgctctgaaa tctgtggagc aaaccacagt ttcatgccca tcgtcctaga8221 attaattccc ctaaaaatct ttgaaatagg gcccgtattt accctatagc accccctcta8281 ccccctct ...

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        Access RT-PCR System{英文}

        Technically SpeakingAccess RT-PCR SystemBy Patrick BurkePromega CorporationTranscription of RNA from DNA is the principal step in executing a cell's genetic program. Numerous techniques have been developed to investigate gene expression at the level of transcription, incl ...

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        如何确定RNA质量的经验谈!

        各位都知道,提取到质量良好的RNA(包括总RNA和mRNA,以下同)是非常困难,关于RNA的提取技术,我就不说了,为什么呢?或许各位非常关心呢,我是这样想的,我可以看到的资料或者是厂家的说明书,各位也同样可以看到的,内容当然都是一样的了,所以实验做的好不好,主要是心的投入多少的问题,所以希望大家自己多多思考啊!提取技术虽然不说了,但是我可以告诉各位如何准确确认RNA质量的有效方法(可能是最简单而有效的,如果你已经知 ...

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        PCR引物设计原则

        PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一区域设计引物。现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一般引物长度为15~30碱基,扩增片段长度为100~600 ...

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        【原创】质粒制备原理及常见问题

        质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核外能够进行自主复制的遗传单位,是细胞内的一种环状的小分子DNA,作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外。质粒是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。高质量的质粒提取是下游试验顺利进行的可靠保证。质粒制备的方法主要包括以下三个步骤: 细菌的培养及扩增; 细菌的收获和裂解:一般常用碱裂解法。 质粒提取纯化。做过分子生物学实验的,大多数做抽提过质粒,但不是所有人都知道质粒制 ...

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        【心得】labonchip对PCR的一些个人体会

        Labonchip的PCR个人体会PCR应该是分子生物学的基本,记得刚进实验室时,大家的口头禅就是:今天你P了吗?那怎样才能做好PCR,结合个人体会,我谈谈自己的看法。论坛里高人很多,说得不对的还请多多指教和包含。当然,若能给新人朋友们带去一些帮助,那我本贴的目的就算是达到了。PCR设计的一般套路1) 目的基因或目的基因片段对象是什么?对于原核生物来说,由于不存在外显子和内含子,因此还比较简单,直接从genebank ...

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        【版务】RT-PCR常见问题

        问题1: 第1条cDNA链产物产量低或没得到可能的原因:1 RNA被降解(建议:通过变性琼脂糖凝胶电泳检验RNA的完整性;2确保试剂、加样器尖头及反应管均无RNA酶。在有核酸酶抑制剂(如Promega公司的rRNasin® 核酸酶抑制剂)存在的情况下分离RNA。)2 AMV反转录酶被高温灭活(建议:如果在实验方案的开始加入了一个变性/退火步骤,则应确保在变性步骤及此后的48℃恒温之后再加入含有AMV反转录酶的酶混合物。)3 引物的特异性 ...

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        【心得】GMP

        天津美伦医药有限公司实施GMP工作汇报各位专家、各位领导:天津美伦医药有限公司始建于1989年,隶属于天津医药集团。随着“入世”的要求和市场份额的扩大,老厂房狭小、设备陈旧、主要制药工序均委托加工,加之资金匮乏,严重制约了企业的再发展。2001年初,美伦医药有限公司进行了资产重组,筹建了新的天津美伦医药集团。在董事长赵永良先生为首的公司领导总体策划下,在天津北辰经济技术开发区购地200亩,计划投资3亿元,分三期将美 ...

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        Access RT-PCR系统

        Access RT-PCR系统1)什么是Access RT-PCR?2)什么是Access RT-PCR系统?3)总RNA能否作为模板,是否一定需要poly(A)+RNA?4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少?5)同一般常用方法相比较,Access RT-PCR系统有哪些优点?6)使用Access RT-PCR系统需要优化哪些条件?7)Tf1DNA聚合酶是否有反转录酶活力?8)为什 Access RT-PCR系统不使用MMLV反转 ...

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        【旧贴整理】2006年3月无人应助贴整理,请大家积极应助!

        2006.3.1~3.31 不规范帖除外,请大家规范发帖!【求助】怎样在EGFP载体前加入SP6启动子http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5634193&sty=1&tpg=40&age=0【求助】BAT40 微卫星大小http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5639177&sty=1&tpg=40&age=0【求助】POPGene分析请教http://www.dx ...

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        【心得】基因组步行法扩增3’及5’侧翼序列

        最近一直在做基因组步移,看了些资料,步骤很详细,感觉可能会大家有帮助,如果遇到细节问题还可以进一步交流,现总结如下:用于Genome Walking Kit的模板总DNA 一般要满足以下几点:1、DNA 的完整性,电泳为单一条带。2、避免杂质,OD260/280=1.8~2.0。3、模板DNA 不要被污染。4、准确定量,不要少于3μg原理基因组步行技术是一种新发展的利用已知序列(cDNA或基因组DNA)从基因组中获得基因的上游(如启动子)或下 ...

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        【旧帖整理】315至今无人应助帖整理

        再求助内参,接上次?http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5744926&sty=1&tpg=7&age=0人口腔鳞癌Tca-8113细胞 端粒酶检测引物设计和内参引物http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5745223&sty=1&tpg=7&age=0搞不懂的PCR结果http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=57 ...

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        【公告】6月中下旬0应助帖-加分从优!

        如何做标准曲线求助:EB毒理学资料求助:酵母总RNA的提取请问这样的实验如何操作?看引物设计得行不行ABI与MJ荧光定量哪个好如何知道我的引物包含有内含子序列多重PCR过程中退火温度如何掌握pcr扩增后的DNA在跑agarose胶之前还需不需要处理一下看我设计的大鼠IL-6引物行不求助RNA提取问题请大家帮忙看看我的引物PCR-ARMS是怎么个做法克隆一种野生大米谷蛋白的编码序列并测序的疑问[求助]AP ...

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        【分享】PCR常见问题总汇

        PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

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