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ariel_l 我想问下大家，有没有在做研究启动子活性的时候，在已报道的启动子比如CMV，SV40的下游加入自己的已被先前试验证明可有效启动外源基因转录的一个调控元件片段，结果反而外源基因的表达效率降低了的情况？（这个表达效率降低是和只有强启动子CMV/SV40，而没有自己的调控元件片段的情况对比的结果。）slytjiaofei 【标题】HRE／CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定【作者】杨洁 杜德伟 李占亭 贾林涛 赵晶 许彦鸣 杨安钢 孙脊峰 ...

yx4122004 对U87细胞，进行某基因的RNAi，效果非常差。U87细胞转染其他质粒则可以，不存在转染效率的问题。而同一序列转染其他细胞，效果可以。可能原因是什么？freecell 转染试剂在不同细胞系上转染效率有所差异，这很正常。这和细胞表面所负电荷等很多因素相关，非一言可概之。song333 RNAi target efficiency is quite different in different cell lines. If this target site d ...

biophysics RT。在miRbase数据库里只能查到pre-miRNA与成熟miRNA序列，为什么没有pri-miRNA序列呢？pri-miRNA序列查找是不是在另一个数据库？zhujoker 请参阅下面一贴：http://biochemistry.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=15429796&sty=1&下次发帖前先搜搜！biophysics zhujoker主任,我的问题是如何查找pri ...

xhrg 大家有谁用过pIVEX2.3d或2.4d等用于体外表达的质粒呀，有什么心得freecell 你想知道哪些方面的心得呢？xhrg 还可用什么质粒呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

zhtiantao 各位大侠好，我现在正在做蛋白的结合实验，但是做了之后不知道怎么计算结合常数，我用的荧光探针是1-NPN,先加入缓冲液和蛋白，然后梯度加入荧光探针，从2uM一直加到20uM，每个浓度得到一个相应的荧光值，现在很多文章上写就是根据Scatchard方程计算结合常数，我不知道怎么算，请高手指教，谢谢！！waterbeijing 到底是什么蛋白结合实验啊，说清楚了大家才好对症下药啊lastone9853 参考你 ...

sissiwubing 我刚做的瞬转，转染效率在80%，希望通过Western看一下表达结果（应该为高表达），有未转染的细胞（应有这种蛋白）作对照。结果未转染的细胞有表达，转染的细胞都没有表达，且ß-actin均有表达。求助各位高手，可能有什么原因，非常感谢freecell 上样的总蛋白已经定量过了？每个样做了几个复孔？这个试验重复了几次？该蛋白是否本底表达水平过高？sissiwubing 上样蛋白为四个孔，为两个样分别有两个复 ...

biophysics In contrast, the expression levels of homologues of the miR-17-92 cluster,including miR-18b and miR-363 within the miR-106a-363cluster (chromosome X) and miR-10b and miR-25 withinthe miR-106b-25 cluster (chromosome 7)这是我在文章上看到的一段话，miR-17-92 cluster的同源miRN ...

西点6688 请教一下各位大虾：质粒pACYC184和pBRM-Wt的具体结构是怎样的呢，谢谢！slytjiaofei http://genome-www.stanford.edu/vectordb/vector.html自己查查吧！！！lastone9853 这两个质粒pACYC184和pBRM-Wt的图谱，序列等可以在网上查到，我这有这两个载体，可以快递给你。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

依然燃 一篇国外文献中提到，细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升。是这样的吗？难道siRNA沉默不是永久性的吗？谢谢！freecell 如果是永久性的，那基因敲除的动物模型就没有用了。siRNA沉默的水平，根据基因性质，会维持或长或短，但是不是永久性的。xuezhishui 不单在细胞水平，就是体内也不可能是一劳永逸的！生命的复杂性就在于其弹性（始终处于平衡状态），这样才能保 ...

starwink 求助对基因芯片结果进行染色体富集和组织表达富集分析的软件，GOTM目前已不能进行以上两方面的分析starwink Gene Ontology Tree Machine在线分析数据库以前可以对多个基因进行组织表达和染色体分布的富集分析，现在不能用了，有其他的相关在线数据分析软件或平台吗？请指教，谢谢！！freecell Try...http://www.geneontology.org/GO.tools.microarra ...

