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winniw214 同样的菌液，用来提蛋白的。因为摇床问题，今天先摇了一半，离心后-80度冻存。另一半正在摇，准备明天离心冻存的。但是发现明天没有离心瓶了。由于是冻菌，不方便借别人的离心瓶。我是想可不可以将现在冻着菌的瓶子拿出来离，反正菌是一样的。但是我介意的是离心是4度，菌液冻存后从-80到4度，又累积了新的菌后又存-80，这样可以吗？紧急提问啊，在线等,谢谢！dnazyme 如果是哺乳动物肯定很多细胞死掉了.大肠也许坚强一些 ...

liuhp2158 如题，阅读文献碰到illustrator gene，不得其解，请教，谢谢各位XDJM！woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...

sophiebaby 样品是经过陈化的烟叶，比较干燥的，其表面有一定量的微生物，我需要提取这些微生物的总DNA经过buffer浸泡和摇1h左右，得到烟叶浸出液，然后双层纱布过滤，离心收集沉淀，进行常规的细菌基因组提取步骤就是裂解、抽提什么的，大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来，nanodrop只有很低的浓度，跑电泳没有完整的条带。我的下一步是要扩增16s的，有一两次有基因组条带，但是PCR也没有出来。试剂盒公司 ...

linjl010 请问各位高手，我需要将1000多和2000多的两个片段连接起来，用重叠延伸PCR技术的方法怎么也连接不起来？（重叠碱基23个）总是扩增出1000多的杂带，没3000多的目的片段，原因可能是什么？希望大家给予指点！谢谢！devil19840 你做extension overlap PCR的多么？不妨将完整的实验方法列上来，包括每步PCR的步骤和回收的步骤、方法~23bp我觉得确实还是有些勉强，尤其你的片段长，如果 ...

songyong 各位亲们：请问用免疫组化的方法检测出来的NF-kB 是已经活化了的NF-kB呢？还是无活性的也包括进去啦？谢谢ronaldo_zj 体内的细胞信号通路研究确实不好评价，不过就NF-kappaB这个通路来说，我个人觉得可以通过一下几个方法来衡量：1. 经典的NF-kappa B的活化往往都是NF-kappaB（包括p50、p65、p52等）作为转录因子活化而转位至细胞核内发挥转录调节功能。所以我觉得楼主可以首先观察和比 ...

lilililiwoody 比如我查的资料D-丝氨酸的分子量是105.09，白介素-1的分子量是17KD，载脂蛋白E的分子量是34145D，它们的单位不同，我怎么比较它们的分子量大小？谢谢各位大侠，**了！woxingwosu D：daltonKD: kilodoltons, = 1000 D,是D的一千倍lilililiwoody 谢谢版主！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

dhy481 如图，红色是TRITC标记的细胞膜上的一个蛋白，绿色是FITC连接的一段小肽，是在细胞固定前加入到培养基里的，大家帮忙看看，这是不是共定位，谢谢大家～woxingwosu 看起来好像不是共定位。如果要说共定位，或者说小肽能结合到膜上的蛋白，我认为至少在膜上的绿色至少要比其他的地方要亮的多，这样才能说明是共定位，你这个有可能是非特异性的分布而已。需要加个对照来看看吧。个人意见，呵呵～～P.S. 这个图照得太不清楚了， ...

华丽转身然后悲伤 我很想知道caspase3 的前体pro-caspase3 在细胞中的存在情况，希望大家帮帮忙zhangy1027 Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cys ...

淡叶云梦 我们前人做的质粒转染 是3.0 荧光显微镜照相 能拍出绿色荧光 但有人说3.0是找不出来的 3.1才行 请问什么是正确答案biolinkphilic 应该要带有表达荧光蛋白GFP的基因才可以吧，跟3.0和3.1有什么关系呢？求战友不吝赐教woxingwosu PCDNA3.0 和3.1都是没有荧光的，除非是克隆的时候自己加上的GFP,否则看到的荧光可能是背景。如果把显微镜的exposure时间调得很长，细胞都会看到荧光。artneer 建议使用 ...

viola2010 您好，我是新手，阅读文献时看到 TOPFLASH and FOPFLASH reporter vectors？不明白是什么？All transfections included the renilla luciferase expression vector, pRL-SV40 as a control for sample-to-sample variation in transfection.怎末理解？在顺转过程中，如何观察转染效率？zhujoker 使用GFP做转染效率对照 ...

