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skmaple 本人最近正在做：一个蛋白A是否可以与一个基因B的启动子区域结合，并且上调B启动子的活性。现在的问题是A蛋白经验证是存在于细胞内（胞浆及胞核）的一种蛋白，那么我在研究A蛋白是否可以结合到B的启动子区域并且增强B启动子的活性的时候，是否需要外源性转染构建的携有A的真核表达载体？还是说选用一个天然不表达A蛋白的细胞，然后再外源性转染携有A的真核表达载体？还是说细胞本身就表达A蛋白，这个时候就不需要外源 ...

gggchilly 想有目的地突变镰刀菌内的某个基因，有没有什么良策啊？包括合适的载体等等，急，不胜感激。也可以发我邮箱gggchilly @ yahoo.com.cnamberly 你要看看是什么菌种，然后在google上搜索该菌的isogenic mutation， vector，plasmid等关键词。一般地，如果该菌是可转化的话，应该是有发表的方法的。做法是把抗性基因（如Ampicillin）插入到你的目的基因内，然后转化某穿梭 ...

allshine 各位目前有没有工具能够针对某一特定片段（3'UTR）预测与其作用的microRNA？因为我最近在做3'UTR上的一个突变，想确认这个点突变是否会引入一个新的microRNA作用靶点，而常用的预测软件好像都是针对一个大的基因或者microRNA来进行预测的，所以如果有战友以往有过类似的经验的话请指教。谢谢zhujoker 这个软件倒是真的没有见过，不过你可以把你的序列用RNA22这个软件和一些你认为 ...

caroline0701 我最近要设计几对化学合成的siRNA,在网上看了一些资料，想请问一下siRNA的结果该怎么分析啊？Max score， Total score， Query coverage， E value， Max ident 都是什么意思？谢谢大家的指导！预祝大家国庆节快乐中秋快乐freecell 不同的算法有不同的评价参数。不给出具体信息，难以判断。caroline0701 Target sequence 24: AATCTTTGGAAGAACTACCA ...

pyjnuedai 小弟在实验中发现，我正研究的一个由多亚基组成的复合物，其中一个亚基在细胞中的过表达能够明显促进另一个亚基在细胞中的过表达，即：实验组（plasmid B + plasmid A）和对照组（plamid B + empty vector of plasmid A）相比，B的表达量明显增强，约高出两个数量级。请教各位，不知道这样的现象可不可能具有什么生理学意义？有哪些可能的方向对此进行进一步的研究。谢谢大家！！freecell 不知道是什么蛋白质， ...

Cherrybei 请问如何利用文献所提供的引物，来明确PCR扩增序列的位置，我利用Pubmed上的Blast，好像只能看到比对的结果是在哪一个染色体上，却不能知道扩增的序列是在哪一个外显子上，因此不能确定目标基因的SNP是否在扩增的序列上。期待高手们的指点，非常感谢！！！:)lmnsmu 我认为不应该与整个核酸库进行比对，你应该先找到你的目的基因序列，然后再用文献的引物去比对，确定扩增片段在那个区域。一点愚见，仅供参考。 ...

28810789 请问有使细胞表达某种蛋白下降的质粒吗？如果有这种质粒，那么它与RNA干扰（siRNA)有什么区别？谢谢！freecell shRNA就是以质粒形式，转染细胞后使某种蛋白表达下降的。其与siRNA区别见图。vitrogene shRNA能使蛋白质下调的质粒,它主要是用来建稳转细胞株,而siRNA却不可以.版主freecell留言:请不要发布隐形广告！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

00501101 1、nf-kb荧光素酶报告基因nf-kb质粒有卖的没？哪家公司啊？或者，请教怎么构建啊，有步骤没，我对构建是一点也不懂，着急啊。2、EMSA：我准备定Pierce公司的核蛋白提取试剂盒、化学发光EMSA试剂盒、NF-kB的探针。但是Pierce公司的尼龙膜要2800，也太贵了吧，有没有便宜点的可以做出结果来的尼龙膜哪个公司可以买，或者卖单张的。erik nf-kb荧光素酶报告基因nf-kb质粒stratage ...

zjhua 请问CDGSH锌指结构域中的“CDGSH”是指什么？lalala_2004 Iron-binding zinc finger CDGSH typeThe CDGSH-type zinc finger domain binds iron rather than zinc as a redox-active pH-labile 2Fe-2S cluster. The conserved sequence C-X-C-X2-(S/T)-X3-P-X-C-D-G-(S/A/T)-H is a defining feature of this fa ...

sunji 我想知道microRNA 前的序列应该怎么查望高人指点zhujoker 就在版块上有一个“如何查找pre-miRNA上下游的序列？”既然上下游都可以，你为什么还要来一个上游怎么查？学习不要只到达目的，而在于你的学习过程。请见下面帖子，可能会对你有帮助的。http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=15429796&sty=1&tpg=1&age=0vitrogene 找个找到pre-mi ...

