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qingshi 比如c57和balb/c这两种小鼠，一种是黑色一种是白色，除了控制他的毛发的基因不同外，他们的主要组织相容性抗原是不同的。那除了这种类似的管家基因外，诱导表达的基因，比如说vegf tnf－a il-10 这类的基因相应的基因组序列（包括启动子区域）有什么不同么？ncbi数据库只有c57小鼠的基因组，我如何寻找balb/c的基因组序列？？？？很困惑。。。ps：为了博得关注，有点标题党的味道。。。抱歉。。。zjubell 他们基因 ...

vangolf 小弟一直在做NFkappaB与IkappaB，有几个问题一直搞不明白，查了一些文献也没查到什么内容1 IkappaB磷酸化及泛素化之后，也就是降解了，NFkappaB就可以入核，也就是说IkappaB的量下降了，我用RT-PCR法可以检测到IkappaB相关的表达吗？可果用RT-PCR方法得出IkappaB的表达随时间增强，是不是意味着有更多的IkappB与NFkappaB结合？我用RT-PCR方法检 ...

drlxg 诸位战友，因课题需要进行小鼠标本的RhoA、RhoC、Rac1蛋白的免疫组化染色，但查过多家公司的抗体，大多用于westernbot、免疫荧光等试验方法，极少直接标明可用于免疫组化，请问可否能用适合免疫荧光的抗体做免疫组化染色？另不知哪位能有上述三种抗体或其一，因经费紧张买不起大包装的抗体呀！多谢！！:)dianaofyezi 可以试试用免疫荧光的抗体做IHC，但是如果抗体的供货商没有明确标明能够做IHC的话 ...

bahai 大家好，最近开始课题，有一想法，不知道是否可行，说来请大家给指点迷津，先行谢过各位！比如，我想研究某一肿瘤，最近对一个病人的肿瘤细胞进行培养后，进行染色体核型分析发现：随即取的所有细胞的核型完全一致，而且，染色体缺失发生的地方都在相同染色体的相同部位。由此可见，至少在来自该病人的肿瘤组织经培养后的这些细胞应该是来自同一个克隆群的。于是检索，对此肿瘤染色体核型研究的论文寥寥可数，而且都是在早年，此类研究仅仅报 ...

挥汗如雨 真核生物修饰或调节基因与目标基因的位置关系如何？最近在真核生物线虫中发现一个类毒素基因簇，并应有反向PCR获得了这个基因簇的旁侧序列，在其旁侧序列中存在大量调控基因（如RNA结合蛋白基因、DNA结合蛋白基因等）和修饰基因（如甲基化基因，转运基因等）。这些调控和修饰基因在多种原核生物（如蓝细菌、放线菌等）的毒素或抗生素基因簇中被发现和报道，报道认为这些基因是基因簇的一部分，对该毒素或抗生素的合成起到调控或修 ...

122009 由于最近的课题涉及到凋亡信号转导方面的知识，看了些文献，有很多疑点，1---关于凋亡途径，说法一：凋亡通路主要由3种：一是通过线粒体释放Cyto C介导的，第二个是通过激活死亡受体，经由TNF通路完成的，以上两条通路最后都要通过Caspase通路完成。还有第三条途径，就是通过AIF（凋亡诱导因子）来实现的，这条通路是不依赖于Caspase的。说法二：目前认为凋亡通路主要有:死亡受体途径,线粒体途径,和内质网途径三 ...

nulidaodi 加通路的抑制剂前需要检测这个抑制剂对细胞活性的影响吗？从道理上来说应该检测吧！但是很多文献都没有检测,特别是很多抑制剂都是用DMSO溶解的，如何解释，请高手指点，多谢！！pengwu46 一般用DMSO做一个空白对照就可以了，说明DMSO对细胞生长，信号的传导都不影响。如果用通路抑制剂，理论上确实需要检测该抑制剂对其他通路的影响和对细胞生长的影响。一个必须考虑的问题是，通路抑制剂一般特异性都比较低， ...

zz73cxf 外行问，小干扰RNA能否建立质粒后转到哺乳动物体内？有没简明教程或文献？多谢观天 将miRNA克隆到shRNA表达载体,一般转染细胞；转动物，方法就是拿质粒直接注射到组织内，但转染效果不一，现在有很多改进的方法，搜搜就知道了。。zz73cxf 非常感谢，能否详细些？比如想转到动物肺血管内皮细胞，能否直接从静脉打进去？如何鉴定？观天 恐怕要看你要沉默的的基因是不是组织特异性的吧？！要整合到特定组织，没经验你问问专门做 ...

songdianwei 你好！最近用R&D公司的CAMP测定试剂盒测细胞内CAMP的浓度，但是细胞一直裂解不好！我是按照试剂盒的说明书上操作的，我反复冻融了四五次，裂解效果还是不理想！做出来的结果根本没有梯度！谢谢各位大侠了！急需帮忙！sunopal_5200 请问您做出来了吗？我也买了RD试剂盒，预实验都不理想，值太低。楼主做时加IBMX了吗？zwh2004 我08做过cAMP检测，当时是用的是PE公司的检测试剂盒，效果还不 ...

