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yolanda0818 一边文章刚确定的miRNA启动子，我能用吗，用再验证吗.MBC的文章freecell 应该 需要先验证，再引用。zhujoker 这个我认为得看你要怎么做这个实验了，如果仅仅做miRNAs的生物学或者说是其下游的研究，我想大可不必验证之类的。但是你要做miRNAs的调控的话，我认为你应该是需要验证，但是这样的话会增加的你的实验的难道以及花费，并且如果你不能从其他方面进行论证说明的话你的文章以后也不会 ...

文竹竹 我最近做western blotting很郁闷。上周用压片盒压片曝光结果还可以，条带很清楚，可是昨天在同样条件下做的结果，什么条带都没有，是白板。为什么？请高手给予帮助！谢谢！二抗？ECL液？liruonan728 二抗出问题？1、二抗本身失活2、二抗被灭活想一想操作过程有无上述失误liruonan728 二抗出问题？1、二抗本身失活2、二抗被灭活想一想操作过程有无上述失误zhongqiuxie 原因太多。一抗问题可能性更大。 ...

rainbubu 谢谢大家？急切需要答案freecell 这些东西自己那么急于要为什么不能亲自动手，Google搜索一下呢？一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件：重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序克隆片段易于从载体分子上完整卸下重组克隆能稳定保存、扩增、筛选参考:www.dlujpk.com/gene/ ...

yaoliduli82 本人是个新手，不知核转录调控因子有哪些，抑或哪位高手能否介绍篇文献参考下，敝人将感激不尽～◎！freecell 此帖可以转到生化版。:Dcatonetwo 好像有个FOXP3，我老板研究这个 幸亏没有要我搞catonetwo 你可以自己去查查文献 。。。不过既然是新手 应该先学学如何查阅文献资料 把这本领掌握了 其他手到擒来yaoliduli82 谢谢大家。yaoliduli82 catonetwo wrote:好像有个FOXP3，我 ...

wanglingyun1981 :)各位大虾帮帮忙，用绿色荧光蛋白以及neo构建载体，转染牛成纤维细胞后，开始是绿色荧光还很亮，可是G418筛选一段时间后，会荧光会越来越弱，到最后筛出单克隆，也几乎没有有荧光的单克隆了。原因是什么？有好的解决办法吗？谢谢各位 ！！绿色荧光蛋白用的cmv启动子。slytjiaofei 1.开始时的荧光很强，这个很好解释，因为开始时未进行G418筛选，所以发绿色荧光的细胞有两部分，一是未稳定整合的 ...

麻果果 我想对某一序列的基因进行沉默，在知道DNA 序列号的情况下，能否设计出针对mRNA的siRNA序列？是生物合成的还是化学合成的转染效率要好一些，用什么样的转染载体教实惠？lalala_2004 提交你的基因，找专门的公司搞定，他们有现成的siRNA库。威斯腾 有的文献是用化学合成的，这样比较快，但是都是瞬时转染，载体比较好的目前是病毒载体。可以和我联系，我的邮箱是sc-western@163.comzhujoker 其实si ...

gn0301 某一基因由DNA转录为mRNA，再由mRNA翻译为蛋白质，最后蛋白质经修饰变成有功能的蛋白，有诸多的调控因素参与其中。我曾听说：蛋白表达的增加，需要基因启动子的活化，或者在转录后水平存在调控，增加mRNA的翻译，总之，可能存在多个水平参与蛋白的合成。想请学基础的战友帮个忙，我急需这方面的权威文献，哪位战友可以奉献在下一篇。非常感谢！邮箱：bai_qx@126.com细胞因子 已发，不知道能不能解决你的疑问。gn ...

myskite 网站预测了某个microRNA有两个不同的靶基因，而且，这两个基因都已证实与某一种疾病相关，并两基因间存在相互调控机制。我应该如何设计实验呢？zhujoker 这个说起来很简单啊，但是操作起来是比较麻烦的。首先我还是建议你先用生物信息学软件，多用几个预测一下，因为需要实验验证是比较麻烦的事情。如果可以我建议你分为以下几步来验证你的实验：1.首先构建miRNAs表达质粒！构建质粒注意事项请参考丁香园相应 ...

tuwenqiang1986 我现在在做组蛋白乙酰化，准备用CHIP，可我基因启动子中与组蛋白结合的区域序列找不到，现急需寻找方法，请各位大虾帮忙！还有请问我如果要做近40份样本的CHIP，需要多少钱？freecell 建议楼主参考这篇文献，找点思路：http://www.nature.com/nature/journal/vaop/ncurrent/full/nature07829.html昕彤 弱弱的问一句：CHIP on chip 是什 ...

guoguo5201314 求助，我查阅很多文献也没有见到明确的概念，关于一个基因启动子CPG岛发生的超甲基化、低甲基化究竟有没有一个相对的百分比概念。是如何界定的。比如高于百分之多少叫高甲基化，低于百分之多少叫低甲基化。谢谢:):(freecell 我个人认为这个是个相对的概念。建议看看这篇综述： http://www.bbioo.com/bio101/2007/8626.htm呼吸 你们做MSPCR，每个样品都进行3次重复吗？如果2 ...

joeyeong 我要做一个药对某核蛋白的表达影响（是下调或上调）除了提核蛋白用western外有其他方法么？免疫细胞法可以定量么？说明的了问题么？请各位师兄师姐们指教啊~~~~~freecell 说具体点，什么药对哪种核蛋白的影响？wales127 joeyeong wrote:我要做一个药对某核蛋白的表达影响（是下调或上调）除了提核蛋白用western外有其他方法么？免疫细胞法可以定量么？说明的了问题么？请各位师兄师姐们指教啊~ ...

伽利略 弄不太清，求教freecell 我个人认为，无论原核还是真核生物，启动子只是基因表达差异的因素之一。xiangchou812 不知楼主所说的启动子的活性是什么意思？启动子只是一段DNA序列，不是通常所说的蛋白因子等，其也有活性吗？我也是刚入门，不知启动子能否用活性一词来形容，大家可以讨论一下。向大家学习。伽利略 谢谢2楼，我同意你的看法，但是所看文献对结果的分析，是默认启动子活性没变，基因表达就没变，3楼 ，promoter a ...

yinfengzhizi 请问克隆测序出新的microRNA分子，如何知道它的hairpin precursor sequences？freecell try this:http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/help/submit.shtmlyinfengzhizi freecell wrote:try this:http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/help/submit ...

helloabing 功能已知的蛋白（一个代谢酶）有可能作为一个转录因子而调控其它基因么？如果往转录因子这方面去考虑合理么？大家给点建议吧，谢谢！chuckdouble helloabing wrote:功能已知的蛋白（一个代谢酶）有可能作为一个转录因子而调控其它基因么？如果往转录因子这方面去考虑合理么？大家给点建议吧，谢谢！跑个luciferase assay，看看结不结合到其目的基因的promoter region 就知道了。er ...

yocipan20 不知哪位有这些图 给我用用1 细胞划痕实验2 细胞增殖实验（MTT实验）3 细胞侵袭实验（transwell实验）4 PCR扩增5 western blot分析6 质粒的鉴定及大量抽提hualinpiaoxue 这些都是实验技术啊？要什么图？hualinpiaoxue 这些都是实验技术啊？要什么图？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcom ...

luckdogxchw :(不好意思，本人是新来的菜鸟，请问有没有关于经典的Wnt/β-cat通路的直接激活剂或抑制剂?阻断Wnt信号通路可以通过那些途径?Wnt阻断剂或激活剂如果应用后,是否还需要再次检验该通路的下游信号或者靶基因,来验证该试剂确实可靠?本人新手,望不吝赐教~~~~~~~~xupingcs 1.经典的Wnt/β-cat通路的抑制剂可用DKK-1或DKK-4。激活剂没有听说过，不过可以通过转染wnt质粒或点突变的b ...

myjerry 请问VEGF到底是通过酪氨酸激酶途径还是PKC途径转导信号的？我在同一篇文献上看到：血管内皮细胞生长因子受体(Vascular endothelial growth factor recptor，VEGFR)是 VEGF特异性的膜受体，具有高亲和力，属于酪氨酸激酶亚家族中的一个新成员。作为一种典型跨膜镶嵌蛋白，分为胞外区、跨膜区及膜内区三部分，以胞外 7个免疫球蛋白样的趔二级结构、胞内2个问开的酪氨酸激酶区为其特征。后来 ...

轩竹 请教：miRNA原位杂交中寡核苷酸Tm值的计算？有没有哪位同仁知道LNA修饰的寡核苷酸探针的Tm值应该怎么计算？我看到有些文献上说每增加一个LNA Tm值增加1-8°C，范围太大了，有没有有关的计算公式？急求！！！邮箱地址:xuanzhu1985@sina.commomo8208 帮您顶！帮您顶！轩竹 Post is deletedhp69813031 有一个网站可以计算，我以前还用过，但是我找了半天都没有找到，你自己在找找看。freec ...

zch212 经典wnt信号通路到底和那种frizzle受体结合，frizzle受体有很多种，只知道fz 2 是非经典通路里的，其他呢？可以分开吗？急求答案。zch212 没人知道吗罗婷灵素 同求，经典和非经典分别和哪些受体有关呢，有关fzd3的文献或资料有没有呢！急需！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wyp504 看到有文献报道预测出来了miRNA前体序列，想设计探针检测成熟序列，但不知针对70多nt的哪一段合成探针？有没有什么办法能够预测成熟miRNA序列？谢谢！freecell see paper :http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/full/33/11/3570Hope it helps.nature2010 不知lz是做northern还是pcr？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有 ...