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一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度 ...

Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知 ...

1.原理，基本步骤http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4476935&sty=3&keywords=%D3%AB%B9%E2%B6%A8%C1%BFPCRhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=9466944&sty=3&keywords=%D3%AB%B9%E2%B6%A8%C1%BFPCRhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=6 ...

这是在NCBI中查到的大豆贮藏蛋白基因Gy1的DNA序列，如果我想扩这个基因做表达用。如何扩，里面含有内含子，是不是把CDS连起来进行设计引物，后进行RT－PCR，还是直接扩增基因组DNA好。我是新手，请高手指教。LOCUS GMGY1 3527 bp DNA linear PLN 10-FEB-1999DEFINITION Soybean Gy1 gene for glycinin subunit G1.ACCESSION X15121VERSION X15121.1 GI: ...

3月份0回帖:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=2760421&sty=1&tpg=56&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=2764483&sty=1&tpg=56&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=2764651&sty=1&tpg=56&age=0http://www.dxy.cn/b ...

今天查东西，偶然搜到有关ABI荧光定量技术资料，在ABI的代理欧比特网站上，比ABI工程师给的都多，共享出来，大家可以去下载，pdf文件。http://www.orbital.com.cn/jswz.asp?classid1=1定量PCR常见问题解答 相对定量实验入门指南 (AB产品) 绝对定量实验入门指南 (AB产品)基因鉴别试验入门指南 (AB产品) TaqMan Universal PCR Master Mix 使用说明书TaqMan PreAmp master m ...

1.设计软件http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4634753_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/847175_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/857674_0.html（在线设计工具）2.简并引物设计中Ｎ是不是可以用（Ｇ／Ｔ）代替http://www.dxy.cn/ ...

丁香园有关引物设计的帖子数不胜数，然而对像我一样第一次设计引物的人来说可能太多了，多得我有点无从下手。我花了一些功夫总结了一下，希望能对初学者有点用。希望版主给我第一分（想得第一分都想疯了：））。1.引物设计有一些基本的原则如长度、GC含量、避免形成发夹结构等可参阅以下帖子：PCR经验总结全面介绍PCR技术，有部分引物设计原则引物设计总结引物设计一篇引物设计文章2.引物Tm、GC值的算法初学者易混，可看下面的帖子T ...

a) Primers:i) Oligonucleotide primers are generally supplied as "so many OD units/ml" - but what does this mean, in terms of mg/ml, or mmol/ml, etc?Given: a primer is Y nucleotides (nt) long;Given: the MW of ssDNA is (330 daltons per nt) x (length in nt) (Sambrook et al., 1989; p. C.1);Given: the concentration of primer ( ...

一般的数据分析方法的文献光看中文就够头大，但是这个英文文献很通俗易懂，很适合我们初学者。文中列举了几个实际的例子，可以方便大家参考。Example 1The mean CT of the HOXD10 gene in treated and untreated samples was 24.6 and 27.5, respectively. The mean CT of the 18S rRNA in the treated and untreated samples was 9.9 and 9.8, respectively. What is the fold c ...

为克隆EGFP(模板为pEGFP-N2),我设计了一对引物:P1: 5' AGCTCAAGCTTCGAATTCTGCAGTC 3' 有酶切位点EcoR I.(GAATTC)P2: 5' CTCGGATCCTACAAATGTGGTATGG 3' 有酶切位点BamH I(GGATTC)用primer5.0 设计,rating 为79分,但两个引物都有Dimer,且P1 中Dimer的自由能高达-11.2,共有四条-10---- -11.2的Dimer.各位给看看吧,谢谢.这样的引物能扩增 ...

http://www.bioservice.com.cn/protocol_2.asp?info_cat_id=271DNA Repair Protocols SECOND EDITION • ABI实时定量PCR应用培训班讲义• 基 因 工 程 概 论• Adenoviruses: Basic Biology to Gene Therapy• Viral Vectors for Gene Therapy • RT-PCR Protocols RT-PCR • Transgenesis Techniques Principles and Pro ...

1.RT-PCR操作指南http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=130889&sty=3&keywords=PCR%2CRT-PCR2。RT-PCR标本制备http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1309149_0.html3。RT－PCR电子书http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4137614&sty=3&k ...

RNA WORK:RNA work is not fun. Although as a molecule, it is just as robust and sturdy as DNA (a little more even, since it can form some pretty fancy tertiary structures), it suffers because the nucleases (RNases) that can destroy it ARE very stable molecules.RNases are also EVERYWHERE.They don’t require d ...

PCR Primer Design (Methods in Molecular Biology) By Anton YuryevPublisher: Humana PressNumber Of Pages: 431Publication Date: 2007-08-02ISBN-10 / ASIN: 158829725XISBN-13 / EAN: 9781588297259Binding: HardcoverIn the past decade, molecular biology has been transformed from t ...

合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素。选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。许多耐热DNA聚合酶的主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。下面是六种不同耐热聚合酶的比较：Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，能很好的扩增6kb以下的DNA 片段。扩增碱基出错率为10-5左右。Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低 ...

大家都是搞pcr的，觉得这个帖子不错所以就转载了！实验室最危险的17种物质。。。慢性毒性，最易忽视~各位兄弟姐妹们务必小心1.DMSO：DMSO是二甲基亚砜， 用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞 ...

在研究启动子区时往往采用引物延伸分析（primer extension analysis，看了些相关资料，感觉收获不小，和大家分享一下。1、引物延伸分析（primer extension analysis）引物延伸分析用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域，随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变 ...

定义：启动子是参与特定基因转录及其调控的DNA序列。包含核心启动子区域和调控区域。核心启动子区域产生基础水平的转录，调控区域能够对不同的环境条件作出应答，对基因的表达水平做出相应的调节。区域：启动子的范围非常大，可以包含转录起始位点上游2000bp，有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点，因此也属于启动子范围。这项搜寻要从UCSC基因组浏览器开始，网址为http://genome.ucsc.edu/。以 ...

“大家都来秀HRM精彩美图”罗氏Light-Cycler HRM实验结果投票—评选活动展示你喜欢的HRM精彩美图；分享你掌握HRM技术过程中的实验心得；和更多网友交流你和HRM技术的“甜蜜瞬间”！为了让更多的网友深入了解HRM这一qPCR高端技术以及分享其中的乐趣，罗氏联合丁香园特别组织本次活动。进入专区活动时间投票时间：4.6～5.31获奖名单公布时间：6.1～6.10奖品予获奖名单公布后一个月内发放；参与方式a、进入 ...