wz王 想请教一下在microRNA实验中u6还是u6b做内参比较合适？谢谢～看过一些文献用的u6b，但试剂公司推荐u6～zhujoker 看你是做的什么了？因为说实话，现在miRNA还没有一个比较合适的内参，但是你可以自己试一下到底那个好，也不用在乎那多的1000多了。wz王 我做表达丰度差异，之前一直用u6b做内参，这次定试剂时听试剂公司说u6b逐渐要被淘汰，他们推荐u6，我查了下abi公司（Endogenous Cont ...

lucy1225 急欲查询促卵泡生成素受体(follicle stimulating hormone receptor)启动子（promotor）的基因，该怎么办？zhujoker 该版块已经有很多相应的帖子， 自己要学会搜索！雪中梅 你是想要找基因的启动子序列吧，而不是启动子的基因，看看下面这个：http://molbiol-tools.ca/Promoters.htm本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

magichunter 我现在能够证明GSK-3beta的活性受到了抑制，同时也证明了b-catenin在核内和胞浆内的表达都升高了，同时胞浆内的磷酸化b-catenin含量降低（Wnt通路被激活了吗）。另外Akt的磷酸化增高（应该是PI3K/Akt通路被激活了）。因为Wnt和PI3K/Akt两条通路都可以抑制GSK的活性。 请问能否判断GSK的抑制是由Wnt通路的激活引起的，还是有PI3K/Akt的激活引起的？还是两条 ...

ph1996 请教各位战友：刚买来细胞因子TNF-α，peprotech公司的产品，说明书中未具体说明这个细胞因子是如何来配，以及长期保存的话如何配母液。请各位用过这个细胞因子的战友给解答一下，谢谢，在线等~~~~ph1996 说明书中提到，如果长期保存，可以用含有0.1%的BSA的BUFFER来存，可这个BUFFER是什么啊？freecell 按照蛋白质的保存方法就可以了，DPBS加入终浓度20%的甘油，-80冻存。ph1996 刚 ...

qinghuaihulu 各位大侠：真菌中是否存在miRNA?westernblotx 到目前为止，真菌中发现典型的（我是说以线虫和植物里面的为标准）miRNA的还几乎没有，上上个月nature报道了在酵母中首次发现RNAi（http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=15803565&sty=1）其他真菌中有利用RNAi来做表达调控的，但没有证据表明和报道表明这些生物中存在miRNA, ...

wu_g_f microRNA后带有星号和不带有星号的代表什么意思，例如miR-200a与miR-20undefined。请赐教！zhujoker 你可以上Sanger网站去查，在一定程度上指的是他们是互补序列而已，没有其他的意思。wu_g_f 谢谢版主ghost8469 没有星号代表的是成熟MICROrna的主要产物When the relative abundancies clearly indicate which is the predominantly express ...

大鹏鸟 最近在学习miRNA方面的知识请问各位我在网站上可以查到miRNA预测的靶基因，但是怎么能比较方便地知道这些靶基因的主要作用呢，因为每个miRNA好像都有非常多的靶基因。谢谢zhujoker 不是在每个软件前面都有相应的链接吗？你打开链接就有相应的介绍的啊。你集中你的目标在相应的信号通路或者功能基础，可减少很多麻烦的。大鹏鸟 软件？您说的是什么软件呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

biozk 一抗都是cst的，二抗对照也没有问题，细胞裂解液里有磷酸化酶抑制剂，请问可能是哪里的问题？谢谢。msniu 你说的是正常现象啊。erk细胞内本来就有很多，可以检测到，而p-erk是激活后才有的，有的细胞p-erk是激活的，有的细胞p-erk不是激活的，需要刺激激活。不激活的检测不到。你要是怕实验操作有问题，可以做个用EGF激活的做阳性对照。还有一种情况是，你细胞的erk磷酸化水平低，曝光时间短了，信号没显出来。ma ...

beckhamdavid 各位大侠，小弟目前想做一个抑癌基因的杂合性缺失状况，看了很多文献采用微卫星多态性位点的方法来检测，请问如何选择这些微卫星位点呢？有软件么？谢谢！beckhamdavid 续：能否选取位于这个基因上的SNP位点来确定LOH呢？就用一般SNP分型的方法可以么？如果可以，需要选取多少个SNP位点呢？不胜感激！beckhamdavid 高手们支招啊…………freecell See the reference:http:// ...

5337605029 请问各位：siRNA和质粒转染有何区别？我最近在做siRNA使某个基因沉默，用的是santa的商业合成的siRNA，我导师想让我做质粒转染，我不知道这两者有何区别，目的不都是沉默某个基因表达吗？请各位指教5337605029 希望各位高手指点小妹！我很迷茫zhujoker siRNA只能做瞬转，而用质粒的话可以建立稳转株。其目的都是沉默目的蛋白的。5337605029 差别就是这些吗？lyfdoctor 转 ...

yaojodan 怎样除掉蛋白中的核酸freecell 核酸酶降解。分子筛纯化。雪中梅 可以参照上世纪初关于到底是蛋白还是核酸是遗传物质的争论中所采用的方法。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming