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ELISA 即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和 Perlmann 于 1971 年最先应用该法进行了 IgG 定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA 的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③ 测定时将受检标本（抗体或抗原）和 ...

单克隆抗体制备主要步骤包括：动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、单抗的鉴定及制备等。1 动物免疫根据抗原的特性选择合适的免疫方案，对于可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂。常用佐剂为福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状。（1）初次免疫，Ag50ug/只，加福氏完全佐剂皮下多点注射，一般1.5ml,间隔3周。（2）第二次免疫，剂量途径同上，加福氏不完全 ...

转自http://www.congenes.com/htm/support_1.htmELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1 ...

免疫荧光细胞化学染色方法一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每 ...

免疫组化基础知识免疫组织化学的概念：免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验所用的抗体有哪些？免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接 ...

很多时候Elisa检测多肽效价的时候会存在多肽难以包被的问题，我在实验室对这个问题进行了研究，再此发上来一点自己的研究心得。首先，多肽包被条件是很难控制的，很多多肽用传统的碳酸盐包被液就可以达到很好的包被效果，但是有些却始终包不到板子上，这时最常用的措施是使用BSA或者其他大分子蛋白进行耦连，之后用耦连后的大分子进行包被。但是这样做最大的缺点就是成本太高，一次耦连就要几百元。鉴于此我对多肽包被条件进行了一些 ...

最近尝试使用CFSE检测人外周血CD4+T细胞体外扩增情况，操作流程如下：1、分离CD4+T：Ficoll分离人外周血PBMC，CD14磁珠（Miltenyi）阴选其中CD14-细胞，CD4磁珠（Miltenyi）阳选CD4+T细胞，流式检测CD4+T纯度98%（两步法按照Miltenyi CD4磁珠protocol）；2、CFSE标记：CFSE试剂购自Invitrogen（C34554）。标记步骤按照试剂protocol，即 ...

我查到一些4%多聚甲醛的配方，哪种比较好用咧，各位大虾指导哈子撒。4％多聚甲醛配制方法1) 900 ml dd H20 + 500 ul 1N NaOH2) Heat to 65-70℃3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved5) Let cool to room temperature6) Add 100 ml of 10X PBS7) pH to 7.3 with HCl8) Sterile with f ...

PD-1受体及其配体的研究进展关键词：PD-1；免疫受体；免疫耐受T细胞活化需要两个信号，第1信号来自T细胞抗原受体(TCR)与抗原肽-MHC复合物的结合，为抗原特异性的；第2信号即协同刺激信号，由T细胞上粘附分子的受体与抗原提呈细胞（APC）上相应的配体结合，为抗原非特异性的。第2信号在T细胞活化中具有重要的作用，若无协同刺激分子提供第2信号，T细胞识别抗原后将处于无应答状态或凋亡。CD28/CTLA-4与其配体B7 ...

免疫印迹所需仪器：电转移装置、电源装置（200v，0.6A）、3MM Whatman 滤纸、2.0或0.45um孔径大小的硝酸纤维素膜(应储存在低温干燥处，操作时应戴手套以免膜被污染。)、塑料袋（Seal—A—Meal）、塑料或玻璃容器（15cm×10cm×2cm）、摇床、浅盘（30cm×15cm×3cm）、磁力搅拌器。操作步骤：准备工作：配制1L转移缓冲液并冷却至4度，冷却装置中加入双蒸水，冰冻过夜。用双蒸水清洗缓冲液池；插入转移电极，在缓 ...

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法PBS缓冲液是大家做ELISA实验室必须用到的，其配置各有自己的方法，希望下面的方法对大家有些帮助！称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。需要注意的是，通常所说的 ...

Nature Immunology,Advanced online publications,Published online: 21 January 2009.An orthogonal proteomic-genomic screen identifies AIM2 as a cytoplasmic DNA sensor for the inflammasome Tilmann Bürckstümmer, Christoph Baumann, et al.Cytoplasmic DNA triggers activ ...

小弟最近做此实验（ChIP），上网搜了不少的文献，经过比较，这个 young lab 的讲的是最详细的。所以发上来和大家分享，希望做这个实验的战友大家多交流！下面是具体的步骤，附件里面也有word文档.I. Formaldehyde cross-linking of cellsUse 5x107 – 1x108 cells (70-80% confluency for adhesion cells of 8-12 15 cm2 plates or 175 cm2 flasks) for each immunoprecipi ...

Immunochemical Protocols 形态项：Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 328Publication Date: 2004-12-13Sales Rank: 1644037ISBN / ASIN: 1588292746EAN: 9781588292742Binding: Hardcover内容介绍：This new edition of a much praised classic includes both basic method for produc ...

Nature Immunology，Published online: 27 September 2009Interactions between PD-1 and PD-L1 promote tolerance by blocking the TCR–induced stop signalBrian T Fife,et al.Programmed death 1 (PD-1) is an inhibitory molecule expressed on activated T cells; however, the biological cont ...

Abstract:Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols examines a collection of state-of-the-art methods that employ monoclonal antibodies in a clinical setting with opening chapters focusing on the gold standard method for generating mouse monoclonal antibodies through ...

Nat Immunol. 2011 May;12(5):416-24. Epub 2011 Mar 27.Intracellular MHC class II molecules promote TLR-triggered innate immune responses by maintaining activation of the kinase BtkLiu X, Zhan Z, Li D, Xu L, Ma F, Zhang P, Yao H, Cao X.Source National Key Laboratory of Medical Immunology & Institute of Im ...

Elisa: Theory and Practice (Methods in Molecular Biology (Cloth)) (Paperback)by JOHN CROWTHER (Author)Book DescriptionELISA: Theory and Practice introduces to scientists at all levels of expertise the principles of the most commonly used assay technique known as the Enzyme Linked ...

Nature Reviews Immunology是NPG旗下的一个顶级杂志之一，其综述质量可以比肩Annual Reviews Immunology。最近，该刊回顾了10年来其所刊发的精华主题，这也是免疫学研究的10年之里程碑式 回顾。链接： http://www.nature.com/nri/journal/v11/n10/full/nri3063.html2001年：TLR研究2002年：调节性T细胞2003年： IL-12细胞因子家族20 ...

共享免疫检测新书：The immunoassay handbook fourth editioncontentsPart 1 Immunoassay FundamentalsChapter 1.1 How to use this bookChapter 1.2 Immunoassay for beginnersChapter 1.3 Immunoassay Performance MeasuresPart 2 Immunoassay ConfigurationsChapter 2.1 Principles ...