hljzyydx 最近看到一篇文章，里面提到了5'-deoxyribose-5-phosphate(5'-dRP) lyase以及5'-dRP/AP lyase的概念但是我查了半天也没搞明白这到底是指什么，请各位好朋友指点！！谢谢大家了。。freecell http://www.brenda-enzymes.org/php/result_flat.php4?ecno=4.2.99.B1http://www.pnas.org/content/95/21/ ...

rainbubu 想研究β-catenin在某肿瘤中和细胞增殖和预后的关系，材料用存档的蜡块和冰冻，想用免疫组化来检测β-catenin的表达情况，然后想检测β-catenin的表达和细胞增殖的关系，能不能简单的看β-catenin和PCNA、ki-67之间的关系，有统计学意义就得出β-catenin和细胞增殖有相关性。但是也不能说明细胞增殖就是β-catenin表达异常的结果啊那么怎么才能说明β-catenin和 ...

liuwenbinahslyy 基因芯片数据分析时，比值大于2.0或者小于0.5被认为是有表达差异，为什么要相差两倍呢？这个比值与PCR或Western blot验证时的基因或蛋白表达差异是否是一致的(即是否也是相差两倍以上)？按理说PCR或Western blot检测表达差异根本不需要相差两倍以上，这还取决于重复实验的次数及数据的分布情况。zjubell liuwenbinahslyy wrote:基因芯片数据分析时，比值大于 ...

zhangfen5667 甲基化敏感的限制性指纹技术(MRSF)是什么？应该怎么做？谢谢！dnazyme 应该是一种表观遗传学的技术。R.Sadri et al. Rapid analysis of DNA methylation using new restriction enzyme sites created by bisulfite modification. Nucleic Acids Res. (1996) 24: 4987-4989仅供参考。zhangfen5667 能不能介绍的详细一些？或是提 ...

lnu2005 请问个位达人，有谁用过这种载体，在表达蛋白的前面有GSSGSSG 末端有SGPSSGfreecell 我把“GSSGSSG”放进google.com里面，第二个结果就是。自己为何不尝试先动手搜索一下呢？lastone9853 版主说的对～本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

callmeroger 问一个比较基础的问题，可能比较弱智检测差异为何要在蛋白和mRNA水平两个进行？据我个人理解，mRNA最终也是要翻译成蛋白的，那样的话从蛋白水平检测不是最直接的吗？mRNA水平是不是多余了？zhujoker 如果你上课的时候认真一点就知道了有一种叫转录后加工，所以在蛋白水平和mRNA水平表达不可能完全一致的。LoftyMan 因为不懂生物学的各类人群一直以为Gene决定一切，其他的都是臣服于Ge ...

kevenhui 求教高人，如何在http://www.ebi.ac.uk/网站上作多物种Pendrin蛋白保守性分析呀。gingivalis 打开网站，选择 tool - sequence analysis - ClustalW2 ，新的页面打开以后，输入fasta 格式多个序列。 然后 RUN。kevenhui 谢谢高人，问题解决了 (~R~S~S~undefined) 嘻嘻……本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shi ...

feichangkexue 请问一下确定miRNAs属于一个miRNA家族的依据是什么？有没有相关阐述的文献？谢谢！吴佰霖 序列 的相似度？freecell microRNA family classification is based on the Rfam database (check the original paper on Rfam: http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/full/31/1/439 ). The basic idea behind fa ...

miaoduan 本人刚刚开始做实验，有关wnt通路的检测，想请教激活wnt通路的方法，看资料主要有三种：1，加wnt蛋白2，LiCl抑制gsk3β3，转染wnt质粒或者点突变的β-catenin质粒不知哪种方法可行，具体如何操作呢非常感谢！！！edwardellen 加wnt3a，看过一篇CANCER CELL是这样激活的liubodoctor 我也准备做关于wnt通路的，我做侵袭方面的。楼主可否多多交流。向你学习？QQ674 ...

lsdcfhyj 以及检测PARP的裂解前后蛋白水平用的抗体是否都是一样的？edwardellen 有两者都识别的，也有专门识别剪切体不识别酶原的，用过cell signal的，两种都很好用。PARP也有可以同时识别全长和剪切体的抗体。magichunter 检测caspase-3和激活型的caspase-3分别需要两种不同的抗体，一般CST公司卖的分别包括：cleaved-caspase-3（#9664）和原形态的caspa ...