xiongsanxiao 比如说一个DNA片段，含癌基因，直接注射入裸鼠体内，它就会表达癌吗？要想使一个外源基因在体内顺利表达，需要哪些条件？高手赐教，洗耳恭听，谢谢。jiachengyou2007 路过 随便谈谈，希望拍砖一般来讲，要想看某癌基因的致癌性，需要把这段基因转到一个载体里，然后转染或感染到细胞里。经过筛选(稳定转染或用流式)后注射到动物体内，观察其是否有致癌性。如果直接把DNA片段注射入裸鼠体内，裸鼠虽无免疫系统， ...

lizhenbang ***integrin（整合素）的抑制剂是什么啊？？？小弟准备做整合素一系列实验，着急找不到抑制剂是什么啊？谢谢各位大侠！熊文平 拮抗剂，有很多种类，如抗体mayle 整合素分活化和非活化的 当然用不同的抑制剂像STI571dfbsdsdfsd rgd可以抑制integrin本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcomi ...

bahai 大家好，最近看文献，发现了 反义寡核苷酸、义寡核苷酸、错义寡核苷酸（无意义寡核苷酸），我知道反义寡核苷酸技术，但是什么叫义寡核苷酸、错义寡核苷酸（无意义寡核苷酸），查了一下没有搞清楚，请各位老师帮忙解释一下啊，非常感谢！freecell 还是举个例子说明吧。Stat3正义寡核苷酸序列：5’ AGAAACAGGATGGCCCAATGG 3’，即与原始DNA序列的正链；Stat3反义寡核苷酸序列：5’ CCATTGGGCCATCCTG ...

简繁 小鼠有三个串联的骨钙素（BGP，或OC）基因OG1、OG2、ORG，其中OG1和OG2在骨中表达，其基因序列高度同源但不完全一致，产物mRNA及蛋白亦稍有序列差别。但是看文献中的骨钙素mRNA 的RT-PCR检测，均不提引物根据哪个基因设计；蛋白水平的检测亦不区分BGP1和BGP2，市面的小鼠骨钙素放免或酶免试剂盒亦笼统一用。请教：我要做小鼠源成骨细胞的BGP RNAi，该以哪个基因为靶基因？随便选其中一个还是两个都照 ...

clarck7 请教各位老师，如果检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因说具体点，我用PCR扩得了一个IS的启动子，但想知道这个启动子的下游接的什么基因，请问如何实现？谢谢了！gingivalis 菌落杂交1 作 DNA cosmid 文库。2 PCR 扩增 IS 启动子，放射性同位素或者非放射性（地高新）标记做探针。3 plate hybridization. 找出阳性克隆，然后粘粒测序。或者1 PCR 扩增 IS 启动子，放射性同位素或者非放射性（地高新）标记做探针用。2 酶切细 ...

maiqitu 在构建载体的时候要往里面加rabbit beta-globin intron，请问是为什么呢？谢了啊zhujoker 那你到底是构建什么载体啊？还需要往里面加rabbit beta-globin intron，我也觉得奇怪。但是有一个东西是可能的，那就是你构建的是miRNA表达质粒，因为miRNA位于大多数基因间，也就是位于内含子得地方？不知道是不是你所想要的，呵呵！hcai55 恩，miroRNA表达载体有些是这样。比如 ...

fankie 现在正在建立NMDA的PC12细胞损伤模型, 查了一些资料和文献, 但模型效果就是不好也添加了GLYCINE, 还是没甚么效果请问这里有做这方面的战友吗?是不是还需要添加GLU?? 或者需要NGF诱导分化2天后再加NMDA呢?谢谢大家帮忙~~~freecell 建议参考一下这篇文献，引用了21次。具体细节，可以写信给作者探讨。http://www.springerlink.com/content/h27367324p765h31 ...

haichao 从构建的表达文库中，通过DNA-protein互做调转录因子时，测序得到的片段如何进行分析确认是我想要的转录因子？因为我将得到的转录因子是未知的东西，所以对于拿回的测序结果很茫然不知如何去分析?请高手指点。小长 请问您是用酵母单杂交的方法拿到的蛋白吗？是否可以找到这个蛋白的基因序列？拿到蛋白测序结果后，当然是blast一下是否有同源蛋白？那些同源蛋白是否有转录因子？如果这样都没有结果，可以拿蛋白序列做 ...

cherytmmu 大家知道基因芯片是在一定介质上的微阵列，一般一个2x2cm的介质能够点样6000个基因，点上的基因一般是通过PCR扩增而来的，有些点基因的功能甚至是不知道的，那我的疑问是这么多基因是怎么选择的，是通过cDNA文库扩增的吗，还是根据覆盖范围筛选出来的组合，这种基因芯片能够适用不同的物种吗？我想有这方面疑问的肯定有很多人，有做过这方面工作的站友能够给大家讲解这方面的知识吗，谢谢！ebio66 目前对 ...

liqiuling 怎么才能获取beta catenin的基因？chuckdouble pubmed里面有Nucleotide.到那里找.liqiuling 不太会看，而且合成的话，很贵，想知道如果想获得别人的惠赠，该怎样做？哪位大侠支个招？不胜感激！lmnsmu 在NCBI的核酸库中找到其序列，然后设计引物，通过RT-PCR扩增获得该基因，如果可以的话，胶回收其片段，从而得到。想惠赠的话，可以和文献的作者联系，最好是国外的，但是一般是 ...