viola2010 您好，请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思？如何构建？zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因，检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lilinling203 我正在做烟草总RNA提取的实验，osmotin的基因克隆实验，已经做了一部分了，现在正在做绿色荧光蛋白的构建，然后转染进细胞中，观察它的功能，，不知道有没有宁 ，做过这方面的实验，，请多多指点的woxingwosu 请说具体要问什么东西？lilinling203 woxingwosu wrote:请说具体要问什么东西？osmotin 与 pEGFP-C1构建时需要的酶切位点，自己设计了很多次都出现了问题的woxi ...

chenqiuling 我现在在做一个关于AP-1通路的动物实验，想问各位老鼠谁在动物身上用过SP600125，SP600125活体用药要怎么配制，文献上有提到用DMSO溶，具体要配成什么样一个浓度？xiemengxipan 请问楼主，你的实验开始了没，我也是在动物身上用SP-600125，也不知道你所问的，我想问下，你的SP-600125买了没？有多不，可以共享不，我在湖南长沙！chenqiuling 我的实验现在开始了，你 ...

Drnw 在突变库中找到密码子aACC-CCC的突变，其中ACC前的a是代表什么呢？谢谢！！！！！zhujoker 能不能够将你的原始的东西拿出来看看？Drnw Codon number 都是从起始密码开始计算的吗？是不是还有从其它地方开始计算的？woxingwosu 一般都是从起始密码子看的吧？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

字友梅 我在建立过表达细胞模型的时候，重组质粒构建好经测序是完整的目的基因，可是转到靶细胞，RT-PCR产物经测序少了86个碱基，我考虑是RNA剪接，可做western blot验证却有目的条带，且明显过表达了，我想问下大家有见过这种情况吗，我觉得基因水平都少了，怎么蛋白还有表达呢，请高手们指点迷津。谢谢！字友梅 怎么都没人理我呢，自己顶下吧zhujoker 这种情况只能说明你的载体的问题？RT-PCR产物经测序少了86个碱基， ...

bobbymm 我在做hBrf1这个基因，目前是要构建4个质粒。步骤：1、PCR引物设计，加酶切位点，扩增产物2982+56bp，跑胶鉴定。2、PCR产物跑胶，回收，phenol,chloroform,NaAc+Ethanol提纯。老板说如果测浓度太浪费sample3、双酶切，体系100ul,两个酶分别为2ul。双酶切之后提纯。（已经双酶切PGL3-basic，酶切过的在LB平板上长出3个克隆，没有酶切过的载体则是一片一片的 ...

winniw214 小提的质粒（自己配的S1、S2和S3，不是试剂盒，但是师姐用过没问题的）结果质粒浓度很低。菌液是37度，250rpm摇了11h的，应该够浓。想问一下有没有什么改进的方法？另外，关于加过S1、S2和S3之后的操作（剧烈混匀、颠倒……），我查过问过有好多不同的说法。不知道亲们平时怎么做的，哪种效果比较好？谢谢qijilaile s1,s2,s3混匀后，上下颠倒几次，不宜太剧烈hualala321 手法是最重要的，溶液1 ...

吴佰霖 miR-542-5p.h在miRBse查不到，只查到miR-542的3p和5p，h好像在miRBase的命名规则中也看不到，请教高手了baby_susan miR-542-5p.h，这个名称你从哪得到的呢，是不是本身就存在错误呢，我也是从来没见过这个写法，也认为不应该有这个命名方法biolinkphilic 一定要有原文才能进行判断zhujoker h可能代表的是人吧，但是更应该在前面，问问题前自己多查查看看，不要问不负责 ...

xinlongrui 哪位大侠在用磷酸钙转染293T，小妹有问题请教。版主woxingwosu留言:有什么具体问题可以提出来，会的人自然就回答了。另外，可以到技术区去问，响应的人可能更更多devil19840 曾经做过一段时间，最终放弃，感觉磷酸钙转染还是比较烦心。最大的问题是磷酸钙转染的试剂不能长期保存，使用了几个月之后就要更换，重新配制，而且要求试剂的精度很高，实验室要有很灵敏准确的ph计。xinlongrui 要转染 ...

gggchilly 如何进行BLAST的本地化,除了比对询问的序列与网站序列之外,怎么样才能比对自己的二条序列或多条序列?不胜感激,网上搜索的全部都是不太详细的大致的内容. 我是电脑菜鸟,急求.最好是和NCBI的官方网站一样的用户界面. 不要在DOS下操作,太难了.或 妹儿 gggchilly @ yahoo.com.cn3ks.dnazyme 基因库恐怕无法本地化，BLAST就无法本地化。adon bioedit 软件可以blast本地化，从ncbi ...